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广东省湛江市第二十一中学2025-2026学年高二下学期4月阶段生物试题
一、单选题
1．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（ ）
A．动物细胞培养是动物细胞工程的基础
B．原代培养是指对分瓶后细胞的初次培养
C．胰蛋白酶处理可使细胞分散成单层利于传代
D．传代培养后得到的细胞与接种的细胞的遗传信息一定相同
2．人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的培养基。下表为某培养基的成分，有关叙述正确的是（ ）
成分 牛肉膏 葡萄糖 K2HPO4 青霉素 蒸馏水
含量 10g 10g 2g 1万单位 1000mL
A．该培养基属于液体培养基，可在培养基内部形成肉眼可见的菌落
B．根据配方可知，该培养基是以葡萄糖为唯一碳源的选择培养基
C．能在此培养基上生长的微生物应具有抗青霉素的特性
D．K2HPO4的作用是为微生物的生长提供无机盐和维生素
3．下列关于消毒和灭菌的说法正确的是（ ）
A．消毒比灭菌使用的理化方法更强烈 B．操作空间、操作者的衣着和手要进行灭菌
C．接种工具、培养基一般进行湿热灭菌 D．玻璃器皿、金属用具可以干热灭菌
4．核移植技术除了研究生物学的基本问题外，在药物生产、优良种畜的培育和繁殖、拯救濒危动物、治疗性克隆等方面，具有重要的实际应用价值。下列关于动物细胞核移植技术应用的叙述，错误的是（　　）
A．细胞核移植技术可用于优良种畜的培育
B．细胞核移植技术的原理是动物细胞具有全能性
C．核移植技术与干细胞诱导技术结合，可用于修补人体损伤的器官
D．核移植技术可用于转基因动物的克隆，以保持转基因动物的性状
5．MEC1细胞是一种常用的动物上皮细胞系，下列关于MEC1培养的说法错误的是（ ）
A．在进行传代培养时需要使用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等进行处理
B．使用95% O2+5% CO2混合气体培养，CO2可维持培养液的pH
C．传代培养可以实现解除细胞的接触抑制，扩增细胞数量
D．细胞生长状况不佳的可能原因之一是培养液中缺少血清
6．蓝莓酒变酸的可能原因是（ ）
A．乳酸菌发酵 B．醋酸菌污染
C．酵母菌死亡 D．霉菌滋生
7．长穗偃麦草是小麦的一个重要野生近缘种，具有蛋白质含量高、抗多种真菌和病毒病害、耐旱、耐寒等优良性状，科学家利用植物体细胞杂交技术培育了普通小麦—长穗偃麦草杂种植株，流程如图所示。下列叙述不正确的是（ ）
A．诱导外植体形成愈伤组织的过程中需要一定比例的2，4—D和细胞分裂素的作用
B．过程③需要依赖细胞膜的流动性
C．过程④体现了细胞的全能性
D．杂种植株能表现出双亲的各种优良性状
8．各种优良纯种家畜（如荷斯坦奶牛）价格高昂，借助胚胎工程繁育是畜牧业中非常重要的手段，下列相关说法正确的是（ ）
A．需对优良品种供体母牛和代孕受体母牛进行同步发情处理
B．采集到的精子和卵细胞手应立即混合培养，以提高受精率
C．胚胎干细胞有极高的全能性，可用于获取大量的同卵多胚
D．囊胚孵化非常关键，因此不能用于胚胎分割实现无性繁殖
9．为探究血清对正常细胞和癌细胞培养的影响，用合成培养基、添加了血清的合成培养基分别培养癌细胞、正常细胞，结果如图所示。下列叙述错误的是（　　）
A．培养细胞时，环境应该是无菌、无毒的
B．实验的自变量是培养时间和细胞类型
C．相比于正常细胞，有无血清对癌细胞增殖的影响更小
D．培养细胞时，CO2的主要作用是维持培养液的pH
10．在植物组织培养过程中易获得突变体的主要原因是（　　）
A．培养基中化学成分复杂容易诱发基因突变
B．培养过程中细胞一直处于不断分裂的状态
C．细胞分裂过程中纺锤丝的形成易受抑制
D．培养过程中植物细胞DNA复制易受抑制
11．下列关于传统发酵技术和发酵工程的叙述，正确的是（ ）
