资源简介

第62讲　动物细胞工程
1 [2025扬州模拟]动物细胞培养与植物组织培养的共同点是(　　)
A. 都需定期更换培养液
B. 都要先分散成单个细胞
C. 都不需要进行无菌处理
D. 都离不开细胞的分裂和分化
2 [2025广东卷]将人眼睑成纤维细胞传代培养后，再培养形成支架，在该支架上接种人口腔黏膜上皮细胞，培养一段时间后分离获得上皮细胞片层，可用于人工角膜的研究。上述过程不涉及(　　)
A. 制备细胞悬液
B. 置于5%CO2等适宜条件下培养
C. 离心收集细胞
D. 用胰蛋白酶消化支架后分离片层
3 [2025淮安联考]下图为肾脏上皮细胞培养过程示意图。下列有关叙述错误的是(　　)
A. 甲→乙过程可用机械法或酶解法处理获得单个细胞
B. 丙过程指细胞在添加血清的合成培养基中原代培养
C. 丙过程会出现细胞贴壁生长和接触抑制现象
D. 丁过程为传代培养，细胞都能进行无限增殖
4 [2025山东卷]利用动物体细胞核移植技术培育转基因牛的过程如图所示，下列说法错误的是(　　)
A. 对牛乙注射促性腺激素是为了收集更多的卵母细胞
B. 卵母细胞去核应在其减数分裂Ⅰ中期进行
C. 培养牛甲的体细胞时应定期更换培养液
D. 可用PCR技术鉴定犊牛丁是否为转基因牛
5 [2026南京期中]CLDN6蛋白是一种跨膜蛋白，包括胞外区、跨膜区和胞内区，在正常组织细胞中低表达，而在多种癌细胞中特异性高表达，研究者利用其来制备诊断癌症的单克隆抗体。下列叙述错误的是(　　)
A. 悬浮培养的杂交瘤细胞传代培养时，可用离心法直接收集
B. 可提取CLDN6蛋白胞外区基因序列用于制备免疫小鼠所用的抗原
C. 灭活病毒表面的糖蛋白等能与细胞膜上的脂质分子相互作用，诱导细胞融合
D. 单克隆抗体能准确识别抗原的细微差异并与之特异性结合，且可大量制备
6 [2025盐城八校联考]单克隆抗体是由一种杂交瘤细胞经无性繁殖而来的细胞群所产生的，具有高度特异性。下列有关单克隆抗体及其制备过程的叙述，正确的是(　　)
A. 对已免疫小鼠脾脏中的浆细胞进行传代培养，是为了扩大细胞数量
B. 在选择培养基上，未融合的细胞会死亡，融合的细胞都能正常生长
C. 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞只有注射到小鼠腹腔内才能大量增殖
D. 单克隆抗体能准确识别不同抗原之间的细微差异，可用于抗原检测
7 [2025湖北卷]利用犬肾细胞MDCK扩增流感病毒，生产流感疫苗，具有标准化、产量高等优点。但MDCK细胞贴壁生长的特性不利于生产规模的扩大，严重制约疫苗的生产效率。研究人员通过筛选，成功获得一种无成瘤性的(多代培养不会癌变)、可悬浮培养的MDCK细胞——XF06。下列叙述错误的是(　　)
A. XF06悬浮培养可提高细胞密度，进而提升生产效率
B. 细胞贴壁生长特性的改变是由流感病毒感染所导致
C. 可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒
D. 采用无成瘤性细胞生产疫苗，是为了避免疫苗中有致瘤DNA的污染
8 [2024常州学业水平检测]下列关于动物细胞核移植的叙述，错误的是(　　)
A. 该技术中的去核可在没有穿透卵母细胞透明带的情况下进行
B. 直接将供体细胞注入去核卵母细胞可以提高移植成功率
C. 受体细胞用去核的卵母细胞使克隆动物的遗传物质几乎全部来自供体
D. 从动物囊胚中提取部分内细胞团细胞测定克隆动物的基因型并预测其性状
9 [2026江苏五校联考]在体细胞克隆猴培育过程中，为调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂(TSA)处理，具体流程如下图所示。下列说法错误的是(　　)
A. 可利用蛋白酶合成抑制剂激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程
B. 选取MⅡ期卵母细胞去除由核膜包被的卵母细胞的细胞核
C. 去核时使用的梯度离心、紫外光照射和化学物质处理等方法都未穿透卵母细胞透明带
D. 组蛋白去甲基化和乙酰化的表观遗传修饰都有利于重构胚的分裂和发育
10 (多选)[2024南外、金陵、海安三校联考]某国曾批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请，其培育过程可选用如图技术路线。据图分析，下列叙述正确的有(　　)
　
A. 捐献者在提取卵母细胞前通常需要进行同期发情处理
B. 该技术有效避免了母亲的线粒体遗传病基因传递给后代
C. 体外培养时中需加入CaCl2溶液激活重组卵母细胞
D. “三亲婴儿”同时拥有父母的部分核基因和捐献者的细胞质基因
