资源简介

(共93张PPT)
第48讲　微生物的培养技术及应用
核心考点 考情分析
1.微生物的基 本培养技术 1.命题特点：常以选择题形式考查，偶见非选择题。核心考查微生物培养的原理与 操作流程。
2.备考重点：掌握培养基和无菌技术，结合实例理解微生物筛选和计数，重点关注 平板划线法和稀释涂布平板法的应用
2.微生物的选 择培养和计数
考点一　微生物的基本培养技术
必备知识·夯基
1. 培养基
（1）培养基的概念、类型和用途
（2）培养基的组成
①一般都含有 、 、 和无机盐等营养物质。
②需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
微生物 对培养基的需求
乳酸菌 添加
霉菌 将培养基调至 性
细菌 将培养基调至 性
厌氧微生物 提供 的条件
水　
碳源　
氮源　
维生素　
酸　
中性或弱碱　
无氧　
特别提醒：判断微生物是自养还是异养时，要以碳源为标准，培养基中无 有机碳源，微生物以大气中二氧化碳为碳源时，为自养微生物；若培养基 中含有机碳源，则培养的为异养微生物。判断时不能以氮源为标准，如根 瘤菌虽然能固氮，但是需要从豆科植物获取糖类等有机碳源，属于异养微 生物。
2. 无菌技术
（1）目的：获得 的微生物培养物。
（2）关键：防止 污染。
纯净　
杂菌　
（3）常用方法：灭菌和消毒。
教材拾遗：〔选择性必修3 P10“相关信息”〕生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中部分微生物的方法。
3. 微生物的纯培养
（1）概念辨析
（2）酵母菌纯培养
的操作步骤
4. 平板划线法的操作步骤
特别提醒：平板划线法操作中几次灼烧接种环的目的
1. 判断正误
提示：不含氮源的平板可用于固氮菌的培养。
√
×
√
提示：使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能 直接丢弃，以免污染环境。
提示：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
×
×
提示：倒平板时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将 锥形瓶中的培养基（10～20 mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖， 不能完全打开皿盖。
×
√
氮
元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的　
关键能力·提升
考向一　培养基和无菌技术
1. （2025·吉林长春期末）如表为某培养基的配方，下列叙述正确的是 （　　）
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 亚甲蓝 蒸馏水
含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A. 从物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别 培养基
B. 该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
C. 该培养基缺少提供无机盐的物质
D. 该培养基调节合适的pH后就可以接种使用
√
解析： 　题述培养基成分中不含琼脂，不属于固体培养基，A错误；培养 基成分中的K2HPO4可提供无机盐，C错误；培养基调节合适的pH后需要经 过灭菌才能接种使用，D错误。
2. （2022·湖北高考4题）灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的 操作。下列叙述正确的是（　　）
A. 动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行
B. 微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C. 为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D. 可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
√
解析： 　环境中的微生物对动、植物细胞DNA提取的材料研磨、过滤等 操作无影响，故不需要在无菌条件下进行，A错误；抗生素能够杀死细 菌，动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，但微生物如细 菌的培养基中不能添加抗生素，B错误；高温变性的蛋白质仍可作为微生 物的氮源，可以用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，C错误； 对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等可以采用湿热灭菌法进行灭 菌，也可以采用干热灭菌法进行灭菌，D正确。
考向二　利用平板划线法分离微生物
3. （2024·湖南高考6题）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示， 下列操作正确的是（　　）
A. ①②⑤⑥ B. ③④⑥⑦
C. ①②⑦⑧ D. ①③④⑤
√
解析： 由图可知，②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能 将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线 不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确，故选D。
4. （2025·广东佛山调研）如图为实验室中酵母菌纯培养过程的部分操作 步骤，下列说法正确的是（　　）
A. 微生物的纯培养物就是指不含代谢废物的微生物培养物
B. 步骤①中，用手触摸估计培养基冷却至室温后开始倒平板
C. 步骤①使用的培养基制备过程是先调pH再灭菌
D. ③到④过程中，每次划线后都需要灼烧接种环并蘸取菌液
√
