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第48讲微生物的培养技术与应用
内容索引
NEIRONGSUOYIN
考点二
微生物的选择培养和计数
微生物的基本培养技术
考点一
微生物的基本培养技术
考点一
梳理 必备知识
1.培养基的配制
(1)培养基的概念、用途和类型
①概念:人们按照微生物对 的不同需求,配制出供其 的营养基质。
②用途:用以 微生物或积累其 。
③种类:按物理性质分
营养物质
生长繁殖
培养、分离、鉴定、保存
代谢物
(2)培养基的配方
①主要营养物质:水、 、氮源、 。
②其他条件:pH、 和氧气。如表:
微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物
特殊 需求 添加 _______ pH调至 _____ pH调至 _____________ _____
碳源
无机盐
特殊营养物质
维生素
酸性
中性或弱碱性
无氧
拾遗 挖掘
(1)(选择性必修3 P10“旁栏思考”)培养基中加入氮源的原因是培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
(2)(选择性必修3 P10“相关信息”)牛肉膏和蛋白胨含有的营养物质有糖、维生素和有机氮等。
2.无菌技术
(1)目的:获得 的微生物培养物。
(2)关键:防止 污染。
(3)消毒与灭菌的比较
项目 消毒 灭菌
作用强度 较为 的物理、化学或生物等方法 的理化方法
作用程度 杀死物体表面或内部 微生物 杀死物体内外 的微生物
芽孢和孢子 一般不能杀灭 能杀灭
适用对象 实验操作的空间、操作者衣着和手 用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等
纯净
杂菌
温和
强烈
一部分
所有
(4)常见物品的消毒或灭菌方法
①消毒方法及适用对象
日常食品
牛奶
双手
②灭菌方法及适用对象
接种工具
金属用具
(5)注意事项
①实验操作时,应避免已经灭菌处理的材料用具与 接触。
②为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在超净工作台上并在
附近进行。
周围的物品
酒精灯火焰
拾遗 挖掘
(选择性必修3 P10“相关信息”)生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。
3.微生物的纯培养概念辨析
固体培养基
一定
形态结构
4.纯培养的过程(以酵母菌为例):包括______________________________
__________等步骤。
(1)制备培养基
倒平板注意事项:①温度:50 ℃左右;②操作:在 附近;③冷凝后平板倒置。
配制培养基、灭菌、接种、分离
和培养
湿热灭菌法
酒精灯火焰
(2)接种和分离酵母菌
①平板划线法的原理:通过 在固体培养基表面 的操作,将聚集的菌种逐步 到培养基的表面。经数次划线后培养,可以分离得到 。
接种环
连续划线
稀释分散
单菌落
②平板划线法的操作步骤
(3)培养酵母菌
将接种后的平板和一个 的平板倒置,放入28 ℃左右的恒温培养箱中培养24~48 h。
未接种
拾遗 挖掘
(选择性必修3 P12~13“探究·实践”)在酵母菌纯培养实验中,未接种的培养基表面也有菌落生长,原因是培养基灭菌不彻底。
精练 迁移应用
考向1　培养基的配制及无菌技术
1.(2026·河北衡水模拟)培养微生物需要提供适宜的培养基。下列关于培养微生物的培养基的叙述,错误的是(　　)
A.培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
B.培养基的成分需根据微生物的代谢特点而定
C.培养基需满足各种微生物生长繁殖的需求
D.培养基通常需包含水、无机盐、碳源、氮源等营养物质
C
解析:培养基中含有微生物生长所需要的营养物质,还能满足微生物生长对环境的要求,A正确;根据微生物的代谢特点配制培养基的成分,同时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需要,B正确;培养基是根据不同微生物的生长繁殖需求进行配制的,不能满足各种微生物生长繁殖的需求,C错误;培养基中一般含有水、碳源、氮源、无机盐,有些还需要加入特殊营养物质等,D正确。
2.(2025·贵州卷,15)金龟子绿僵菌(Ma)是一种昆虫病原真菌,可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子(单细胞后代)萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素,导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是(　　)
A.可利用Ma开发成微生物杀虫剂
B.为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样
C.稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D.接种培养Ma时使用的器具需消毒
D
解析:金龟子绿僵菌(Ma)作为昆虫病原真菌,可通过寄生导致害虫死亡,可开发成微生物杀虫剂,A正确;僵化死亡的昆虫体内含有大量Ma菌体,因此从研磨的僵虫组织取样是分离Ma的合理方法,B正确;稀释涂布平板法可通过梯度稀释和菌落形成来分离纯化微生物,适用于分离样品中的Ma,C正确;微生物培养中,接种环等直接接触菌种的器具需严格灭菌(如灼烧灭菌),而非仅消毒,消毒无法彻底杀灭微生物的芽孢或孢子,D错误。
考向2　微生物的纯培养
3.(2024·湖南卷,6)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示,则下列操作正确的是(　　)
A.①②⑤⑥　　　　　　　
B.③④⑥⑦
C.①②⑦⑧
D.①③④⑤
D
解析:由题图可知,②中拔出棉塞后应握住棉塞上部;⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开,应只打开一条缝隙;⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连;⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确,故选D。
微生物的选择培养和计数
考点二
梳理 必备知识
1.微生物的选择培养
(1)选择培养基
抑制或阻止
尿素
氮源
细菌
高温
(2)选择培养基与鉴别培养基的辨析
项目 选择培养基 鉴别培养基
制备 方法 培养基中加入某些化学物质 培养基中加入某种指示剂或化学药品
原理 依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好或抗性而设计 产生特定的颜色或其他变化
用途 从众多微生物中分离出所需的微生物 鉴别不同种类的微生物
2.微生物的选择培养
(1)系列稀释操作
①系列稀释:移液管需要经过灭菌。
②操作时,试管口和移液管应离酒精灯火焰1~2 cm。
操作过程如下:
(2)涂布平板操作
序号 图示 操作
① 取0.1 mL菌液,滴加到____________
② 将涂布器浸在盛有 的烧杯中
③ 将涂布器放在火焰上灼烧,待酒精燃尽、涂布器冷却后,再进行涂布
④ 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿,使_________
培养基表面
酒精
涂布均匀
(3)培养:待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板 ,放入30~37 ℃的
中培养1~2 d。
倒置
恒温培养箱
3.微生物的数量测定
(1)稀释涂布平板法
计数 原理 当样品的 时,培养基表面生长的一个 ,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌
计数 标准 为了保证结果准确,一般选择菌落数为 的平板进行计数
计数 方法 通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数为
、适于计数的平板。在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出________
稀释度足够高
单菌落
30~300
30~300
平均值
(2)显微镜直接计数法
计数 原理 利用特定的细菌计数板或 ,在显微镜下观察、计数,然后计算一定体积的样品中微生物的数量
优点 是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法
缺点 统计的结果一般是死菌数和活菌数的总和
血细胞计数板
拾遗 挖掘
(选择性必修3 P18“相关信息”)血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数;细菌计数板常用于相对较小的细菌等的计数。
4.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)实验原理
脲酶
尿素
(2)操作步骤
30~300
24 h
(3)实验结果分析与评价
30~300
5.分解纤维素的微生物的分离