11 (多选)[2026江苏百校联考]CDR移植就是将鼠源单克隆抗体(简称鼠源性单抗，特异性强、亲和力高)可变区中互补决定区(CDR)序列取代人源抗体相应CDR序列，重组构成人源化抗体。下列相关叙述正确的有(　　)
A. 制备单抗时使用的灭活病毒可破坏病毒的抗原结构，使其失去感染能力
B. 制备鼠源性单抗过程主要需进行两次不同目的的筛选，第二次筛选的原理是抗原—抗体杂交
C. CDR移植中构建轻链和重链的基因表达载体的过程需要DNA连接酶和限制酶
D. 人源化抗体既有鼠源性单抗的特异性与亲和力，又能最大限度地降低免疫原性
12 (多选)[2024南京东山高级中学期中]如图表示利用细胞融合技术进行基因定位的过程，在人—鼠杂种细胞中，人的染色体会以随机方式丢失，通过分析基因产物进行基因定位。现检测细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4种酶活性，只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性。下列相关叙述正确的有(　　)
A. 加入灭活仙台病毒的作用是促进细胞融合
B. 细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别为人—人、人—鼠、鼠—鼠融合细胞
C. 芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色体上
D. 胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上
13 [2025徐州期末]两种不同杂交瘤细胞融合得到的双杂交瘤细胞能够悬浮在培养基中生长繁殖，且可以产生双特异性抗体。某些种类癌细胞表面会过量表达膜蛋白PSMA。某些特异性物质和T细胞表面受体CD28蛋白结合后，能活化T细胞。图1表示双特异性抗体PSMA×CD28的生产流程。请回答下列问题。
图1
(1) 据图1分析，双特异性抗体生产过程中，应先将______________分别注射到小鼠体内，一段时间后获取小鼠脾脏并用________酶进行处理分离出B淋巴细胞，双杂交瘤细胞在进行传代培养前________(填“需要”或“不需要”)用上述酶处理，将细胞置于含有______________的混合气体的培养箱中培养，同时为了防止有害代谢物的积累，可采用______________的方法，以便清除代谢物。
(2) 图2为细胞在“HAT培养基(含有H、A、T三种物质)”上合成核苷酸的途径及阻断原理，其中，骨髓瘤细胞只能利用全合成途径合成核苷酸，B淋巴细胞两种途径都能进行。将“B细胞”“B—B融合细胞”“瘤细胞”“瘤—瘤融合细胞”在HAT培养基上培养，其中因无法合成核苷酸而不能增殖的有__________________，杂交瘤细胞在“HAT培养基”上可以通过________途径合成核苷酸实现无限增殖，从而筛选出杂交瘤细胞。
图2
(3) 将筛选获得的杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过______个，通过培养让其增殖，然后利用____________原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
(4) 单克隆抗体是由两条相同的H链和L链组成的4条肽链对称结构，成功融合的双杂交瘤细胞会表达两种H链和两种L链，由于____________，双杂交瘤细胞A×B在理论上会产生多种抗体，因此还需要进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。双特异性抗体PSMA×CD28的结构及作用机理如图3所示，其协助杀伤癌细胞的机理是_________________________________________
___________________________________，从而有利于活化的T细胞杀伤癌细胞。
图3
第62讲　动物细胞工程
1 A　两种技术都需要定期更换培养液，避免培养液中营养不足或细胞自身代谢产物增多影响细胞生存，A正确；植物组织培养中不需要将细胞分散成单个细胞，B错误；两种技术都需要进行无菌技术操作，C错误；动物细胞培养只有细胞增殖，植物组织培养既有细胞增殖也有细胞分化，D错误。
2 D　动物细胞培养时，为增大细胞与培养液的接触面积，需要制备细胞悬液，A正确；5%的CO2可维持培养液的pH，B正确；在成纤维细胞传代培养过程中需要通过离心收集细胞，C正确；不用胰蛋白酶消化支架，避免将上皮细胞片层分离成单独细胞，D错误。
3 D　丁过程为传代培养，细胞传至10～50代会逐渐缓慢，直到完全停止，当继续传代培养时少部分细胞会获得不死性，这些细胞已经发生了突变，D错误。
4 B　卵母细胞去核应在其减数分裂Ⅱ中期进行，B错误。