解析： 　由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，A错误；步 骤①中，用手触摸估计培养基冷却至50 ℃左右时，开始倒平板，B错误； ③到④过程中，每次划线后对接种环进行灼烧处理，是为了杀死接种环上 残留的菌种，使下次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端， 不需要重新蘸取菌液，D错误。
考点二　微生物的选择培养和计数
必备知识·夯基
1. 选择培养基与鉴别培养基
种类 特点 用途 举例
选择
培养基 允许特定种类的微生物生长， 同时 其他种 类微生物生长 从众多微生 物中分离所 需的微生物 以尿素为唯一氮源 的培养基分离得到 菌
鉴别
培养基 根据微生物的代谢特点在培养 基中加入某种 或 化学药品，进而产生特定的颜 色或其他变化 鉴别不同种 类的微生物 用 培养基鉴别大 肠杆菌
抑制或阻止　
尿素分解　
指示剂　
伊红—亚甲
蓝　
2. 微生物的选择培养和计数
（1）稀释涂布平板法
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个 ， 来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出 样品中大约含有多少活菌。
单菌落　
②操作过程
特别提醒：根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算公式 为：每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M。其中C代表某一稀释度下平 板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL）， M代表稀释倍数。
（2）微生物的数量测定方法
①显微镜直接计数法
特别提醒：显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，但是通过一定的 辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以 通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。
②间接计数法——活菌计数法（即稀释涂布平板法）
3. 活动：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（1）实验原理
（2）操作步骤
教材拾遗：〔选择性必修3 P19“探究·实践”〕本活动初步筛选了能分解 尿素的细菌，请进一步借助于生物化学的方法来鉴定所分离的菌种：分解 尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强， 在培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该细菌能够 分解尿素。
4. 分解纤维素的微生物的分离
（1）分离方法与原理
（2）纤维素分解菌的培养基成分及鉴定原理
1. 判断正误
提示：血细胞计数板不适用于微小的细菌计数。
提示：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落，故稀 释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
×
√
×
提示：显微镜直接计数法不能区分细菌的死活，因此统计的结果一般是活 菌数和死菌数的总和。
×
2. 规范表达
（2）〔选择性必修3 P18“探究·实践”〕在统计平板上的菌落时，需每 隔24 h观察统计一次，要选取菌落数目稳定时的记录作为结果的原因 是 。
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的
是一个菌落　
繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落特征，可能导致遗漏　
关键能力·提升
考向一　微生物的选择培养
1. （2025·黑吉辽蒙高考4题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐 受且降解金霉素（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使 用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（　　）
A. 以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B. 逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C. 配制选择培养基时，需确保pH满足实验要求
D. 用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
√
解析： 　该研究的目的是筛选出高耐受且降解金霉素能力强的菌株，可 以以金霉素为唯一碳源制备选择培养基进行筛选，且逐步提高培养基中金 霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株，A、B正确；微生物培养需要适宜的 pH等，C正确；稀释涂布平板法需用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表 面，D错误。
2.（2025·江西高考15题改编）为高效检测抗菌剂的抗菌效果，研究人员构建了能够表达外源荧光素酶的重组菌Q，将其接种到有足量荧光素的液体培养基中，一段时间后添加待测抗菌剂，定时检测培养液的荧光强度。下列有关该实验的叙述，错误的是（　　）
A.需要设置一个对照组保证检测结果的准确性
B.实验过程中所用的培养基是一种鉴定培养基
C.在重组菌Q胞内的荧光素酶可催化荧光素水解
D.培养液的荧光强度变化可作为抗菌效果的判断依据
√
解析： 　实验中需设置不加抗菌剂的对照组，以排除菌体自然裂解等因素的影响，确保荧光强度变化由抗菌剂引起，A正确。重组菌Q已构建成功，实验目的是检测抗菌效果，所用培养基含足量荧光素，属于鉴定培养基，B正确。荧光素位于胞外，荧光素酶在胞内，两者无法直接接触反应。只有当菌体裂解后酶释放至胞外，才能催化荧光素发光，C错误。抗菌剂有效时，菌体死亡裂解，荧光素酶释放催化荧光素，荧光强度显著增加；无效时，菌体存活，酶滞留胞内，荧光强度变化小。因此，荧光强度变化可直接反映抗菌效果，D正确。