(1)分离方法与原理
(2)纤维素分解菌的培养基成分及鉴定原理
纤维素
刚果红
红色复合物
精练 迁移应用
考向1　微生物的选择培养
1.(2025·黑吉辽蒙卷,4)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22H23ClN2O8)能力强的菌株,旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是(　　)
A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C.配制选择培养基时,需确保pH满足实验要求
D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
D
解析:以金霉素为唯一碳源的选择培养基,仅允许能利用金霉素的微生物生长(其他无法利用金霉素的微生物被抑制),符合选择培养基的设计原理,A正确;逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫,筛选出耐受性更强的菌株,B正确;培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整(如细菌通常中性或弱碱性,真菌偏酸性),是配制培养基的基本要求,C正确;稀释涂布平板法需用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面,而接种环用于平板划线法(分离单菌落),D错误。
2.(2026·河北邢台模拟)物质M是一种难以降解的含氮有机物,其在培养基中表现为不透明。某研究小组欲从土壤中分离出能降解M的微生物,取土样并进行一系列稀释后,取稀释液滴加到平板A上开始涂布,然后置于恒温箱中培养24 h,发现平板上的部分菌落周围出现透明圈,部分菌落周围未出现透明圈。下列有关分析错误的是(　　)
A.平板A应以物质M为唯一有机氮源,属于选择培养基
B.平板 A上的菌落数过多可能是取样前未将稀释液摇匀所致
C.平板A上出现了无透明圈的菌落是因为培养基被污染了
D.透明圈最大的菌落,其分解M的能力未必最强
C
解析:由题干信息“欲从土壤中分离出能降解M的微生物”可知,平板A应以物质M为唯一有机氮源,属于选择培养基,A正确;由题干信息可知,实验采用稀释涂布平板法进行接种,平板 A上的菌落数过多可能是取样前未将稀释液摇匀所致,B正确;平板A上出现了无透明圈的菌落不是因为培养基被污染了,而是细菌分解M的能力弱或为固氮菌,C错误;透明圈与菌落直径比值的大小能反映该细菌对物质M的分解能力,透明圈最大的菌落,其分解M的能力未必最强,D正确。
考向2　微生物的分离与计数
3.(2025·四川卷,8)微塑料由塑料废弃物风化形成,难以降解,会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌,将总菌量相同的
X、Y、X+Y(X∶Y=1∶1)分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中,培养一段时间后测定微塑料的残留率(残留率=剩余量/添加量×100%),结果如图。下列叙述正确的是(　　)
A.用平板划线法能测定X菌组中的活菌数
B.Y菌组微塑料残留率较高,故菌浓度也高
C.混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种
D.能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料
C
解析:平板划线法主要用于微生物的分离和纯化,不能用于测定活菌数,测定活菌数常用稀释涂布平板法,A错误;Y菌组微塑料残留率较高,说明Y菌对微塑料的降解能力相对较弱,而不是菌浓度高,微塑料残留率与降解菌对微塑料的降解能力有关,而非直接与菌浓度相关,B错误;由题图可知,
X+Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组,说明混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种,C正确;该培养基中含有蛋白胨,能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等,但不一定都能降解微塑料,D错误。
4.(2026·广东湛江模拟)某种物质A(一种含有C、H、N的有机物)难以被降解,会对环境造成污染,某研究团队成功地筛选出能高效降解物质A的细菌(目的菌),实验的主要步骤如图所示。图中⑥过程为将M中的菌液稀释一定倍数后,取0.1 mL涂布到平板上,初步估测M内1 mL菌液中所含细菌数为5.4×109个。下列相关叙述正确的是(　　)
A.实验时,淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B.乙为选择培养基,以未接种的选择培养基为对照可验证乙能起选择作用
C.若乙中的菌落均来源于一个细菌,则④过程中,应尽可能挑选菌落较小的单菌落进行接种
D.若丁平板上的菌落数平均为54个,则接种的菌液的稀释倍数为1×107
答案:D
解析:实验时,要从淤泥中分离得到能高效降解物质A的细菌菌株,则图中①为淤泥取样进行稀释,可以取淤泥加无菌水制成菌悬液,淤泥中有菌种,因此不能进行灭菌处理,盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌,A错误;乙为选择培养基,为了提高准确度,实验需设平行重复实验,且需要另外设置对照组,以接种的不加物质A的普通培养基为对照,若乙中的菌落数少于对照组,则可验证乙能起选择作用,B错误;若乙中的菌落均来源于一个细菌,则④过程中,应尽可能挑选菌落较大(分解物质A的效率更高,生长繁殖更快)的单菌落进行接种,C错误;若丁平板上长出的菌落数平均为54个,假设稀释倍数为a,根据摇瓶M中1 mL菌液中细菌数为5.4×109个,在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液,则有54×a÷0.1=
5.4×109,则稀释倍数a=107,D正确。第48讲微生物的培养技术与应用
考点一　微生物的基本培养技术
1.培养基的配制
(1)培养基的概念、用途和类型
①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
②用途:用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
③种类:按物理性质分
(2)培养基的配方
①主要营养物质:水、碳源、氮源、无机盐。
②其他条件:pH、特殊营养物质和氧气。如表:
微生物 乳酸杆菌 霉菌 细菌 厌氧微生物
特殊 需求 添加 维生素 pH调至 酸性 pH调至 中性或弱碱性 无氧
拾遗·挖掘
(1)(选择性必修3 P10“旁栏思考”)培养基中加入氮源的原因是培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
(2)(选择性必修3 P10“相关信息”)牛肉膏和蛋白胨含有的营养物质有糖、维生素和有机氮等。
2.无菌技术
(1)目的:获得纯净的微生物培养物。
(2)关键:防止杂菌污染。
(3)消毒与灭菌的比较
项目 消毒 灭菌
作用强度 较为温和的物理、化学或生物等方法 强烈的理化方法
作用程度 杀死物体表面或内部一部分微生物 杀死物体内外所有的微生物
芽孢和 孢子 一般不能杀灭 能杀灭
适用对象 实验操作的空间、操作者衣着和手 用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等
(4)常见物品的消毒或灭菌方法
①消毒方法及适用对象
②灭菌方法及适用对象
(5)注意事项
①实验操作时,应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
②为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。
拾遗·挖掘
(选择性必修3 P10“相关信息”)生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。
3.微生物的纯培养概念辨析
4.纯培养的过程(以酵母菌为例):包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。
(1)制备培养基
倒平板注意事项:①温度:50 ℃左右;②操作:在酒精灯火焰附近;③冷凝后平板倒置。
(2)接种和分离酵母菌
①平板划线法的原理:通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养,可以分离得到单菌落。
②平板划线法的操作步骤
(3)培养酵母菌
将接种后的平板和一个未接种的平板倒置,放入28 ℃左右的恒温培养箱中培养24~48 h。
拾遗·挖掘
(选择性必修3 P12~13“探究·实践”)在酵母菌纯培养实验中,未接种的培养基表面也有菌落生长,原因是培养基灭菌不彻底。
考向1　培养基的配制及无菌技术
1.(2026·河北衡水模拟)培养微生物需要提供适宜的培养基。下列关于培养微生物的培养基的叙述,错误的是(　　)
A.培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