5 C　悬浮培养的杂交瘤细胞无需贴壁生长，传代时可直接通过离心法收集细胞，无需胰蛋白酶处理，A正确；可提取CLDN6蛋白胞外区基因序列通过基因工程制备免疫小鼠所用的抗原，B正确；灭活病毒通过其表面糖蛋白与细胞膜上的蛋白质分子相互作用，促进细胞膜融合，此为灭活病毒诱导细胞融合的原理，C错误。
6 D　浆细胞是高度分化的细胞，不进行细胞分裂，无法通过传代培养以扩大细胞数量，A错误；在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长，B错误；可将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，C错误。
7 B　悬浮培养的XF06细胞无需贴壁，可在培养液中自由增殖，从而提高细胞密度，扩大病毒产量，提升生产效率，A正确；XF06细胞的贴壁特性改变是通过筛选获得的遗传特性，而非流感病毒感染所致(病毒感染仅用于扩增病毒，不改变宿主细胞生长方式)，B错误；流感病毒释放到细胞裂解液后，离心可分离细胞碎片(沉淀)与病毒(上清液)，C正确，D正确。
8 D　卵母细胞去核方法有紫外线照射法等，可以在没有穿透透明带的情况下进行，A正确；从动物囊胚中提取滋养层细胞测定克隆动物的基因型并预测其性状，D错误。
9 B　重构胚的激活可采用电刺激法、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等，使其完成细胞分裂和发育进程，A正确；常用显微操作法去除卵母细胞的“核”，此处的“核”是纺锤体—染色体复合物，不具有核膜，B错误；目前核移植技术中普遍使用的去核方法是密度梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理，这些方法都没有穿透卵母细胞透明带或细胞膜，C正确；研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理，即将组蛋白去甲基化和增加乙酰化，有利于重构胚的分裂和发育，使其完成细胞分裂和发育进程，D正确。
10 BD　捐献者在提取卵母细胞前通常需要进行超数排卵处理，以获得更多的卵母细胞，A错误；体外培养时常用物理法或化学法(如电刺激、Ca2+载体、乙醇等)激活重组卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育进程，C错误。
11 BCD　灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构，灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，A错误。
12 ACD　细胞Ⅲ中保留了人的X、11、17号染色体，故不会是鼠—鼠融合细胞，B错误。
13 (1) PSMA蛋白、CD28蛋白　胰蛋白　不需要　95%空气和5%CO2　(定期)更换培养液　(2)瘤细胞和瘤—瘤融合细胞　补救合成 (3) 1　抗原抗体特异性结合　(4) H链和L链是随机组合的　(双特异性抗体PSMA×CD28)既能结合癌细胞表面的PSMA蛋白，又能结合T细胞表面的CD28蛋白(活化T细胞)，使癌细胞与活化的T细胞靠近
解析：(2) 因为骨髓瘤细胞只能利用全合成途径合成核苷酸，B淋巴细胞两种途径都能进行，全合成途径被A阻断剂阻断，因此无法合成核苷酸而不能增殖的有瘤细胞和瘤—瘤融合细胞。杂交瘤细胞可通过补救合成途径(利用H、T，经转化酶、激酶作用)合成核苷酸实现增殖，从而在HAT培养基上被筛选出。(3) 杂交瘤细胞克隆化培养时，多孔细胞培养板每孔细胞不超1个，保证单细胞克隆。利用抗原抗体特异性结合原理，检测各孔上清液中抗体，筛选出分泌所需抗体的杂交瘤细胞。(4) 成功融合的双杂交瘤细胞会表达两种L链(L1链和L2链)和两种H链(H1链和H2链)，由于H链和L链随机组合，双杂交瘤细胞甲会产生多种抗体，需进一步筛选。结合图3可知，双特异性抗体PSMA×CD28能同时结合癌细胞的PSMA蛋白和T细胞的CD28蛋白，使癌细胞与活化的T细胞靠近，利于T细胞杀伤癌细胞。第62讲　动物细胞工程
学习目标　1. 阐述动物细胞培养的过程、条件及干细胞的培养与应用。2. 概述动物细胞融合和单克隆抗体的制备过程及应用。3. 阐明动物细胞核移植的过程和克隆动物。
核心体系
活动方案
活动一 概述动物细胞培养的过程、条件及干细胞的培养与应用
下图是动物细胞培养的流程图，请回答下列问题。
(1) 动物细胞工程的基础是什么？在制备动物细胞悬液的过程中，首先要将组织块剪碎，其作用是什么？
(2) 幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞和分化程度高的细胞比较，哪些细胞更易于培养？为什么？
(3) 过程①和④是如何处理的？目的是什么？为什么不使用胃蛋白酶？