题后归纳：两种纯化方法的比较
考向二　微生物的分离和计数
3. 某生物兴趣小组完成了“某果园土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，具体操作流程如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A. 通过步骤①～③的处理将土壤稀释了1 000倍
B. 稀释涂布平板法统计得到的结果通常比实际活菌数目偏高
C. ④⑤两种接种方法均可用微生物的分离、纯化与计数
D. 若步骤④平板上统计的平均菌落数为160个，则10克土样中的菌株数约 为1.6×108个
√
解析： 　观察可知，步骤①是将10 g土样加入90 mL无菌水，该步骤稀释 了10倍；步骤③是取0.5 mL溶液依次加入4.5 mL无菌水，共稀释1 000 倍，那么从步骤①到③总的稀释倍数为10 000倍，A错误；稀释涂布平板 法统计时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌 落，所以统计得到的结果通常比实际活菌数目偏低，B错误；④是稀释涂 布平板法，可用于微生物的分离、纯化与计数；⑤是平板划线法，可用于 微生物的分离、纯化，但不能用于计数，C错误；步骤④平板上统计的平 均菌落数为160个，所用稀释液体积为0.1 mL，稀释倍数为10 000，则10 g 土样中的菌株数约为160÷0.1×10 000×10 ＝1.6×108个，D正确。
4. （2025·云南丽江一模）如图为研究人员对纤维素分解菌的分离操作 （A组）和计数操作（B组）过程示意图。下列有关叙述错误的是（　　）
A. ④和⑤所用培养基从物理性质分析，区别是④培养基中没有添加琼脂
B. ⑨计数得到的细菌数与用显微镜直接计数法得到的细菌数相比较多
C. ④的培养基应以纤维素为唯一碳源，还需满足微生物生长对pH、特殊 营养物质等的需求
D. 可以在培养基中加入刚果红来鉴别纤维素分解菌
√
解析： 　④和⑤所用培养基从物理性质分析，④是液体培养基，⑤是固 体培养基，两者的区别是⑤中添加了琼脂，A正确；⑨计数方法为稀释涂 布平板法，只能统计活菌数，而显微镜直接计数法无论活菌还是死菌都统 计在内，因此稀释涂布平板法统计得到的细菌数与用显微镜直接计数法得 到的细菌数相比较少，B错误；该实验是为了分离得到纤维素分解菌，培 养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用纤维素的微生物才能生长繁 殖，从而筛选出纤维素分解菌，此外还需满足微生物生长对pH、特殊营养 物质等的需求，C正确；当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的 复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可 通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌，D正确。
考教衔接　微生物的分离和计数
（2025·山东高考15题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究 不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情 况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是 （　　）
组别 压强 纤维素 淀粉 菌落
① 常压 － ＋ －
② 常压 ＋ － －
③ 高压 － ＋ －
④ 高压 ＋ － ＋
注：“＋”表示有；“－”表示无
A. 可用平板划线法对该菌计数
B. 制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌
C. 由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下
生长
D. 由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长
√
解析： 　对微生物进行计数时应该用稀释涂布平板法接种，A错误；制备 培养基的过程中，应先进行高压蒸汽灭菌再倒平板，B错误；②④组的自 变量是压强，实验结果是常压下无菌落，高压下有菌落，说明在以纤维素 为唯一碳源的培养基上，该菌可在高压下生长，C错误；③④组的自变量 是唯一碳源的种类，实验结果是以淀粉为唯一碳源时无菌落，以纤维素为 唯一碳源时有菌落，压强条件均为高压，说明高压下该菌不能在以淀粉为 唯一碳源的培养基上生长，D正确。
〔选择性必修3 P20“练习与应用”〕
　　地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40％～60％能被土 壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生 物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装 面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成 红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我 们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合 物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会 出现以这些菌为中心的透明圈。
考法1：考查纤维素分解菌的筛选流程
1.纤维素是地球上储量丰富的可
再生资源，经纤维素酶催化水解
后，可被微生物发酵利用。筛选
高产纤维素酶菌株的流程如图所示。下列说法错误的是（　　）
A.步骤Ⅰ～Ⅲ均需在超净台上进行，Ⅰ和Ⅲ均为稀释涂布平板法接种
B.培养基②的每一个菌落均是由一个细菌细胞繁殖而来的子细胞群
C.步骤Ⅱ应该挑选直径较大的单菌落进行转接
D.④从功能来看应为鉴别培养基，以便选出透明圈大的菌落作目的菌种
√