B.培养基的成分需根据微生物的代谢特点而定
C.培养基需满足各种微生物生长繁殖的需求
D.培养基通常需包含水、无机盐、碳源、氮源等营养物质
答案:C
解析:培养基中含有微生物生长所需要的营养物质,还能满足微生物生长对环境的要求,A正确;根据微生物的代谢特点配制培养基的成分,同时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质等的需要,B正确;培养基是根据不同微生物的生长繁殖需求进行配制的,不能满足各种微生物生长繁殖的需求,C错误;培养基中一般含有水、碳源、氮源、无机盐,有些还需要加入特殊营养物质等,D正确。
2.(2025·贵州卷,15)金龟子绿僵菌(Ma)是一种昆虫病原真菌,可以侵染某些农林害虫。Ma寄生时其孢子(单细胞后代)萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素,导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误的是(　　)
A.可利用Ma开发成微生物杀虫剂
B.为分离Ma可从研磨的僵虫组织中取样
C.稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D.接种培养Ma时使用的器具需消毒
答案:D
解析:金龟子绿僵菌(Ma)作为昆虫病原真菌,可通过寄生导致害虫死亡,可开发成微生物杀虫剂,A正确;僵化死亡的昆虫体内含有大量Ma菌体,因此从研磨的僵虫组织取样是分离Ma的合理方法,B正确;稀释涂布平板法可通过梯度稀释和菌落形成来分离纯化微生物,适用于分离样品中的Ma,C正确;微生物培养中,接种环等直接接触菌种的器具需严格灭菌(如灼烧灭菌),而非仅消毒,消毒无法彻底杀灭微生物的芽孢或孢子,D错误。
考向2　微生物的纯培养
3.(2024·湖南卷,6)微生物平板划线和培养的具体操作如图所示,则下列操作正确的是(　　)
A.①②⑤⑥　　　　　　　 B.③④⑥⑦
C.①②⑦⑧ D.①③④⑤
答案:D
解析:由题图可知,②中拔出棉塞后应握住棉塞上部;⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开,应只打开一条缝隙;⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连;⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确,故选D。
考点二　微生物的选择培养和计数
1.微生物的选择培养
(1)选择培养基
(2)选择培养基与鉴别培养基的辨析
项目 选择培养基 鉴别培养基
制备 方法 培养基中加入某些化学物质 培养基中加入某种指示剂或化学药品
原理 依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好或抗性而设计 产生特定的颜色或其他变化
用途 从众多微生物中分离出所需的微生物 鉴别不同种类的微生物
2.微生物的选择培养
(1)系列稀释操作
①系列稀释:移液管需要经过灭菌。
②操作时,试管口和移液管应离酒精灯火焰1~2 cm。
操作过程如下:
(2)涂布平板操作
序号 图示 操作
① 取0.1 mL菌液,滴加到培养基表面
② 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中
③ 将涂布器放在火焰上灼烧,待酒精燃尽、涂布器冷却后,再进行涂布
④ 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿,使涂布均匀
(3)培养:待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37 ℃的恒温培养箱中培养1~2 d。
3.微生物的数量测定
(1)稀释涂布平板法
计数 原理 当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌
计数 标准 为了保证结果准确,一般选择菌落数为30~300的平板进行计数
计数 方法 通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数为30~300、适于计数的平板。在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值
(2)显微镜直接计数法
计数 原理 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下观察、计数,然后计算一定体积的样品中微生物的数量
优点 是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法
缺点 统计的结果一般是死菌数和活菌数的总和
拾遗·挖掘
(选择性必修3 P18“相关信息”)血细胞计数板常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数;细菌计数板常用于相对较小的细菌等的计数。
4.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)实验原理
(2)操作步骤
(3)实验结果分析与评价
5.分解纤维素的微生物的分离
(1)分离方法与原理
(2)纤维素分解菌的培养基成分及鉴定原理
考向1　微生物的选择培养
1.(2025·黑吉辽蒙卷,4)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C22H23ClN2O8)能力强的菌株,旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是(　　)
A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C.配制选择培养基时,需确保pH满足实验要求
D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
答案:D
解析:以金霉素为唯一碳源的选择培养基,仅允许能利用金霉素的微生物生长(其他无法利用金霉素的微生物被抑制),符合选择培养基的设计原理,A正确;逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫,筛选出耐受性更强的菌株,B正确;培养基的pH需根据目标微生物的生长需求调整(如细菌通常中性或弱碱性,真菌偏酸性),是配制培养基的基本要求,C正确;稀释涂布平板法需用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面,而接种环用于平板划线法(分离单菌落),D错误。
2.(2026·河北邢台模拟)物质M是一种难以降解的含氮有机物,其在培养基中表现为不透明。某研究小组欲从土壤中分离出能降解M的微生物,取土样并进行一系列稀释后,取稀释液滴加到平板A上开始涂布,然后置于恒温箱中培养24 h,发现平板上的部分菌落周围出现透明圈,部分菌落周围未出现透明圈。下列有关分析错误的是(　　)
A.平板A应以物质M为唯一有机氮源,属于选择培养基
B.平板 A上的菌落数过多可能是取样前未将稀释液摇匀所致
C.平板A上出现了无透明圈的菌落是因为培养基被污染了
D.透明圈最大的菌落,其分解M的能力未必最强
答案:C
解析:由题干信息“欲从土壤中分离出能降解M的微生物”可知,平板A应以物质M为唯一有机氮源,属于选择培养基,A正确;由题干信息可知,实验采用稀释涂布平板法进行接种,平板 A上的菌落数过多可能是取样前未将稀释液摇匀所致,B正确;平板A上出现了无透明圈的菌落不是因为培养基被污染了,而是细菌分解M的能力弱或为固氮菌,C错误;透明圈与菌落直径比值的大小能反映该细菌对物质M的分解能力,透明圈最大的菌落,其分解M的能力未必最强,D正确。
考向2　微生物的分离与计数
3.(2025·四川卷,8)微塑料由塑料废弃物风化形成,难以降解,会危害生态环境和人体健康。有人分离到X和Y两种微塑料降解菌,将总菌量相同的X、Y、X+Y(X∶Y=1∶1)分别接种于含有等量微塑料的蛋白胨液体培养基中,培养一段时间后测定微塑料的残留率(残留率=剩余量/添加量×100%),结果如图。下列叙述正确的是(　　)
A.用平板划线法能测定X菌组中的活菌数
B.Y菌组微塑料残留率较高,故菌浓度也高
C.混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种
D.能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料
答案:C
解析:平板划线法主要用于微生物的分离和纯化,不能用于测定活菌数,测定活菌数常用稀释涂布平板法,A错误;Y菌组微塑料残留率较高,说明Y菌对微塑料的降解能力相对较弱,而不是菌浓度高,微塑料残留率与降解菌对微塑料的降解能力有关,而非直接与菌浓度相关,B错误;由题图可知,X+Y混合菌种组的微塑料残留率低于X菌组和Y菌组,说明混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种,C正确;该培养基中含有蛋白胨,能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等,但不一定都能降解微塑料,D错误。