(4) 动物细胞培养所用的培养液中有哪些成分？分别起什么作用？
(5) 原代培养的细胞会出现什么现象？所有动物细胞的培养均有该现象吗？培养时需要控制哪些条件？放在二氧化碳培养箱中培养的目的是什么？
(6) 原代培养和传代培养的定义分别是什么？
(7) 下面列举了动物细胞培养技术的部分应用和实例，请用线将它们连接起来：
①生产生物制品 a. 筛选抗癌药物
②用于基因工程 b. 生产病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体
③检测有毒物质 c. 培养受体细胞
④用于生理、病理、 药理等研究 d. 判断物质的毒性
(8) 下图是科学家诱导iPS细胞形成的过程图，iPS细胞在适当的诱导条件下，可以定向分化成各种类型的细胞，如内分泌细胞、血细胞、心肌细胞和血管平滑肌细胞等。
①据图分析，iPS细胞的分化程度与________干细胞最接近。
②图中a过程类似于植物组织培养中的________过程，b过程的实质是_____
_________________________。
③iPS细胞与胚胎干细胞不同的根本原因是____________________________
______________________________________________________________________。
④若用患者自身细胞制备的iPS细胞，在体外分化培养出某种组织细胞，并植入患者体内，治疗相应疾病，如果发现出现了免疫排斥现象，可能的原因是____
______________________________________________________________________。
⑤利用iPS细胞治疗镰状细胞贫血的过程是首先制备患者的iPS细胞，再将其诱导形成__________，最终输给患者使其产生血细胞。该过程是否能治疗镰状细胞贫血？为什么？
⑥为什么iPS细胞的应用前景要优于ES细胞？
活动二 概述动物细胞融合与单克隆抗体的制备过程及应用
下图是制作抗病菌X的单克隆抗体示意图，请回答下列问题。
(1) 请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。
(2)单克隆抗体制备过程运用了动物细胞培养和________技术。
(3) 细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。人体淋巴细胞尽管有这两条途径，但不能无限增殖，肿瘤细胞尽管没有S途径，但能无限增殖。请依据该原理，设计化学方法获得C所示细胞的流程：动物细胞培养液中加入图中所示________(填字母)细胞，再加入聚乙二醇和________两种药剂，置于________恒温培养箱中培养一段时间，能够增殖的细胞只有________(填字母)。与植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合可还使用什么进行诱导？
(4) 图C所示细胞仍然不能作为生产目标单克隆抗体的种子细胞，原因是什么？图D所示细胞具有什么特点？
(5) 图G中细胞的获取需要经过克隆化培养及抗体检测，该过程一般在多孔细胞培养板上进行。先将细胞悬液稀释到7～10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是什么？
(6) 用抗HCG单克隆抗体做出诊断试剂，能在妊娠初期即可作出诊断，主要是因为该抗体具有什么优点？
活动三 概述动物细胞核移植以及克隆动物
我国首例完全自主培育的克隆猫“大蒜”在胚胎移植66 d后顺利分娩诞生，“大蒜”是一只非常可爱的短毛猫，小猫现在健康状况良好。这次成功培育克隆猫是世界为数不多的成功案例之一，标志着我国在克隆领域又迈进了一大步。下图为克隆猫“大蒜”培育过程的示意图，请回答下列有关问题。
(1) 用于核移植的供体细胞一般选用10代以内的细胞，为什么？受体细胞通常需要培养至什么时期？
(2) 从细胞水平分析，与取出体细胞的细胞核进行移植相比，过程②直接将猫“大蒜”的体细胞注入去核卵母细胞的优势是什么？
(3) 过程②通常用去核卵母细胞作受体细胞，该卵母细胞通常需发育到什么时期？选择该细胞除了它体积大易操作、营养物质丰富外，还因为它的细胞质中可能含有什么物质？
(4) 为什么体细胞核移植较胚胎细胞核移植更困难？通过体细胞核移植方法生产的克隆动物，不是对体细胞供体动物进行了100%的复制，原因是什么？
(5) 克隆动物过程中用到哪些技术手段？获得克隆动物的生殖方式是什么？
名卷优选
1. [2025北京卷]动物细胞培养基一般呈淡红色。某次实验时，调控pH的CO2耗尽，培养基转为黄色。由此推断使培养基呈淡红色的是(　　)
A. 必需氨基酸 B. 抗生素