解析： 　培养基②的菌落可能存在由两个或多个细菌细胞繁殖而来的子细胞群，B错误；培养基④富含纤维素且应含有能与纤维素形成红色复合物的刚果红，从功能上来看应为鉴别培养基，D正确。
考法2：考查“透明圈”的含义
2. 研究人员筛选和分离纤维素分解菌，在刚果红培养基平板上，筛选到有 透明降解圈的菌落，所形成的菌落如图所示。相关说法错误的是（　　）
A. 纤维素的基本单位是葡萄糖
B. 透明圈的形成是由于纤维素被分解后刚果红不能与纤维 素结合形成红色复合物
C. 透明圈可能是分解刚果红的菌种形成的，为确定得到的是纤维素分解菌还需进行发酵产纤维素酶实验
D. 菌落②的中心区域最大，是需要筛选和分离的目标菌株
√
解析： 　刚果红可以与纤维素结合形成红色复合物，而当平板上纤维素 被纤维素分解菌分解后，则无法形成红色复合物，从而出现透明圈，B正 确；使用刚果红筛选和分离纤维素分解菌存在假阳性反应，即透明圈可能 是由其他微生物降解刚果红而形成的，因此为确保是否得到目的菌，需要 进行发酵产纤维素酶实验，C正确；菌落①的透明圈范围大，而且菌落 小，说明菌落①降解纤维素的能力强，因此菌落①是需要筛选和分离的目 标菌株，D错误。
高考真题感悟
一、命题角度练
角度一 围绕微生物的纯培养，考查科学探究
1.（2025·河北高考18题改编）隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一。从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述错误的是（　　）
A.隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源
B.采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻
C.选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长
D.适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量
√
解析： 　由题干信息知，隐甲藻属于异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片（富含有机碳）上生长繁殖，说明隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确；采集的腐烂叶片上含有隐甲藻，其经湿热灭菌后会杀死叶片上的隐甲藻，B错误；选择培养基中加入能抑制细菌生长而对隐甲藻无毒害作用的抗生素，有利于获得隐甲藻，C正确；隐甲藻属于好氧型藻类，适当提高发酵时的通气量和搅拌速率可增加溶氧量，有利于隐甲藻的生长繁殖，以提高DHA产量，D正确。
2. （2025·江苏高考11题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如 下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（　　）
A. 制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌
B. 将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布
C. 连续划线时，接上次划线的起始端开始划线
D. 鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存
√
解析： 　紫外线常用于消毒，以杀死空气中或物体表面的微生物，不能 对培养基进行灭菌，A错误；可用稀释涂布平板法分离土壤中的微生物，B 正确；用划线法接种时，需灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末 端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要 将最后一次的划线与第一次的划线相连，C错误；鉴定后的致病菌，可接 种在斜面培养基上于冰箱内短期保存，D错误。
角度二 围绕微生物的选择培育，考查科学探究
3. （2024·重庆高考13题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微 生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪 便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验 获得目的菌株，正确的是（　　）
A. ①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落
B. ②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验
C. ③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙
D. 粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少
√
解析： 　平板划线法无需稀释，A错误；由图可知，②筛选不能在尿素唯 一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续 的实验，B错误；所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不产 生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到 甲、乙，C正确；由图可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时 分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的菌株使甲能够产生 NH3，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的减少，D错误。