4.(2026·广东湛江模拟)某种物质A(一种含有C、H、N的有机物)难以被降解,会对环境造成污染,某研究团队成功地筛选出能高效降解物质A的细菌(目的菌),实验的主要步骤如图所示。图中⑥过程为将M中的菌液稀释一定倍数后,取0.1 mL涂布到平板上,初步估测M内1 mL菌液中所含细菌数为5.4×109个。下列相关叙述正确的是(　　)
A.实验时,淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B.乙为选择培养基,以未接种的选择培养基为对照可验证乙能起选择作用
C.若乙中的菌落均来源于一个细菌,则④过程中,应尽可能挑选菌落较小的单菌落进行接种
D.若丁平板上的菌落数平均为54个,则接种的菌液的稀释倍数为1×107
答案:D
解析:实验时,要从淤泥中分离得到能高效降解物质A的细菌菌株,则图中①为淤泥取样进行稀释,可以取淤泥加无菌水制成菌悬液,淤泥中有菌种,因此不能进行灭菌处理,盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌,A错误;乙为选择培养基,为了提高准确度,实验需设平行重复实验,且需要另外设置对照组,以接种的不加物质A的普通培养基为对照,若乙中的菌落数少于对照组,则可验证乙能起选择作用,B错误;若乙中的菌落均来源于一个细菌,则④过程中,应尽可能挑选菌落较大(分解物质A的效率更高,生长繁殖更快)的单菌落进行接种,C错误;若丁平板上长出的菌落数平均为54个,假设稀释倍数为a,根据摇瓶M中1 mL菌液中细菌数为5.4×109个,在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液,则有54×a÷0.1=5.4×109,则稀释倍数a=107,D正确。
1.(2026·辽宁抚顺模拟)做微生物的纯培养实验时,既要配制适宜的培养基,又要防止杂菌污染。下列说法正确的是(　　)
A.培养基上获得的菌落都是由单个微生物繁殖形成的
B.培养霉菌时,一般需将培养基的pH调至酸性
C.不含氮源的培养基不能用于微生物培养
D.配制好的培养基采用干热灭菌,以防止杂菌污染
答案:B
解析:微生物的纯培养实验中培养基上经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物,但是有的菌落可能由两个细胞连在一起繁殖形成一个菌落,A错误;培养霉菌时,一般需将培养基的pH调至酸性,B正确;微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,不含氮源的培养基可以用于固氮微生物的培养,C错误;配制好的培养基可以采用高压蒸汽灭菌(湿热灭菌),其目的是防止杂菌污染培养基,这是获得纯净培养物的关键,D错误。
2.(2026·河南安阳模拟)下列关于无菌操作的叙述,正确的是(　　)
A.煮沸消毒不能杀死微生物的细胞
B.应尽量选择脱脂棉塞住试管口,否则容易造成吸水污染
C.配制培养基时应该先灭菌再调节pH
D.对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒
答案:D
解析:煮沸消毒法是在100 ℃煮沸5~6 min,可杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,A错误;由于脱脂棉吸水后容易引起污染,所以制作棉塞应该使用普通棉花,而不能使用脱脂棉,B错误;为避免杂菌污染,应先调节pH再灭菌,C错误;紫外线能破坏DNA结构,对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒,以营造无菌环境,D正确。
3.(2026·江苏南京模拟)熔喷布的主要成分是聚丙烯,会对环境造成污染。某科研小组从土壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。下列说法正确的是(　　)
A.配制固体培养基时,需要在无菌的环境中进行
B.分离纯化细菌时,转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线
C.从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌,可采用平板划线法进行分离与计数
D.通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更高的碳氮比
答案:B
解析:配制固体培养基时,不需要在无菌的环境中进行,A错误;利用平板划线法接种时,每次划线前后都要灼烧接种环,因此转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线,B正确;从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌,可采用平板划线法进行分离,但不能计数,C错误;通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更低的碳氮比,D错误。
4.(2026·河南新乡模拟)某实验小组通过控制苯浓度,对从污泥处理厂的活性污泥中筛选获得的苯降解菌进行驯化培养,挑选出合适的培养条件,同时驯化培养出较好的苯降解菌,培养的实验结果如表所示。下列有关叙述错误的是(　　)
组别 加入苯浓度 /(g·L -1) 菌落个 体/个 菌落密度/ (个·L-1)
① 200 几乎无 几乎无
② 20 60 1 200
③ 2 54 1 120
④ 0.2 24 450
A.该实验中驯化苯降解菌的培养基上应该加入适量的琼脂
B.第①组几乎没有菌落的原因可能是苯浓度过高对细菌产生了毒性
C.第④组菌落数目少的原因可能是培养基上的碳源的含量不足
D.由该实验可知,20 g·L-1的苯浓度是培养苯降解菌的最适浓度
答案:D
解析:若要培养菌落,通常在培养基中加入适量琼脂制成固体培养基,A正确;第①组苯浓度过高,可能超出了细菌所能承受的范围,对细菌产生毒性,抑制其生长和繁殖,导致几乎没有菌落,B正确;第④组苯浓度过低,提供的碳源不足,可能无法满足细菌生长所需,导致菌落数目少,C正确;仅根据这几组实验数据,不能确定20 g·L-1的苯浓度就是培养苯降解菌的最适浓度,还需要设置更多、更小浓度梯度的实验来进一步确定,D错误。
5.(2025·江西卷,15改编)为高效检测抗菌剂的抗菌效果,研究人员构建了能够表达外源荧光素酶的重组菌Q,将其接种到有足量荧光素的液体培养基中,一段时间后添加待测抗菌剂,定时检测培养液的荧光强度。下列有关该实验的叙述,正确的是(　　)
A.需要设置一个对照组保证检测结果的准确性
B.实验过程中所用的培养基是一种选择培养基
C.在重组菌Q胞内的荧光素酶可催化荧光素水解
D.培养液的荧光强度变化不可作为抗菌效果的判断依据
答案:A
解析:实验中需设置不加抗菌剂的对照组,以排除菌体自然裂解等因素的影响,确保荧光强度变化由抗菌剂引起,A正确;重组菌Q已构建成功,实验目的是检测抗菌效果,所用培养基含足量荧光素,属于鉴别培养基,B错误;荧光素位于胞外,荧光素酶在胞内,两者无法直接接触反应,只有当菌体裂解后酶释放至胞外,才能催化荧光素发光,C错误;抗菌剂有效时,菌体死亡裂解,荧光素酶释放催化荧光素,荧光强度显著增加,无效时,菌体存活,酶滞留胞内,荧光强度变化小,因此,荧光强度变化可直接反映抗菌效果,D错误。
6.(2026·广东湛江模拟)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长;氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸,只能在完全培养基上生长。某大肠杆菌氨基酸营养缺陷型突变株纯化的部分流程如图所示,其中①②③④代表培养基,A、B、C表示操作步骤,甲、乙为菌落。下列叙述正确的是(　　)
A.图中①②③是完全培养基
B.运用稀释涂布平板法对菌液中的活菌进行计数统计结果可能比实际活菌数多
C.可使用紫外线处理野生型大肠杆菌使其发生染色体变异获得亮氨酸营养缺陷型突变株
D.为获得目的菌株,可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养
答案:D
解析:野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长,氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸,只能在完全培养基上生长,根据题干信息和题图分析,图中①②④为完全培养基,③为基本培养基,A错误;运用稀释涂布平板法对菌液中的活菌进行计数时,统计的数目比实际活菌数少,原因是当两个或多个菌落靠近到一定程度连在一起时,平板上记录为一个菌落,B错误;大肠杆菌属于原核生物,细胞内不含染色体,C错误;据图可知,甲在基本培养基中无法生长,在完全培养基中可以生长,说明甲是氨基酸营养缺陷型突变株,故为获得目的菌株,可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养,D正确。
7.(2026·江西吉安模拟)牛是一种反刍动物,其瘤胃内含有大量共生微生物,包括细菌、真菌和原生动物。其中,纤维素分解菌是核心功能群体。科研人员为统计牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌的数量并挑选出能高效分解纤维素的目的菌,进行了如下实验。平板①②③上菌落数的最大值分别为 60、63、66个。下列相关叙述错误的是(　　)