C. 酸碱指示剂 D. 血清
2. [2026无锡月考]细胞工程技术已在生物制药和物种繁育等领域得到了广泛应用。下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是(　　)
A. 从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞
B. 将特定基因或特定蛋白导入已分化的T细胞，可将其诱导形成iPS细胞
C. 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合的细胞即为能分泌所需抗体的细胞
D. 采用胚胎分割技术克隆动物常选用桑葚胚或囊胚，因这两个时期的细胞未发生分化
3. 航天员叶光富和王亚平在天宫课堂上展示了培养的心肌细胞跳动的视频。下列叙述正确的是(　　)
A. 培养心肌细胞的器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌
B. 培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要CO2
C. 心肌细胞在培养容器中通过有丝分裂不断增殖
D. 心肌细胞在神经细胞发出的神经冲动的支配下跳动
4. [2024南通如皋适应性考]研究表明，髓系细胞触发受体2(TREM2)是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图。下列相关说法正确的是(　　)
A. 步骤①和⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和TREM2抗体
B. 步骤③筛选得到的细胞需传代培养以防止出现接触抑制
C. 植物组织培养需要的气体条件和步骤⑥相同
D. TREM2单克隆抗体的使用可以增强免疫系统的监视功能
5. [2025重庆卷]为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙(种群数量多)进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是(　　)
A. 克隆动物的核基因组来源于甲、乙
B. 体外受精需用获能的精子与MⅠ期的卵母细胞受精
C. 囊胚①的内细胞团可发育为胎盘、个体
D. 滋养层可影响内细胞团的发育
6. [2024江苏模拟]如图所示，将由两种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是(　　)
A. 同时注射两种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞
B. 利用双抗与蛋白类药物结合可以选择性杀伤靶细胞
C. 筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的两种抗原
D. 单抗制备时需要将免疫后的活化B细胞与骨髓瘤细胞融合
7. (多选)[2024南京模拟]嵌合抗原受体T细胞(CAR T)是癌症治疗的研究热点。其原理是将CAR基因导入T细胞获得CAR T，进而表达出特异性更强的癌细胞抗原受体蛋白(CAR)。相比自然状态下的细胞毒性T细胞，CAR T对肿瘤细胞的杀伤性、靶向性更强。治疗流程如图所示。下列叙述错误的有(　　)
A. 步骤②属于生物工程中的细胞工程
B. CAR T细胞的CAR能特异性识别并杀伤癌细胞
C. 步骤④可选用动物病毒或噬菌体作为载体
D. 步骤⑤需定期更换培养液以补充营养物质并清除代谢废物
8. (多选)[2026淮安期中]细胞培养肉技术是一项新型食品合成技术，生产流程如图所示，下列叙述正确的有(　　)
A. 为满足规模化生产，可使用蛋白酶分离出具有体外增殖能力的干细胞进行培养
B. 为提高安全性，①过程使用的培养基中应添加高压蒸汽灭菌后的血清
C. ②过程中可通过悬浮培养、保证溶解氧含量等方式实现干细胞的大量增殖
D. 为获得肥瘦相间的培养肉，除肌纤维外，③过程中还需诱导分化出脂肪细胞
9. 下图表示利用经抗原免疫后的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞进行杂交，制备单克隆抗体的过程，请据图回答下列问题。
(1) 在单克隆抗体的制备过程中，应用了细胞工程中的____________和____________两大技术。
(2) 将特定的抗原注入小鼠，需在一定时间内间隔注射3次，其目的是______
_____________________________。
(3) 培养杂交瘤细胞的培养基中需加入动物血清，原因是_________________