4. （2025·四川高考8题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会 危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌，将总菌量 相同的X、Y、X＋Y（X∶Y＝1∶1）分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨 液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率＝剩余量/添 加量×100％），结果如图。下列叙述正确的是（　　）
A. 用平板划线法能测定X菌组中的活菌数
B. Y菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高
C. 混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种
D. 能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料
√
解析： 　平板划线法主要用于微生物的分离和纯化，不能用于测定活菌 数，测定活菌数常用稀释涂布平板法，A错误；Y菌组微塑料残留率较高， 说明Y菌对微塑料的降解能力相对较弱，而不是菌浓度高，微塑料残留率 与菌对微塑料的降解能力有关，而非直接与菌浓度相关，B错误；由图可 知，X＋Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组，说明混合菌种 对微塑料的降解能力高于单一菌种，C正确；该培养基中含有蛋白胨，能 在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等，但不 一定都能降解微塑料，D错误。
5. （2025·贵州高考15题）金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌， 可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫 体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是（　　）
A. 可利用Ma开发成微生物杀虫剂
B. 为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样
C. 稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D. 接种培养Ma时使用的器具需消毒
√
解析： 　金龟子绿僵菌（Ma）作为昆虫病原真菌，可通过寄生导致害虫 死亡，符合微生物杀虫剂的特点，可用于生物防治，A正确；僵化死亡的 昆虫体内含有大量Ma菌体，因此从研磨的僵虫组织取样是分离Ma的合理 方法，B正确；稀释涂布平板法可通过梯度稀释和菌落形成来分离纯化微 生物，适用于分离样品中的Ma，C正确；微生物培养中，接种环等直接接 触菌种的器具需严格灭菌（如灼烧灭菌），而非仅消毒，消毒无法彻底杀 灭微生物的芽孢或孢子，D错误。
盐浓度为60 g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条
件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制　
稀释涂布平板法　
用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来
自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在
内　
课时跟踪检测
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1. （2025·江苏南通一模）解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解，转 变为可溶性化合物。下表是研究人员从餐厨垃圾废液中筛选解钾细菌的培 养基配方，相关叙述正确的是（　　）
成分 钾长石粉 蔗糖 Na2HPO4 CaCO3
含量/g·L－1 10 10 2 1
成分 （NH4）2SO4 NaCl 酵母膏 MgSO4·7H20
含量/g·L－1 1 0.1 0.5 0.5
A. 培养基中的钾长石粉属于可溶性钾，为目的菌提供无机盐
B. 按表中配方配制好的培养基应先灭菌再将pH调至弱碱性
C. 餐厨垃圾废液梯度稀释后涂布于选择培养基表面倒置培养
D. 应选择透明圈直径与菌落直径比值较小的菌落进一步进行纯化
√
解析： 　解钾菌能将土壤中难溶性含钾化合物分解，转变为可溶性化合 物。培养基中的钾长石粉属于不溶性钾，钾长石粉为唯一钾源，目的是筛 选出解钾菌，A错误。按表中配方配制好的培养基应先将pH调至弱碱性再 灭菌，B错误。餐厨垃圾废液梯度稀释后涂布于选择培养基表面倒置培 养，培养基皿底有标记，C正确。应选择透明圈直径与菌落直径比值较大 的菌落，进一步进行纯化，比值较大，解钾细菌分解能力越强，D错误。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
2. （2026·江苏五市十一校联考）消毒和灭菌是生物学实验中的常规操 作。下列有关叙述正确的是（　　）
A. 涂布器及实验者的衣物、手等无需进行灭菌，消毒即可
B. 在高压蒸汽灭菌时，保温保压结束后应立即关闭电源、打开排气阀
C. 倒平板时在火焰附近敞开皿盖，将培养基倒入培养皿，立即盖上皿盖
D. 用紫外线对实验室照射之前，适量喷洒苯酚等消毒液可以加强消毒
效果
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　涂布器需灼烧灭菌，而实验者的手和衣物仅需消毒，A错误；高 压蒸汽灭菌结束后应让压力自然下降至零，再打开排气阀，立即打开会导 致培养基喷出，B错误；倒平板时应将皿盖打开一条缝隙进行操作，防止 杂菌污染，C错误；紫外线可杀灭空气中的微生物，喷洒苯酚可增强物体 表面消毒效果，两者结合能提高消毒效果，D正确。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
3. （2026·江苏镇江期中）如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤， 下列有关叙述正确的是（　　）
A. 步骤①操作时，需等培养基冷却到20 ℃再进行
B. 步骤②操作时，需将接种环灼烧后立即蘸取菌液