A.为了利于挑选出目的菌,培养箱内应氧气充足、温度适宜
B.该牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌约有3.15×107个·mL-1
C.从菌落甲中更有可能得到高效分解纤维素的目的菌
D.各平板中,纤维素是唯一的碳源,但不是唯一含碳物质
答案:A
解析:由于牛瘤胃内是无氧环境,所以从牛瘤胃内的液体中分离出的目的菌主要为厌氧菌,故培养箱内应提供无氧环境、适宜的温度,A 错误;该牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌约有(60+63+66)÷3÷0.2×105=3.15×107个·mL-1,B 正确;与菌落乙相比,菌落甲的透明圈直径与菌落的直径比值大,所以形成菌落甲的纤维素分解菌分解纤维素的能力更强,即应从菌落甲中进行挑选,C正确;各平板中,纤维素是唯一的碳源,但平板中有凝固剂(琼脂),凝固剂含碳,D正确。
8.(2026·广东东莞模拟)研究人员将结核分枝杆菌分别接种在含有不同浓度(单位:mg·mL-1)抗生素A与B的培养基中,在37 ℃的条件下培养24小时后,统计各培养基中的菌落数,结果如表所示。下列叙述正确的是(　　)
组别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
抗生素A相对浓度 0 0.1 0.3 0.5 0.3 0.3
抗生素B相对浓度 0 0 0 0 0.3 0.5
菌落数 110 90 60 0 60 60
A.上述涉及的结核分枝杆菌的接种方法最可能是平板划线法
B.该实验的自变量为抗生素的种类
C.在一定范围内,抗生素A的杀菌能力与浓度呈正相关
D.抗生素B的杀菌能力大于抗生素A的
答案:C
解析:平板划线法用于菌种分离,而稀释涂布平板法更适用于菌落计数。由表可知,统计了各培养基的菌落数,故接种方法应为稀释涂布平板法,A错误;实验自变量包括抗生素种类和浓度(如组别Ⅰ~Ⅳ改变A浓度,Ⅴ~Ⅵ改变B浓度),而非单一变量,B错误;抗生素A浓度从0.1增至0.5 mg·mL-1时,菌落数从90降至0,说明在一定范围内,其杀菌能力与浓度呈正相关,C正确;组别Ⅲ(仅A 0.3)与Ⅴ、Ⅵ(A 0.3+B 0.3或0.5)菌落数均为60,表明抗生素B未增强杀菌效果,无法证明B杀菌能力更强,D错误。
9.(2026·江苏南京模拟)牛、羊等反刍动物具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物能分解纤维素。某科研团队按照如图1所示的流程分离瘤胃中的纤维素分解菌,实验中需要甲、乙两种培养基。
(1)获得纯净的微生物培养物的关键是　　　　　　　　　,无菌技术主要包括　　　　　　。
(2)从①开始分离筛选纤维素分解菌,甲培养基中除含有水、无机盐、氮源外还应以　 ,
该培养基按功能来分应为　　　培养基。甲、乙两培养基的主要区别是　 。
(3)过程②所使用的接种方法是　　　　　。可在培养基表面均加入一层无菌的石蜡,其作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
(4)刚果红可以与纤维素形成　　　　　复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见图2),图中降解纤维素能力最强的菌株是　　　　　(填图中序号),原因是　 　 。
(5)在5个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为104的胃部样液0.1 mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为189、175和179,则每毫升样品中含有细菌数量为　　　　个。通过该方法所得细菌数量一般较实际结果　　　　,原因是　 　 。
答案:(1)防止杂菌污染　消毒和灭菌
(2)纤维素为唯一碳源　选择　甲中无琼脂
(3)稀释涂布平板法　瘤胃中的纤维素分解菌属于厌氧微生物,石蜡密封创设无氧环境,有利于瘤胃中的纤维素分解菌生长发育
(4)红色　菌落①　菌落①的降解圈直径与菌落直径的比值最大
(5)1.81×107　偏低　当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是单个菌落
解析:(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括消毒和灭菌。
(2)微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等,筛选纤维素分解菌时,需要使用纤维素作为唯一碳源的选择培养基,该培养基按功能来分应为选择培养基。由图1可知,甲培养基为液体培养基,乙培养基为固体培养基,二者区别在于甲中无琼脂,而乙中有琼脂。
(3)乙培养基上形成的菌落分布均匀,因此过程②所使用的接种方法是稀释涂布平板法;瘤胃中的纤维素分解菌属于厌氧微生物,石蜡密封创设无氧环境,有利于瘤胃中的纤维素分解菌生长繁殖。
(4)在培养基中加入刚果红,可与培养基中的纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,红色复合物不能形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明降解圈,从而可筛选纤维素分解菌。图2中降解圈大小与纤维素酶的量与活性有关,降解纤维素能力最强的菌株是①,因为其周围的降解圈直径与菌落直径的比值最大。
(5)在5个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为104的胃部样液0.1 mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为189、175和179,则平板的平均菌落数为(189+175+179)÷3=181,则每毫升样液中的细菌数量约为181÷0.1×104=1.81×107个。由于当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是单个菌落,所以通过该方法所得细菌数量一般较实际结果偏低。1.(2026·辽宁抚顺模拟)做微生物的纯培养实验时,既要配制适宜的培养基,又要防止杂菌污染。下列说法正确的是(　　)
A.培养基上获得的菌落都是由单个微生物繁殖形成的
B.培养霉菌时,一般需将培养基的pH调至酸性
C.不含氮源的培养基不能用于微生物培养
D.配制好的培养基采用干热灭菌,以防止杂菌污染
答案:B
解析:微生物的纯培养实验中培养基上经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物,但是有的菌落可能由两个细胞连在一起繁殖形成一个菌落,A错误;培养霉菌时,一般需将培养基的pH调至酸性,B正确;微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,不含氮源的培养基可以用于固氮微生物的培养,C错误;配制好的培养基可以采用高压蒸汽灭菌(湿热灭菌),其目的是防止杂菌污染培养基,这是获得纯净培养物的关键,D错误。
2.(2026·河南安阳模拟)下列关于无菌操作的叙述,正确的是(　　)
A.煮沸消毒不能杀死微生物的细胞
B.应尽量选择脱脂棉塞住试管口,否则容易造成吸水污染
C.配制培养基时应该先灭菌再调节pH
D.对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒
答案:D
解析:煮沸消毒法是在100 ℃煮沸5~6 min,可杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,A错误;由于脱脂棉吸水后容易引起污染,所以制作棉塞应该使用普通棉花,而不能使用脱脂棉,B错误;为避免杂菌污染,应先调节pH再灭菌,C错误;紫外线能破坏DNA结构,对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒,以营造无菌环境,D正确。
3.(2026·江苏南京模拟)熔喷布的主要成分是聚丙烯,会对环境造成污染。某科研小组从土壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。下列说法正确的是(　　)
A.配制固体培养基时,需要在无菌的环境中进行
B.分离纯化细菌时,转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线
C.从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌,可采用平板划线法进行分离与计数
D.通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更高的碳氮比
答案:B
解析:配制固体培养基时,不需要在无菌的环境中进行,A错误;利用平板划线法接种时,每次划线前后都要灼烧接种环,因此转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线,B正确;从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌,可采用平板划线法进行分离,但不能计数,C错误;通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更低的碳氮比,D错误。
