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第2章 细胞工程
第2节 动物细胞工程
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体
A级　基础达标练
一、选择题
1．下列关于细胞融合的说法，错误的是(　　)
A．动植物组织中的细胞在融合之前都需经酶处理
B．灭活病毒通过溶解磷脂双分子层诱导细胞融合
C．融合后，动植物细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息
D．可根据细胞中染色体数目和形态的差异来鉴定杂种细胞
2．植物原生质体融合和动物细胞融合相比较，正确的是(　　)
A．两者诱导融合的方法完全不同
B．用于获得植物原生质体和使动物组织分散成单个细胞的酶相同
C．两者所依据的基本原理不同
D．两者都能形成杂种细胞
3．下面对动物细胞融合技术及意义的叙述，不合理的是(　　)
A．细胞融合技术能应用于细胞遗传、细胞免疫等研究
B．可以打破生殖隔离，实现远缘杂交、获得新物种
C．杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上发展起来的
D．灭活的病毒可以诱导细胞融合，与病毒表面的糖蛋白有关
4．单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是(　A　)
①B淋巴细胞　②小鼠骨髓瘤细胞　③B淋巴细胞自身融合细胞　④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞　⑤杂交瘤细胞
A．①②③④　　　　　 B．①③⑤
C．②④ D．①③
5．(不定项)制备抗A抗原单克隆抗体的过程如下图，下列有关叙述错误的是(　　)
A．提取的B淋巴细胞有多种，是因为操作存在失误
B．题述过程诱导细胞融合的方法与诱导植物细胞原生质体融合的方法完全相同
C．通过特定的选择培养基可以将能产生抗A抗原抗体的杂交瘤细胞筛选出来
D．检测抗A抗原单抗时可选用荧光标记的A抗原作为检测试剂
二、非选择题
6．下图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：
(1)若A、B细胞为动物细胞，从A和B细胞到C细胞的过程中，常用的不同于植物细胞的诱导融合手段是______________。A、B细胞融合为C细胞的过程说明了细胞膜具有___________的特性。
(2)若A、B细胞为植物细胞，首先用______________________去掉细胞壁。由此生成的结构称为_______________。A、B细胞融合为C细胞的过程中，融合完成的标志是__________________。形成的细胞还要应用_____________________________技术培养成植株。
(3)科学家从某些能无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖的调控基因(prC)，该基因能激发许多动物细胞分裂。有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：
B级　合格达标练
一、选择题
1．下列有关动物细胞融合叙述错误的是(　　)
A．指两个或多个细胞融合成一个细胞的现象
B．可以在基因型相同或不同的细胞间进行
C．动物的体细胞融合通常伴随一次减数分裂
D．其原理是细胞膜具有一定的流动性
2．下列有关单克隆抗体的制备的叙述，正确的是(　　)
A．小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40，其B淋巴细胞的染色体数为40，融合后形成的杂交瘤细胞DNA分子数为80
B．在单克隆抗体的制备过程中，只有一次筛选
C．单克隆抗体的制备需要用到动物细胞培养、动物细胞融合和动物体细胞核移植等技术
D．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经细胞融合后有三种细胞类型(若仅考虑两两融合的情况)
3．对制备单克隆抗体与培育“番茄—马铃薯”杂种植株的共同点表述不正确的是(　　)
A．都利用了细胞膜的流动性
B．都可以用电融合法促融
C．培养环境中都需要有适量的二氧化碳
D．都需要用适宜种类的激素处理
4．新型冠状病毒可通过表面的刺突蛋白(S蛋白)与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起肺炎。制备抗S蛋白的单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵，相关叙述正确的是(　　)
A．优先选择灭活的新冠病毒免疫小鼠以激活小鼠的免疫细胞
B．用灭活的仙台病毒诱导已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合
C．经过第一次筛选获得能产生抗S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞
D．经体外培养得到的单克隆抗体可以与ACE2受体结合阻断病毒的入侵
5．(不定项)下图是两种生物细胞融合技术的示意图，关于该图的叙述，完全正确的一组是(　　)
A．a过程必须除去细胞膜，b过程需要通过细胞识别