C. 步骤③操作时，将皿盖全部打开，结束时再盖上
D. 步骤④划线结束后，需在培养皿的皿底做上标注
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　步骤①是倒平板，倒平板时需等培养基冷却到50 ℃左右时进 行，温度过高会在培养皿盖上形成过多的冷凝水，影响后续培养；温度过 低培养基会凝固，无法倒平板，A错误。步骤②是接种，接种环灼烧后需 冷却后再蘸取菌液，若立即蘸取菌液，高温会杀死菌种，B错误。步骤③ 是进行平板划线操作，划线时应将皿盖打开一条缝隙，而不是全部打开， 以防止空气中的杂菌污染培养基，结束时再将皿盖盖上，C错误。步骤④ 划线结束后，需在培养皿的皿底做上标注，因为在微生物培养过程中，培 养皿通常是倒置的，在皿底标注便于观察和记录，D正确。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
4. （2025·江西名校联考）柑橘是江西省的重要经济水果，但在贮藏和运 输过程中，由真菌引起的采后病害严重危害柑橘产业。青绿霉病是最常见 的病害，从柑橘果皮中筛选出拮抗细菌是有效的防治手段。拮抗细菌的筛 选过程如下，下列说法正确的是（　　）
A. 样本采集时需对果皮表面进行消毒，
然后将果皮样本加到清水中洗脱细菌
B. 图示细菌分离使用的技术为稀释涂
布平板法，该方法还可用于细菌计数但结果偏大
C. 初步筛选时将细菌和青绿霉真菌共培养，测量真菌生长直径，图中a抑 制效果更好
D. 为进一步评估拮抗菌的效果，可以测定其培养滤液对真菌生长和繁殖 的抑制效果
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　避免杂菌污染，需将果皮样本加到无菌水中获取目的菌，A错 误；稀释涂布平板法用于微生物的分离计数，统计结果比实际值偏小，这 是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，B 错误；为获得拮抗细菌，需将其与青绿霉真菌共同培养，检测其对真菌的 抑制效果，真菌生长直径越小，抑制效果越好，因此b抑制效果好，C错 误；通过测定拮抗菌培养滤液对真菌生长和繁殖的抑制作用，可以直观了 解拮抗菌的抗菌活性，D正确。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
5. （2025·贵州铜仁一模）某地发生少数人吃冰激凌后腹泻的现象，推测 可能是冰激凌中大肠杆菌超标（1 mL自来水检测出的菌落总数不可以超过 100个），于是对冰激凌进行检测。下列叙述错误的是（　　）
A. 在检测过程中可配制特定的培养基来鉴别是否存在大肠杆菌
B. 利用活菌计数必须对冰激凌融化后形成的原液进行梯度稀释
C. 在检测过程中需要设置完成灭菌的空白培养基作为对照组
D. 进行检测时也可以利用细菌计数板和显微镜进行直接计数
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　在微生物的检测过程中，可利用伊红—亚甲蓝培养基鉴定大肠 杆菌，大肠杆菌在该培养基上会形成具有特殊金属光泽的黑色菌落，A正 确。对冰激凌融化后形成的原液可以使用滤膜法对细菌进行计数，不一定 必须对原液进行梯度稀释，B错误。在检测过程中设置完成灭菌的空白培 养基作为对照组，其目的是检测培养基是否被杂菌污染。若空白培养基上 没有菌落生长，说明培养基灭菌合格，实验结果可靠，C正确。除了活菌 计数法外，还可以利用细菌计数板和显微镜进行直接计数，D正确。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
6. （2025·福建龙岩月考）喹啉是工业废水中的含氨污染物，易通过水体 污染环境。科研人员欲从废水处理厂的活性污泥中筛选高效喹啉降解复合 菌群，过程如图。下列叙述错误的是（　　）
A. 图中无机盐培养基是选择培养基，以喹啉作为唯一氮源
B. 过程①接种前需对所用器具及培养基进行灭菌处理
C. 过程②需要逐级提高无机盐培养基中喹啉浓度
D. 过程③采用平板划线法观察并统计菌群数量
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　图中无机盐培养基是选择培养基，以喹啉作为唯一氮源，其目 的是增加目的菌的数量，A正确；过程①接种前需对所用器具及培养基进 行灭菌处理，保证获得的菌种来自样品，B正确；过程②需要逐级提高无 机盐培养基中喹啉浓度，进而获得能高效降解喹啉的细菌，C正确；过程 ③采用稀释涂布平板法观察并统计活菌数量，D错误。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
7. （2025·广东茂名阶段考）实验小组采用鲜血琼脂平板，从环境中筛选 获得高效降解血红蛋白的菌株，下列操作不恰当的是（　　）
A. 取样——应从屠宰场地下水道中取样
B. 分离——可用平板划线法对菌株分离
C. 筛选——通过溶血圈直径大小比较菌株降解能力
D. 培养——利用添加琼脂的培养基大规模培养菌株
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　屠宰场地下水道中含有较多血红蛋白等物质，更有可能存在高 效降解血红蛋白的菌株，从这里取样是合理的，A不符合题意；平板划线 法是常用的分离微生物的方法之一，可以将聚集的菌株逐步稀释分散，从 而获得单个菌落实现分离，B不符合题意；高效降解血红蛋白的菌株会使 周围的血红蛋白被降解，从而形成溶血圈，溶血圈直径越大，通常说明菌 株降解血红蛋白的能力越强，可以通过比较溶血圈直径大小来筛选降解能 力强的菌株，C不符合题意；添加琼脂的培养基是固体培养基，固体培养 基一般用于分离、鉴定、计数等，大规模培养菌株通常使用液体培养基， 这样可以使菌体与营养物质充分接触，更有利于菌体的生长繁殖，D符合 题意。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
8. （2025·江苏盐城联考）某生物兴趣小组试图从土壤中分离分解尿素的细菌，流程如图所示。下列说法错误的是（　　）
A. 该实验配制的培养基中不含蛋
白胨
B. 图中菌液稀释10倍时所加的无
菌水的量都为9 mL
C. 实验的合理程序为“计算→称量→溶解→灭菌→倒平板→接种土壤样本 →菌落计数”