4.(2026·河南新乡模拟)某实验小组通过控制苯浓度,对从污泥处理厂的活性污泥中筛选获得的苯降解菌进行驯化培养,挑选出合适的培养条件,同时驯化培养出较好的苯降解菌,培养的实验结果如表所示。下列有关叙述错误的是(　　)
组别 加入苯浓度 /(g·L -1) 菌落个 体/个 菌落密度/ (个·L-1)
① 200 几乎无 几乎无
② 20 60 1 200
③ 2 54 1 120
④ 0.2 24 450
A.该实验中驯化苯降解菌的培养基上应该加入适量的琼脂
B.第①组几乎没有菌落的原因可能是苯浓度过高对细菌产生了毒性
C.第④组菌落数目少的原因可能是培养基上的碳源的含量不足
D.由该实验可知,20 g·L-1的苯浓度是培养苯降解菌的最适浓度
答案:D
解析:若要培养菌落,通常在培养基中加入适量琼脂制成固体培养基,A正确;第①组苯浓度过高,可能超出了细菌所能承受的范围,对细菌产生毒性,抑制其生长和繁殖,导致几乎没有菌落,B正确;第④组苯浓度过低,提供的碳源不足,可能无法满足细菌生长所需,导致菌落数目少,C正确;仅根据这几组实验数据,不能确定20 g·L-1的苯浓度就是培养苯降解菌的最适浓度,还需要设置更多、更小浓度梯度的实验来进一步确定,D错误。
5.(2025·江西卷,15改编)为高效检测抗菌剂的抗菌效果,研究人员构建了能够表达外源荧光素酶的重组菌Q,将其接种到有足量荧光素的液体培养基中,一段时间后添加待测抗菌剂,定时检测培养液的荧光强度。下列有关该实验的叙述,正确的是(　　)
A.需要设置一个对照组保证检测结果的准确性
B.实验过程中所用的培养基是一种选择培养基
C.在重组菌Q胞内的荧光素酶可催化荧光素水解
D.培养液的荧光强度变化不可作为抗菌效果的判断依据
答案:A
解析:实验中需设置不加抗菌剂的对照组,以排除菌体自然裂解等因素的影响,确保荧光强度变化由抗菌剂引起,A正确;重组菌Q已构建成功,实验目的是检测抗菌效果,所用培养基含足量荧光素,属于鉴别培养基,B错误;荧光素位于胞外,荧光素酶在胞内,两者无法直接接触反应,只有当菌体裂解后酶释放至胞外,才能催化荧光素发光,C错误;抗菌剂有效时,菌体死亡裂解,荧光素酶释放催化荧光素,荧光强度显著增加,无效时,菌体存活,酶滞留胞内,荧光强度变化小,因此,荧光强度变化可直接反映抗菌效果,D错误。
6.(2026·广东湛江模拟)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长;氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸,只能在完全培养基上生长。某大肠杆菌氨基酸营养缺陷型突变株纯化的部分流程如图所示,其中①②③④代表培养基,A、B、C表示操作步骤,甲、乙为菌落。下列叙述正确的是(　　)
A.图中①②③是完全培养基
B.运用稀释涂布平板法对菌液中的活菌进行计数统计结果可能比实际活菌数多
C.可使用紫外线处理野生型大肠杆菌使其发生染色体变异获得亮氨酸营养缺陷型突变株
D.为获得目的菌株,可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养
答案:D
解析:野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长,氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸,只能在完全培养基上生长,根据题干信息和题图分析,图中①②④为完全培养基,③为基本培养基,A错误;运用稀释涂布平板法对菌液中的活菌进行计数时,统计的数目比实际活菌数少,原因是当两个或多个菌落靠近到一定程度连在一起时,平板上记录为一个菌落,B错误;大肠杆菌属于原核生物,细胞内不含染色体,C错误;据图可知,甲在基本培养基中无法生长,在完全培养基中可以生长,说明甲是氨基酸营养缺陷型突变株,故为获得目的菌株,可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养,D正确。
7.(2026·江西吉安模拟)牛是一种反刍动物,其瘤胃内含有大量共生微生物,包括细菌、真菌和原生动物。其中,纤维素分解菌是核心功能群体。科研人员为统计牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌的数量并挑选出能高效分解纤维素的目的菌,进行了如下实验。平板①②③上菌落数的最大值分别为 60、63、66个。下列相关叙述错误的是(　　)
A.为了利于挑选出目的菌,培养箱内应氧气充足、温度适宜
B.该牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌约有3.15×107个·mL-1
C.从菌落甲中更有可能得到高效分解纤维素的目的菌
D.各平板中,纤维素是唯一的碳源,但不是唯一含碳物质
答案:A
解析:由于牛瘤胃内是无氧环境,所以从牛瘤胃内的液体中分离出的目的菌主要为厌氧菌,故培养箱内应提供无氧环境、适宜的温度,A 错误;该牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌约有(60+63+66)÷3÷0.2×105=3.15×107个·mL-1,B 正确;与菌落乙相比,菌落甲的透明圈直径与菌落的直径比值大,所以形成菌落甲的纤维素分解菌分解纤维素的能力更强,即应从菌落甲中进行挑选,C正确;各平板中,纤维素是唯一的碳源,但平板中有凝固剂(琼脂),凝固剂含碳,D正确。
8.(2026·广东东莞模拟)研究人员将结核分枝杆菌分别接种在含有不同浓度(单位:mg·mL-1)抗生素A与B的培养基中,在37 ℃的条件下培养24小时后,统计各培养基中的菌落数,结果如表所示。下列叙述正确的是(　　)
组别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
抗生素A相对浓度 0 0.1 0.3 0.5 0.3 0.3
抗生素B相对浓度 0 0 0 0 0.3 0.5
菌落数 110 90 60 0 60 60
A.上述涉及的结核分枝杆菌的接种方法最可能是平板划线法
B.该实验的自变量为抗生素的种类
C.在一定范围内,抗生素A的杀菌能力与浓度呈正相关
D.抗生素B的杀菌能力大于抗生素A的
答案:C
解析:平板划线法用于菌种分离,而稀释涂布平板法更适用于菌落计数。由表可知,统计了各培养基的菌落数,故接种方法应为稀释涂布平板法,A错误;实验自变量包括抗生素种类和浓度(如组别Ⅰ~Ⅳ改变A浓度,Ⅴ~Ⅵ改变B浓度),而非单一变量,B错误;抗生素A浓度从0.1增至0.5 mg·mL-1时,菌落数从90降至0,说明在一定范围内,其杀菌能力与浓度呈正相关,C正确;组别Ⅲ(仅A 0.3)与Ⅴ、Ⅵ(A 0.3+B 0.3或0.5)菌落数均为60,表明抗生素B未增强杀菌效果,无法证明B杀菌能力更强,D错误。
9.(2026·江苏南京模拟)牛、羊等反刍动物具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物能分解纤维素。某科研团队按照如图1所示的流程分离瘤胃中的纤维素分解菌,实验中需要甲、乙两种培养基。
(1)获得纯净的微生物培养物的关键是　　　　　　　　　,无菌技术主要包括　　　　　　。
(2)从①开始分离筛选纤维素分解菌,甲培养基中除含有水、无机盐、氮源外还应以　 ,
该培养基按功能来分应为　　　培养基。甲、乙两培养基的主要区别是　 。
(3)过程②所使用的接种方法是　　　　　。可在培养基表面均加入一层无菌的石蜡,其作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
(4)刚果红可以与纤维素形成　　　　　复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见图2),图中降解纤维素能力最强的菌株是　　　　　(填图中序号),原因是　 　 。
(5)在5个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为104的胃部样液0.1 mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为189、175和179,则每毫升样品中含有细菌数量为　　　　个。通过该方法所得细菌数量一般较实际结果　　　　,原因是　 　 。
答案:(1)防止杂菌污染　消毒和灭菌
(2)纤维素为唯一碳源　选择　甲中无琼脂
(3)稀释涂布平板法　瘤胃中的纤维素分解菌属于厌氧微生物,石蜡密封创设无氧环境,有利于瘤胃中的纤维素分解菌生长发育
(4)红色　菌落①　菌落①的降解圈直径与菌落直径的比值最大
(5)1.81×107　偏低　当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是单个菌落
解析:(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括消毒和灭菌。