A．果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中情况相反
B．家庭制作果酒、果醋和腐乳属于传统发酵
C．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
D．毛霉主要通过产生脂肪酶、蛋白酶和纤维素酶参与腐乳发酵
12．味噌是一种传统的调味品，由煮熟的大豆、盐和曲霉混合发酵而成。欲探究太空环境下是否能够进行发酵，以及太空发酵食品与地球发酵食品在风味上是否存在差异，研究团队将一小罐高曲霉、低盐的“待发酵味噌”送往国际空间站，在那里发酵一个月后返回地球，与此同时，某实验小组在地球上做了发酵对照组。与地球味噌相比，太空味噌具有更浓郁的烘烤和坚果风味。下列叙述错误的是（　　）
A．曲霉含有的蛋白酶可将大豆中的蛋白质水解为小分子的肽和氨基酸
B．“待发酵味噌”中给予高曲霉、低盐的目的是保证菌种的数量和活性
C．国际空间站环境中的微重力和辐射不会使曲霉发生基因突变
D．发酵对照组与太空实验组的“待发酵味噌”应保证大豆、盐、曲霉的量均相同
13．我国科研工作者将可表达绿色荧光蛋白的供体猕猴的胚胎干细胞（简称4CL干细胞）注射至与其遗传信息不同的猕猴胚胎中，形成嵌合胚胎，并最终得到嵌合体猴，过程如下图所示。相关叙述正确的是（ ）
A．4CL干细胞注入后仅能于受体胚胎中发育成上皮组织
B．桑葚胚阶段注入的4CL干细胞会与其他胚胎细胞发生融合
C．通过观察嵌合原肠胚的外观，能准确推断4CL干细胞的占比情况
D．嵌合体猴可能通过有性生殖将4CL干细胞的遗传信息遗传给后代
14．胎牛血清（FBS）是天然的培养基，在后期胚胎培养液（CR2后液）中添加不同浓度的FBS，对牛核移植胚胎发育的影响情况如下表所示。下列叙述错误的是（ ）
组别 培养液 卵裂率/% 囊胚率/%
对照组 CR2后液 59 13
实验组1 10%FBS+CR2后液 62 13
实验组2 20%FBS+CR2后液 68 26
实验组3 30%FBS+CR2后液 62 9
A．卵裂期胚胎内细胞的数目不断增加，但胚胎总体积不增加
B．三个实验组中促进核移植胚胎发育的适宜FBS浓度约为20%
C．添加不同浓度的FBS对核移植胚胎的发育均有促进作用
D．若统计每组实验的桑葚胚率，其数值不会低于囊胚率
15．病毒PEDV会使猪患流行性腹泻，在制备抗PEDV的单克隆抗体时加入不同浓度维生素C（VC），杂交瘤细胞增殖情况及抗体分泌情况如图和表格所示。叙述错误的是（　　）

VC/（ng·mL-1） 抗体效价
0 1：4000
5 1：4000
10 1：8000
20 1：2000
A．可用灭活病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合
B．培养杂交瘤细胞需在培养基中添加动物血清
C．10ng·mL-1VC显著促进杂交瘤细胞增殖
D．20ng·mL-1VC通过抑制细胞增殖降低抗体效价
16．猪圆环病毒2型（PCV2）是单链环状 DNA 病毒，该病毒的核衣壳蛋白Cap蛋白是PCV2基因工程疫苗研制的关键蛋白。科研人员通过基因工程构建了PCV2-Cap蛋白表达菌株，构建过程中先设计引物，通过PCR 获取Cap基因片段，经酶切处理后与质粒重组，并将其成功导入细菌，最后通过琼脂糖凝胶电泳实验对PCR 结果（图1）及 PCV2-Cap重组质粒构建是否成功（图2为检测结果）进行检测，结果如图所示，图中 Maker为DNA标准品。下列叙述错误的是（　　）
A．图示结果表明，重组质粒构建是成功的
B．构建过程中设计的引物，是依据Cap基因序列设计的
C．若含 Cap基因的重组质粒成功导入的细菌是大肠杆菌，则需用Ca2+处理细菌
D．构建基因表达载体时应用BamHⅠ一种酶处理Cap基因和质粒
二、解答题
17．I、番茄作为一种常见的水果蔬菜，在日常生活中的需求量日益增大，但是在较低温度下运输或储存的过程中容易出现冻伤的现象，从而影响番茄的口感和品质。科学家利用基因工程技术培育出抗冻的转基因番茄。下图为外源DNA和质粒上标出的酶切位点及相关基因，其中AFPs基因为抗冻基因。回答下列问题：