________________，植物组织培养的培养基与该培养基在物理性质方面相比，需要添加________，杂交瘤细胞体外培养过程中，为避免细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，常采取的措施是________________。
(4) 对筛选出来的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到 3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液________(填“0.1”或“10”)mL，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
(5) 单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(如癌变细胞等)并与之结合，而不攻击正常细胞，故可制成“生物导弹”，这是利用了________________________
__________________________________________。
第62讲　动物细胞工程
【活动方案】
活动一
(1) 动物细胞培养。增加细胞与酶的接触面积，加快反应速度。
(2) 细胞增殖能力与年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞则相反，所以，幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞更易于培养，同样，分化程度越低的细胞，增殖能力越强，所以更容易培养。
(3) 过程①和④都是用胰蛋白酶处理的。前者是为了使细胞分散开来，后者是使细胞从培养瓶壁上脱离下来。胃蛋白酶的催化需要在酸性条件下进行，动物细胞培养液的pH为弱碱性。
(4) 无机盐、微量元素等：维持渗透压的平衡，提供合成细胞内物质的原料；有机物(糖、氨基酸、促生长因子)：提供营养和能量，调节细胞的代谢；血清、血浆：补充培养细胞所需的暂不清楚的其他成分。
(5) 贴壁生长，接触抑制。不是，如血液类的细胞无贴壁生长，一些肿瘤细胞无接触抑制现象。营养；严格的无毒、无菌环境；适宜的温度、渗透压和pH；适宜的气体环境。在二氧化碳培养箱中培养，二氧化碳的作用是维持pH的稳定。
(6) 原代培养：动物组织经处理后的初次培养。
传代培养：传代培养过程中，贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶处理，然后分瓶培养(或液态细胞悬液的分瓶培养)，让细胞继续增殖。
(7) ①－b　②－c　③－d　④－a
(8) ①胚胎(全能)　②脱分化　基因的选择性表达　③DNA不同，iPS细胞比胚胎干细胞多了4个转录因子基因，来源也不同　④4个转录因子基因表达的蛋白质释放到细胞外，可以被免疫细胞所识别，导致免疫排斥　⑤造血干细胞　不能，因为患者体细胞的相应基因是突变的，制成iPS细胞仍然是突变的，分化成的血细胞也是突变的，因此无法通过该方法治疗。　⑥ES细胞必须从胚胎中获取，涉及伦理问题，限制了其在医学上的应用。iPS细胞的诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应。
活动二
(1)
(2) 动物细胞融合
(3) A、E　氨基喋呤　CO2　C　灭活的病毒。
(4) 因为图C所示细胞可能混有不能产生抗体或产生其他抗体的杂交瘤细胞。既能无限增殖，又能产生特定抗体。
(5) 使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
(6) 特异性强、灵敏度高。
活动三
(1) 10代以内的细胞具有正常的二倍体核型。MⅡ期。
(2) 避免取核过程对细胞核造成损伤。
(3) MⅡ期。促进细胞核全能性表达的物质。
(4) 动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难。克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但线粒体中的DNA来自受体卵母细胞。
(5) 核移植、早期胚胎培养、胚胎移植。无性生殖。
1 杂交瘤细胞两次筛选的方法和目的不同
第一次是用特定的选择培养基筛选杂交瘤细胞：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
第二次是用多孔培养板(如96孔板)克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能分泌所需抗体的细胞群。利用了抗原—抗体特异性结合的免疫学原理。
2 杂交瘤细胞的克隆化培养
(1) 新融合的杂交瘤细胞不稳定，容易失去分泌抗体的性质，一般需要进行几次检测以确保其稳定性。