(2)微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等,筛选纤维素分解菌时,需要使用纤维素作为唯一碳源的选择培养基,该培养基按功能来分应为选择培养基。由图1可知,甲培养基为液体培养基,乙培养基为固体培养基,二者区别在于甲中无琼脂,而乙中有琼脂。
(3)乙培养基上形成的菌落分布均匀,因此过程②所使用的接种方法是稀释涂布平板法;瘤胃中的纤维素分解菌属于厌氧微生物,石蜡密封创设无氧环境,有利于瘤胃中的纤维素分解菌生长繁殖。
(4)在培养基中加入刚果红,可与培养基中的纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,红色复合物不能形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明降解圈,从而可筛选纤维素分解菌。图2中降解圈大小与纤维素酶的量与活性有关,降解纤维素能力最强的菌株是①,因为其周围的降解圈直径与菌落直径的比值最大。
(5)在5个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为104的胃部样液0.1 mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为189、175和179,则平板的平均菌落数为(189+175+179)÷3=181,则每毫升样液中的细菌数量约为181÷0.1×104=1.81×107个。由于当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是单个菌落,所以通过该方法所得细菌数量一般较实际结果偏低。(共26张PPT)
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1.(2026·辽宁抚顺模拟)做微生物的纯培养实验时,既要配制适宜的培养基,又要防止杂菌污染。下列说法正确的是(　　)
A.培养基上获得的菌落都是由单个微生物繁殖形成的
B.培养霉菌时,一般需将培养基的pH调至酸性
C.不含氮源的培养基不能用于微生物培养
D.配制好的培养基采用干热灭菌,以防止杂菌污染
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解析:微生物的纯培养实验中培养基上经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物,但是有的菌落可能由两个细胞连在一起繁殖形成一个菌落,A错误;培养霉菌时,一般需将培养基的pH调至酸性,
B正确;微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,不含氮源的培养基可以用于固氮微生物的培养,C错误;配制好的培养基可以采用高压蒸汽灭菌(湿热灭菌),其目的是防止杂菌污染培养基,这是获得纯净培养物的关键,D错误。
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2.(2026·河南安阳模拟)下列关于无菌操作的叙述,正确的是(　　)
A.煮沸消毒不能杀死微生物的细胞
B.应尽量选择脱脂棉塞住试管口,否则容易造成吸水污染
C.配制培养基时应该先灭菌再调节pH
D.对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒
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解析:煮沸消毒法是在100 ℃煮沸5~6 min,可杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,A错误;由于脱脂棉吸水后容易引起污染,所以制作棉塞应该使用普通棉花,而不能使用脱脂棉,B错误;为避免杂菌污染,应先调节pH再灭菌,C错误;紫外线能破坏DNA结构,对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒,以营造无菌环境,D正确。
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3.(2026·江苏南京模拟)熔喷布的主要成分是聚丙烯,会对环境造成污染。某科研小组从土壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。下列说法正确的是(　　)
A.配制固体培养基时,需要在无菌的环境中进行
B.分离纯化细菌时,转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线
C.从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌,可采用平板划线法进行分离与计数
D.通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更高的碳氮比
B
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解析:配制固体培养基时,不需要在无菌的环境中进行,A错误;利用平板划线法接种时,每次划线前后都要灼烧接种环,因此转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线,B正确;从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌,可采用平板划线法进行分离,但不能计数,C错误;通常培养该细菌的培养基比酵母菌培养基有更低的碳氮比,D错误。
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4.(2026·河南新乡模拟)某实验小组通过控制苯浓度,对从污泥处理厂的活性污泥中筛选获得的苯降解菌进行驯化培养,挑选出合适的培养条件,同时驯化培养出较好的苯降解菌,培养的实验结果如表所示。下列有关叙述错误的是(　　)
组别 加入苯浓度/(g·L -1) 菌落个体/个 菌落密度/(个·L-1)
① 200 几乎无 几乎无
② 20 60 1 200
③ 2 54 1 120
④ 0.2 24 450
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A.该实验中驯化苯降解菌的培养基上应该加入适量的琼脂
B.第①组几乎没有菌落的原因可能是苯浓度过高对细菌产生了毒性
C.第④组菌落数目少的原因可能是培养基上的碳源的含量不足
D.由该实验可知,20 g·L-1的苯浓度是培养苯降解菌的最适浓度
答案:D
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解析:若要培养菌落,通常在培养基中加入适量琼脂制成固体培养基,A正确;第①组苯浓度过高,可能超出了细菌所能承受的范围,对细菌产生毒性,抑制其生长和繁殖,导致几乎没有菌落,B正确;第④组苯浓度过低,提供的碳源不足,可能无法满足细菌生长所需,导致菌落数目少,C正确;仅根据这几组实验数据,不能确定20 g·L-1的苯浓度就是培养苯降解菌的最适浓度,还需要设置更多、更小浓度梯度的实验来进一步确定,D错误。
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5.(2025·江西卷,15改编)为高效检测抗菌剂的抗菌效果,研究人员构建了能够表达外源荧光素酶的重组菌Q,将其接种到有足量荧光素的液体培养基中,一段时间后添加待测抗菌剂,定时检测培养液的荧光强度。下列有关该实验的叙述,正确的是(　　)
A.需要设置一个对照组保证检测结果的准确性
B.实验过程中所用的培养基是一种选择培养基
C.在重组菌Q胞内的荧光素酶可催化荧光素水解
D.培养液的荧光强度变化不可作为抗菌效果的判断依据
A
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解析:实验中需设置不加抗菌剂的对照组,以排除菌体自然裂解等因素的影响,确保荧光强度变化由抗菌剂引起,A正确;重组菌Q已构建成功,实验目的是检测抗菌效果,所用培养基含足量荧光素,属于鉴别培养基,B错误;荧光素位于胞外,荧光素酶在胞内,两者无法直接接触反应,只有当菌体裂解后酶释放至胞外,才能催化荧光素发光,C错误;抗菌剂有效时,菌体死亡裂解,荧光素酶释放催化荧光素,荧光强度显著增加,无效时,菌体存活,酶滞留胞内,荧光强度变化小,因此,荧光强度变化可直接反映抗菌效果,D错误。
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6.(2026·广东湛江模拟)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长;氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸,只能在完全培养基上生长。某大肠杆菌氨基酸营养缺陷型突变株纯化的部分流程如图所示,其中①②③④代表培养基,A、B、C表示操作步骤,甲、乙为菌落。下列叙述正确的是(　　)
A.图中①②③是完全培养基
B.运用稀释涂布平板法对菌液中的活菌
进行计数统计结果可能比实际活菌数多
C.可使用紫外线处理野生型大肠杆菌使其发生染色体变异获得亮氨酸营养缺陷型突变株
D.为获得目的菌株,可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养
