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第1章 发酵工程
第2节 微生物的培养技术及应用
二 微生物的选择培养和计数
A级　基础达标练
一、选择题
1．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作(　　)
A．鉴别培养基　　　　 B．加富培养基
C．选择培养基 D．基础培养基
2．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是(　　)
A．平板上的一个菌落就是一个细菌
B．菌落中的细菌数是固定的
C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
D．此方法统计的菌落数一定与实际的活菌数相同
3．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106培养基中得到以下几种统计结果，正确的是(　　)
A．涂布1个平板，统计菌落数是230
B．涂布2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238
C．涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163
D．涂布了3个平板，统计的菌落数分别为210、240、250，取平均值233
4．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是(　　)
①加尿素　②不加尿素　③加琼脂　④不加琼脂　⑤加葡萄糖　⑥不加葡萄糖　⑦加硝酸盐　⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑧ B．②④⑥⑧
C．①③⑤⑦ D．①④⑥⑦
5．(不定项)下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，不正确的是(　　)
A．分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液
B．测定土壤样品中的活菌数目，常用稀释涂布平板法
C．取土样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌
D．实验组一平板上有56个菌落，空白对照平板上有3个菌落，则该实验组菌落数计为53
二、非选择题
6．请分析以下材料，并回答问题：
材料一：硝化细菌是一类能进行化能合成作用的细菌，包括亚硝酸细菌和硝酸细菌两个菌群，这两个菌群通常生活在一起。亚硝酸细菌可将氨氧化成亚硝酸，硝酸细菌可将亚硝酸氧化成硝酸，氨和亚硝酸分别是亚硝酸细菌和硝酸细菌的唯一能源。
材料二：可利用以下两种选择培养基，通过振荡培养从土壤中分离得到较纯净的硝酸细菌和亚硝酸细菌。
1号选择培养基 2号选择培养基
(NH4)2SO4 NaNO2
NaCl MnSO4
FeSO4 Na2CO3
K2HPO4 K2HPO4
MgSO4 MgSO4
CaCO3 NaH2PO4
蒸馏水 蒸馏水
(1)2号培养基中主要起选择作用的物质是_____________细菌不能生长繁殖的主要原因是________________________________________________________________________
(2)硝化细菌属于__________________(填“好氧”或“厌氧”)细菌。
(3)用1号培养基可分离得到较纯净的亚硝酸细菌，是因为NH达到一定浓度后会抑制硝酸细菌的生长繁殖。若要探究抑制硝酸细菌生长繁殖的NH浓度，可在2号培养基中加入___________和不同浓度的__________________，制备多组培养基，利用___________法将等量稀释度相同且适宜的纯净硝酸细菌菌液分别接种于各组培养基中，培养一段时间后统计培养基中的___________数。
B级　合格达标练
一、选择题
1．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是(　　)
A．未接种的选择培养基 B．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基
C．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基
2．板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是(　　)
A．都要将菌液进行一系列的梯度稀释
B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面进行连续划线的操作
C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养
D．都是在固体培养基上进行的，都需要在酒精灯火焰旁进行接种
3．在做分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。下列有关叙述，出现科学性错误的是(　　)
A．甲同学出现这种结果的原因可能是土样不同，也可能是操作过程出了问题
B．可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染
C．让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学无误
D．B、C选项的实验思路都遵循了实验的对照原则
4．大肠杆菌含量是国家饮用水重要检测指标之一，如图所示，用滤膜法和伊红——亚甲蓝琼脂培养基(EMB培养基)测定水中大肠杆菌含量的大致流程为准备工作→用滤膜过滤待测水样→将滤膜转移到EMB培养基上→培养→观察并统计菌落数目。下列叙述正确的是(　　)
伊红——亚甲蓝琼脂培养基配方 基础培养基 100 mL 20%乳糖溶液 2 mL 2%伊红水溶液 2 mL 0.5%亚甲蓝水溶液 1 mL 琼脂 1.5 g