(1)AFPs基因的基本组成单位是______。
(2)科学家应用图中______和______两种酶切割目的基因和质粒，这样做可以避免酶切后的目的基因和质粒______或______。
II、为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。
(3)获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的______处，DNA连接酶作用于______处。（填“a”或“b”）
(4)基因工程操作的核心步骤是______。将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有花粉管通道法和______法。
(5)质粒中往往带有一个抗生素抗性基因，该抗性基因的主要作用是______。
18．取农田表层土壤样品10g，放入无菌研钵中，并注入5mL无菌水制成稀泥浆，再将稀泥浆接种到无氮培养基上进行培养。该方法可将自生固氮菌与其他细菌分离开来。阿须贝氏无氮培养基配方如下所示。回答下列问题：
甘露醇 10g (可用蔗糖代替)；磷酸氢二钾0.2g，磷酸镁0.2g；氯化钠0.1g；硫酸钙0.1g， 碳酸钙 5g；琼脂 15~18g；水 1000mL；pH=7.0.
(1)阿须贝氏培养基各成分中作为碳源的是_____；利用该培养基能分离出自生固氮菌的原理是_____。
(2)制备好的无氮培养基需用_____法进行灭菌，灭菌后，需将盛有无氮培养基的培养皿放在37℃的恒温箱中两天。随后，选取培养基上没有生长任何微生物的培养皿供实验用，这一操作的目的是_____。
(3)若需要测定样品中细菌数量采用的接种方法是_____，该方法用于微生物数量测定时，统计的菌落数往往比活菌数目_____（填“多”或“少”），原因是_____。使用后的培养基丢弃前需要进行灭菌处理，目的是_____。
19．窑湾绿豆烧酒，香醇甜美，久享盛誉，被列为江苏省新沂市地方特产。它是以优质白酒为基酒，佐以红参、桂花、砂仁、杜仲等48余味名贵中药材和冰糖、蜂蜜勾兑而成，其色宛如绿豆汤。制作的工艺流程如下图所示。请回答下列问题：
(1)绿豆烧酒的生产流程中，蒸馏后要进行快速冷却，目的是为了防止_____。
(2)上述环节中扩大培养一般使用_____（填“固体”或“液体”）培养基，扩大培养的目的是_____。
(3)菌种选育的方法除从自然界中筛选，还可以通过获得_____（答出两点）。
(4)为了筛选优势酿酒酵母菌，将从发酵罐中分离得到的酵母菌编号为T24和F12，进行酒精、SO2耐受性试验。试验结果如下图所示。
综合耐受性试验的研究结果，优势酿酒酵母菌的类型是_____，并说明理由_____。
20．双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合。目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用，下图1是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程，图2是某双特异性抗体作用图，请分析回答下列问题：
(1)对③筛选出的杂交瘤细胞，还需进行______和______，才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
(2)单克隆杂交-杂交瘤细胞在体外培养时，需要满足的条件是充足的营养，无菌无毒的环境，适宜的______和适宜的气体环境等。
(3)临床试验发现，从小鼠腹水中提取抗体具有外源性，直接注入人体治疗效果大大降低，因此鼠源性的双特异性单克隆抗体在注射到人体前需要进行人源化改造，除抗原结合区域外，其他部分都替换为人抗体区段，目的是降低______。
(4)与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是______。