D
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解析:野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长,氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸,只能在完全培养基上生长,根据题干信息和题图分析,图中①②④为完全培养基,③为基本培养基,A错误;运用稀释涂布平板法对菌液中的活菌进行计数时,统计的数目比实际活菌数少,原因是当两个或多个菌落靠近到一定程度连在一起时,平板上记录为一个菌落,B错误;大肠杆菌属于原核生物,细胞内不含染色体,C错误;据图可知,甲在基本培养基中无法生长,在完全培养基中可以生长,说明甲是氨基酸营养缺陷型突变株,故为获得目的菌株,可从甲处挑选菌株进行进一步纯化培养,D正确。
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7.(2026·江西吉安模拟)牛是一种反刍动物,其瘤胃内含有大量共生微生物,包括细菌、真菌和原生动物。其中,纤维素分解菌是核心功能群体。科研人员为统计牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌的数量并挑选出能高效分解纤维素的目的菌,进行了如下实验。平板①②③上菌落数的最大值分别为 60、63、66个。下列相关叙述错误的是(　　)
A.为了利于挑选出目的菌,培养箱内应氧气充足、温度适宜
B.该牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌约有3.15×107个·mL-1
C.从菌落甲中更有可能得到高效分解纤维素的目的菌
D.各平板中,纤维素是唯一的碳源,但不是唯一含碳物质
A
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解析:由于牛瘤胃内是无氧环境,所以从牛瘤胃内的液体中分离出的目的菌主要为厌氧菌,故培养箱内应提供无氧环境、适宜的温度,A 错误;该牛瘤胃内的液体中纤维素分解菌约有(60+63+66)÷3÷0.2×105=
3.15×107个·mL-1,B 正确;与菌落乙相比,菌落甲的透明圈直径与菌落的直径比值大,所以形成菌落甲的纤维素分解菌分解纤维素的能力更强,即应从菌落甲中进行挑选,C正确;各平板中,纤维素是唯一的碳源,但平板中有凝固剂(琼脂),凝固剂含碳,D正确。
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8.(2026·广东东莞模拟)研究人员将结核分枝杆菌分别接种在含有不同浓度(单位:mg·mL-1)抗生素A与B的培养基中,在37 ℃的条件下培养24小时后,统计各培养基中的菌落数,结果如表所示。下列叙述正确的是(　　)
组别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
抗生素A相对浓度 0 0.1 0.3 0.5 0.3 0.3
抗生素B相对浓度 0 0 0 0 0.3 0.5
菌落数 110 90 60 0 60 60
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A.上述涉及的结核分枝杆菌的接种方法最可能是平板划线法
B.该实验的自变量为抗生素的种类
C.在一定范围内,抗生素A的杀菌能力与浓度呈正相关
D.抗生素B的杀菌能力大于抗生素A的
答案:C
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解析:平板划线法用于菌种分离,而稀释涂布平板法更适用于菌落计数。由表可知,统计了各培养基的菌落数,故接种方法应为稀释涂布平板法,A错误;实验自变量包括抗生素种类和浓度(如组别Ⅰ~Ⅳ改变A浓度,Ⅴ~Ⅵ改变B浓度),而非单一变量,B错误;抗生素A浓度从0.1增至0.5 mg·mL-1时,菌落数从90降至0,说明在一定范围内,其杀菌能力与浓度呈正相关,C正确;组别Ⅲ(仅A 0.3)与Ⅴ、Ⅵ(A 0.3+B 0.3或0.5)菌落数均为60,表明抗生素B未增强杀菌效果,无法证明B杀菌能力更强,D错误。
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9.(2026·江苏南京模拟)牛、羊等反刍动物具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物能分解纤维素。某科研团队按照如图1所示的流程分离瘤胃中的纤维素分解菌,实验中需要甲、乙两种培养基。
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(1)获得纯净的微生物培养物的关键是　　　　　　　　　,无菌技术主要包括　　　　　　。
解析:获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括消毒和灭菌。
防止杂菌污染
消毒和灭菌
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(2)从①开始分离筛选纤维素分解菌,甲培养基中除含有水、无机盐、氮源外还应以　 , 该培养基按功能来分应为　 　培养基。甲、乙两培养基的主要区别是　 。
解析:微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等,筛选纤维素分解菌时,需要使用纤维素作为唯一碳源的选择培养基,该培养基按功能来分应为选择培养基。由图1可知,甲培养基为液体培养基,乙培养基为固体培养基,二者区别在于甲中无琼脂,而乙中有琼脂。
纤维素为唯一碳源
选择
甲中无琼脂
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(3)过程②所使用的接种方法是　　　　 　。可在培养基表面均加入一层无菌的石蜡,其作用是________________________________
____________________________________________________________
　　　。
解析:乙培养基上形成的菌落分布均匀,因此过程②所使用的接种方法是稀释涂布平板法;瘤胃中的纤维素分解菌属于厌氧微生物,石蜡密封创设无氧环境,有利于瘤胃中的纤维素分解菌生长繁殖。
稀释涂布平板法
瘤胃中的纤维素分解菌属于厌氧微生物,石蜡密封创设无氧环境,有利于瘤胃中的纤维素分解菌生长发育
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(4)刚果红可以与纤维素形成　　　复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见图2),图中降解纤维素能力最强的菌株是　 　　(填图中序号),原因是_______________________________
　 　 。
红色
菌落①
菌落①的降解圈直径与菌落直径的
比值最大
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解析:在培养基中加入刚果红,可与培养基中的纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,红色复合物不能形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明降解圈,从而可筛选纤维素分解菌。图2中降解圈大小与纤维素酶的量与活性有关,降解纤维素能力最强的菌株是①,因为其周围的降解圈直径与菌落直径的比值最大。
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(5)在5个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为104的胃部样液0.1 mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为189、175和179,则每毫升样品中含有细菌数量为　　　 　个。通过该方法所得细菌数量一般较实际结果　　　　,原因是________________________________
　 　 。
1.81×107
偏低
当两个或多个细胞连在一起时,平板
上观察到的只是单个菌落
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解析:在5个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为104的胃部样液0.1 mL,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为189、175和179,则平板的平均菌落数为(189+175+179)÷3=181,则每毫升样液中的细菌数量约为181÷0.1×104=1.81×107个。由于当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是单个菌落,所以通过该方法所得细菌数量一般较实际结果偏低。

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