D. 三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1 g土壤样本中约 有分解尿素的细菌5×107个
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　本实验的目的是从土壤中分离分解尿素的细菌，该实验配制的 培养基应以尿素为唯一氮源，而蛋白胨能提供氮源，所以蛋白胨不能作为 配制本培养基的原料，A正确；题图中菌液稀释10倍时需要加入1 mL菌液 和9 mL无菌水，B正确；实验设计时，需要在溶解之后，灭菌之前调节 pH，C错误；根据题图可知，对菌液进行稀释时共稀释了106倍，分别接种 了3个培养皿，一段时间后，三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个 菌落，则1 g土壤样本中约有分解尿素的细菌（54＋46＋50）÷3÷1×106 ＝5×107（个），D正确。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
9.（2025·河北石家庄一模）蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧菌。下列叙述错误的是（　　）
A.常用高压蒸汽灭菌法对平板进行灭菌
B.可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌
C.出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果
D.污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 　培养基平板常用高压蒸汽灭菌，A正确；接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌，B正确；出现噬菌斑说明有能分解嗜水气单胞菌的微生物，不一定是蛭弧菌作用的结果，C错误；污水中含有多样的有机物，可以为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源，D正确。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
10. （2025·宁夏银川模拟）尿素[CO（NH2）2]含氮量高，化学性质相对 稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥，但若不经细菌的分解，就不能 更好地被植物利用，某科研小组为了将土壤中分解尿素的细菌纯化培养， 进行了如下操作，请回答相关问题：
成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H 2O 葡萄糖 尿 素 琼脂
含量（g） 1.4 2.1 0.2 10.0 1.0 15.0
操作将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1 000毫升
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
在微生物
学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长
的培养基　
没有菌落生长
牛肉膏蛋白胨培养基上的
菌落数显著多于选择培养基
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 根据表格分析，选择培养基是指在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本实验中有两组对照，一组是未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板和选择培养基平板，可证明灭菌是否彻底；另一组是已接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板。前一组的平板上如果没有菌落生长，可以说明培养基在使用前未被杂菌污染；后一组的平板上如果菌落数显著多于同一稀释度的选择培养基平板上的，可以说明选择培养基具有选择作用。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 统计菌落数目一般使用稀释涂布平板法，将5 g土壤溶于45 mL无菌水，再稀释105倍，按图[1]稀释涂布平板法接种方式，将0.1 mL样品接种到3个培养基上，统计菌落数目为134、131、137，据此可得出每克土壤中的纤维素分解菌活菌数约为（ 134＋131＋137）÷3÷0.1×10×105＝1.34×109个。
1
稀释涂布
平板法
1.34×109
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
（3）分解尿素的细菌能合成 ，催化尿素分解产生的NH3可以作为 细菌生长的氮源。如果培养基中加入了酚红指示剂，尿素分解的产物NH3 会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，根据功能划分该培养基属 于 培养基。
解析： 分解尿素的细菌能合成脲酶，催化尿素分解产生的 NH3 可以作为细菌生长的氮源。如果培养基中加入了酚红指示剂，尿素分解的产物 NH3会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，根据功能划分该培养基属于鉴别培养基。
脲酶
鉴别
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
解析： 土壤中的某些固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，设计实验时用到的是无氮源培养基，然后检测是否有固氮菌即可。简要思路、预期结果和结论见答案。
将平板上分离得到
的细菌接种到无氮源的培养基上培养一段时间后，观察是否有出现菌落。
若能长出菌落，说明该菌为固氮菌，否则不是固氮菌
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

展开更多......

收起↑