B．若X是单克隆抗体，则甲、乙细胞分别是肿瘤细胞和经抗原刺激产生的B淋巴细胞
C．若X是苹果—梨杂种幼苗，则c过程是细胞分裂、分化
D．细胞融合技术的缺点是不能克服远缘杂交不亲和性的障碍
6．(不定项)如图是科研人员将药物与单克隆抗体连接形成的抗体—药物偶联物(ADC)的示意图，它由抗体、接头和小分子药物三部分组成，能实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。例如，用于治疗乳腺癌的Kadcyla是由阿多曲妥珠单抗和药物美坦新偶联的ADC。下列叙述正确的是(　　)
A．单克隆抗体从免疫过的B淋巴细胞释放，体现了生物膜的流动性
B．Kadcyla兼具有靶向投递(浓缩效应)和抗肿瘤的作用
C．ADC设计需综合考虑抗体选择、药物分子大小及其细胞毒性等问题
D．ADC中接头稳定性偏低会导致其在循环过程中药物分子脱落造成“脱靶毒性”
二、非选择题
7．H18杂交瘤细胞在培养过程中的凋亡现象制约着其生产能力的提高。通过基因工程可提高H18杂交瘤细胞的抗凋亡能力，相关步骤如下：
①细胞培养。将人肝癌细胞在含10%小牛血清的培养液中培养，一段时间后，用胰蛋白酶处理培养液，漂洗后调整细胞悬液浓度为1×107个·mL－1。
②免疫小鼠。向小鼠体内注射肝癌细胞悬液0.8 mL，以后每隔2周免疫1次，共免疫3次，最后1次免疫后3天，取脾脏制成细胞悬液备用。
③细胞融合及筛选。将脾脏细胞悬液和骨髓瘤细胞悬液在50% PEG作用下进行融合，筛选出能产生抗人肝癌的单克隆抗体HAb18的H18杂交瘤细胞。
④改造H18杂交瘤细胞。利用PCR技术获得小鼠的bcl－XL基因(抗凋亡基因)，构建表达载体，通过脂质体法将其导入H18杂交瘤细胞中，再筛选出抗凋亡能力明显提高的H18杂交瘤细胞。
请分析回答：
(1)步骤①中肝癌细胞合成培养液中特有的成分是___________________，培养液中还需加入一定量抗生素的目的是_______________________________________________。
(2)步骤②中，肝癌细胞免疫小鼠需在一定时间内间隔注射3次，其目的是___________________。
(3)步骤③中，除了用50%PEG促进细胞融合外，常用的生物诱导因素是________________，物理诱导方法是_________________________________。步骤④中通过脂质体法将表达载体导入H18杂交瘤细胞的过程依赖的原理是_______________________________________________。
(4)与普通抗肝癌药物相比，用抗人肝癌单克隆抗体HAb18与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是________________________________________________________。
(5)乙醇有诱导细胞凋亡的作用。为了建立H18杂交瘤细胞凋亡检测模型，科研人员利用不同浓度的乙醇溶液诱导H18杂交瘤细胞凋亡，其结果如图所示：
抗凋亡细胞株的建立与筛选应选择的诱导条件是____(用图中字母表示)。
参考答案
A级　基础达标练
一、选择题
1．
答案：B
2．
答案：D
3．
答案：B
4．
答案：A
5．
答案：ABC
二、非选择题
6．
答案：
(1) 灭活的病毒 流动性
(2) 纤维素酶和果胶酶 原生质体 生成新的细胞壁 植物组织培养
(3)
B级　合格达标练
一、选择题
1．
答案：C
2．
答案：D
3．
答案：D
4．
答案：B
5．
答案：BC
6．
答案：BCD
二、非选择题
7．
答案：
(1) 血清 防止杂菌污染
(2) 刺激小鼠产生更多的淋巴细胞
(3) 灭活的病毒 电融合法 细胞膜具有一定的流动性
(4) 能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量
(5) C
解析：
(1)步骤①中肝癌细胞合成培养液中特有的成分是血清，目的是补充细胞生长所需的未知营养物质。培养液中还需加入一定量抗生素的目的是防止杂菌污染。
(2)肝癌细胞免疫小鼠需在一定时间内间隔注射3次，其目的是增强免疫，刺激小鼠产生更多的淋巴细胞。
(3)步骤③中，除了用50% PEG促进细胞融合外，常用的生物诱导因素是灭活的病毒，物理诱导方法是电融合法。传统的脂质体是将磷脂、胆固醇或其他脂类的乙醚溶液加入DNA溶液中，经特殊处理而得到单层或双层的带DNA的脂质体小泡，其可被受体细胞内吞而实现基因转移。故步骤④中通过脂质体法将表达载体导入H18杂交瘤细胞的过程依赖的原理是细胞膜具有一定的流动性。
(4)与普通抗肝癌药物相比，用抗人肝癌单克隆抗体HAb18与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量。
(5)分析题图可知，该实验的自变量是乙醇诱导的时间及乙醇的浓度，因变量是凋亡细胞的比例；根据实验结果可知，乙醇浓度为510 mmol/L、诱导6 h、7 h时，细胞凋亡的比例最高。因此抗凋亡细胞株的建立与筛选应选择的诱导条件是510 mmol/L乙醇诱导6 h，此时凋亡细胞比例最大且诱导用时较短，故选C。
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