A．EMB培养基从用途来分属于选择培养基
B．配方的基础培养基中除水外还必须含有无机盐和碳源
C．观察并统计菌落数目时，应选择培养基上的深紫色菌落进行计数
D．选用滤膜孔径的大小不会影响实验结果
5．(不定项)营养缺陷型菌株是野生型菌株经过人工诱变或自发突变失去合成某种生长因子的能力，只能在补充了相应的生长因子的基本培养基中才能正常生长的变异菌株。某研究小组对酵母菌用紫外线照射后将其接种到甲培养皿的培养基上，一段时间后将甲培养皿的菌落影印接种(不改变菌落位置)到乙、丙两培养皿的培养基中，进一步培养得到如图所示结果。
下列分析正确的是(　　)
A．接种到甲培养皿采用的是稀释涂布平板法
B．甲、丙两培养皿中的培养基是基本培养基
C．甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少
D．甲、乙、丙三个培养皿都可能存在营养缺陷型
6．(不定项)某科研人员欲从被石油污染的土壤中分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株X，为消除石油污染提供微生物资源。下列叙述正确的是(　　)
A．若图中A～C以“多环芳烃菲”为唯一碳源的选择培养基进行培养，可提高降解菌的浓度
B．本实验用到的固体培养基在接种前是不透明的，周围有透明圈的菌落即为目的菌落
C．在接种前，可将灭菌后的空白平板先培养一段时间，目的是检测培养基平板灭菌是否合格
D．可用平板划线法或稀释涂布平板法对分离出的菌种进行纯化并计数
二、非选择题
7．某种物质S(一种含氮有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照如图1所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要Ⅰ、Ⅱ两种培养基，Ⅰ的组分为无机盐、水和S，Ⅱ的组分为无机盐、水、S和Y。
回答下列问题：
(1)实验中，盛有水或培养基的摇瓶通常采用____________(湿热灭菌法)进行灭菌。Ⅱ培养基中的Y物质是________________________。
Ⅰ、Ⅱ培养基均属于____________培养基。
(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释______倍。
(3)物质S在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。从淤泥中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图2所示)。如果要得到目标菌，应该选择_____菌落进一步纯化，选择的依据是____________________________________。
(4)淤泥中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即__________________________________________________________________________________________________________________________。
参考答案
A级　基础达标练
一、选择题
1．
答案：C
2．
答案：C
3．
答案：D
4．
答案：A
5．
答案：AD
二、非选择题
6．
答案：
(1) NaNO2 缺乏亚硝酸细菌生长繁殖所需的唯一能源物质氨
(2) 好氧
(3) 琼脂 (NH4)2SO4(或NH) 稀释涂布平板 菌落
解析：材料一是回答(1)(2)(3)的依据；对材料二的分析应从表中成分的分析着手。
B级　合格达标练
一、选择题
1．
答案：B
2．
答案：D
3．
答案：D
4．
答案：C
5．
答案：AC
6．
答案：ABC
二、非选择题
7．
答案：
(1) 高压蒸汽 琼脂 选择
(2) 104
(3) 乙 乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解S
(4) 将甲菌接种在不含氮源的培养基上，若甲菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源
解析：
(1)实验中，盛有水或培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽(湿热灭菌法)进行灭菌。Ⅱ培养基为固体培养基，因此，Ⅱ培养基中的Y物质是琼脂。Ⅰ、Ⅱ培养基均以物质S为唯一的氮源，属于选择培养基。
(2)利用稀释涂布平板法对细菌进行计数，要保证每个平板上长出的菌落数不超过200，假设稀释倍数为a，在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液，则有200×a÷0.1＝2×107，则稀释倍数a＝104，即至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。
(3)物质S在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。据此可推测，随着物质S被降解，菌落周围应会出现透明圈，且透明圈越大，细菌分解物质S的能力越强，据图2可知，如果要得到目标菌，应该选择乙菌落进一步纯化，因为乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解S。
(4)淤泥中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲菌能否利用空气中的氮气作为氮源，若甲菌能利用空气中的氮源，则在不含氮源的培养基上能生长，因此实验设计思路为：将甲菌接种在不含氮源的培养基上，若甲菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源。
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