(5)从图中可以看出，单克隆抗体的制备过程运用了动物细胞工程中的______和______两大技术。
21．科学家通过CRISPR/Cas9基因编辑技术成功治疗罕见的尿素代谢疾病—氨基甲酰磷酸合成酶1缺陷症，实现了为单个病患量身定制基因编辑治疗。利用CRISPR/Cas9复合体进行基因编辑时，复合体首先会定位非模板链目标序列上的PAM序列，如5′-NGG-3′位点（N表示任意一种碱基），然后利用向导RNA（sgRNA），与该位点5′端相连的序列互补配对，若能够互补，Cas9会切割互补序列某位点，可实现基因定向改造，如图所示。回答下列问题：
(1)科学家通过CRISPR/Cas9基因编辑技术实现精准治疗的关键在于设计一条精准识别异常基因的sgRNA，其原理是_______。Cas9催化DNA分子双链上的____化学键断裂。
(2)该系统在寻找靶位点时，可能在非目标位置发生切割，原因是______，因此在设计sgRNA时，sgRNA的长度尽可能______（选填“长”或“短”）。
(3)设计sgRNA需要患者突变的氨基甲酰磷酸合成酶1（CPS1）基因序列，科学家根据正常人体细胞中CPS1基因序列作为参考设计引物，以______为模板进行PCR扩增，得到突变CPS1基因，再以CPS1基因设计分子探针，靶向基因组分析发现，突变CPS1基因模板链第1003位碱基由C变为T，第2140位碱基由G变为T，请从下图分析患者发病的原因______。
(4)十年来，华人科学家张峰及其团队发现的CRISPR/Cas9广泛应用于生物学的各个领域，今年2月，张峰团队又发现了基因编辑新系统——TIGR-Tas系统，其编辑原理为tigRNA引导Tas蛋白到特定切割位点，Tas蛋白在间隔区第5位碱基互补的3′端切割双链DNA。如图所示：
对比CRISPR/Cas9系统，据图分析TIGR-Tas系统的优点_________。
参考答案
1．A
2．C
3．D
4．B
5．B
6．B
7．D
8．A
9．B
10．B
11．B
12．C
13．D
14．C
15．D
16．D
17．(1)脱氧核糖核苷酸
(2) BamHI HindⅢ 自连 反接
(3) a a
(4) 基因表达载体的构建 农杆菌转化
(5)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
18．(1) 甘露醇 该培养基中无氮源，自生固氮菌能利用空气中的氮气来生长繁殖，没有固氮能力的微生物生长会受到抑制
(2) 湿热灭菌/高压蒸汽灭菌 保证无氮培养基未被杂菌污染
(3) 稀释涂布平板法 少 当两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落 防止培养基中的微生物污染环境
19．(1)温度过高杀死酒曲中的微生物
(2) 液体 增加菌种数量
(3)诱变育种、基因工程育种（或细胞工程育种、杂交育种，）
(4) F12 酒精浓度与SO2含量相同的条件下，F12的发酵速率均高于T24，F12酵母菌的耐受性高于T24的酵母菌，因此优势酿酒酵母菌的类型是F12
20．(1) 克隆化培养 抗体检测
(2)温度、pH和渗透压
(3)免疫排斥反应
(4)双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞
(5) 动物细胞培养 动物细胞融合
21．(1) sgRNA与目标基因发生碱基互补配对 磷酸二酯键
(2) 非目标位置存在与靶位点高度相似的序列（或sgRNA较短，特异性低） 长
(3) 患者DNA 突变CPS1基因发生碱基对的替换，使转录出的mRNA上终止密码提前出现，翻译提前终止导致肽链变短，CPS1活性降低或丧失
(4)tigRNA配对目标DNA的两条链，特异性更强；（TIGR-Tas系统不依赖PAM序列，可应用范围更广；TIGR-Tas系统能在目标DNA的特定位点切割，编辑更精准）

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