(2) 克隆化培养是指由单个细胞分裂增殖获得细胞团的培养过程。将杂交瘤细胞用培养液充分稀释，接种到96孔细胞培养板，且每个孔中尽量只接种不超过1个，通过培养使其增殖为单克隆。一般经过3～4次培养和筛选才可以获得稳定的单克隆杂交瘤细胞。若再次检测抗体为阳性，就可以大规模生产。
【名卷优选】
1 C　必需氨基酸是细胞生长的营养成分，不参与指示pH变化，A错误；抗生素用于抑制微生物污染，与培养基颜色无关，B错误；酸碱指示剂(如酚红)在培养基中用于显示pH变化，在低pH值时酚红使培养液呈黄色，而较高的pH值时使培养液呈紫色，pH值7.2～7.4时为红色，C正确；血清提供生长因子，不直接导致颜色变化，D错误。
2 B　胰蛋白酶处理后直接培养的细胞为原代细胞，A错误；融合细胞有具有同种核的融合细胞和杂交瘤细胞，需筛选才能获得分泌特定抗体的杂交瘤细胞，C错误；囊胚细胞已开始分化，D错误。
3 B　培养心肌细胞的器具要先进行高压蒸汽灭菌，但是试剂并不都需要灭菌，如动物血清不能进行高压蒸汽灭菌，否则会使其中的成分失活，A错误；培养心肌细胞时既需要氧气，有助于进行有氧呼吸，也需要CO2，有助于维持培养液的pH，B正确；心肌细胞高度分化，不进行有丝分裂，C错误；心肌细胞是在神经细胞释放的神经递质的支配下跳动，D错误。
4 D　步骤①向小鼠注射TREM2蛋白，让小鼠发生免疫反应，获得能产生抗体的B淋巴细胞，步骤⑤向小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，目的是获得单克隆抗体，A错误；步骤③筛选得到的是杂交瘤细胞，能无限增殖不会出现接触抑制，B错误；动物细胞培养过程中加入CO2用于调节培养液的pH，而植物组织培养的过程中不需要CO2培养箱，C错误。
5 D　克隆动物的核基因组来源于甲，细胞质中的基因来源于乙，A错误；体外受精需用获能的精子与MⅡ期的卵母细胞受精，B错误；囊胚①的内细胞团可发育为个体，滋养层细胞发育为胎膜和胎盘的一部分，C错误；滋养层可影响内细胞团的发育，如滋养层细胞分泌的某些物质可能会影响内细胞团细胞的分化等，D正确。
6 A　同时注射两种抗原会刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，一种浆细胞只能产生一种抗体，并不能产生双抗，A错误；根据抗体与抗原特异性结合的原理，利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从而使药物作用于特定的靶细胞，B正确；双抗是由两种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子经过解偶联后重新偶联形成的，筛选时需要使用制备单克隆抗体时所使用的两种抗原来进行抗原—抗体检测，从而筛选出具有双特异性的抗体，C正确；单抗制备时需要将免疫后的活化B细胞与骨髓瘤细胞融合从而得到杂交瘤细胞，然后通过筛选得到既能产生相应抗体、又能大量增殖的杂交瘤细胞，D正确。
7 ABC　步骤②设计新的蛋白质，属于蛋白质工程，A错误；CART细胞的CAR能特异性识别癌细胞，细胞毒性T细胞杀死癌细胞，B错误；步骤④可选用灭活的动物病毒作为载体，噬菌体侵染的是细菌，噬菌体不能侵染动物细胞，C错误。
8 ACD　为满足规模化生产，可使用蛋白酶分解细胞间的胶原蛋白、粘连蛋白等连接物质，从而分离出具有体外增殖能力的干细胞进行培养，A正确；血清不能使用高压蒸汽灭菌，通常采用过滤除菌法，B错误；细胞培养过程中通常会出现贴壁生长和接触抑制，影响增殖，②的生物反应器具有足够大的表面积，可以实现一定程度的悬浮培养，涡轮搅拌也可增加培养液中溶解氧含量，从而实现细胞的扩大培养，C正确；肥瘦相间的培养肉除了含有蛋白质外，还含有脂肪，因此还需诱导分化出脂肪细胞，D正确。
9 (1) 动物细胞融合　动物细胞培养
(2) 加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的抗体和淋巴细胞
(3) 补充细胞生长所需的未知营养物质　琼脂　定期更换培养液
(4) 0.1
(5) 抗原与抗体高度特异性结合的特性(共45张PPT)
第11单元
生物技术与工程
第62讲　动物细胞工程
内容索引
核心体系
学习目标
活动方案
名卷优选
学 习 目 标
1. 阐述动物细胞培养的过程、条件及干细胞的培养与应用。2. 概述动物细胞融合和单克隆抗体的制备过程及应用。3. 阐明动物细胞核移植的过程和克隆动物。
核 心 体 系
活 动 方 案
下图是动物细胞培养的流程图，请回答下列问题。
活动一　概述动物细胞培养的过程、条件及干细胞的培养与应用
(1) 动物细胞工程的基础是什么？在制备动物细胞悬液的过程中，首先要将组织块剪碎，其作用是什么？
【答案】 动物细胞培养。增加细胞与酶的接触面积，加快反应速度。
(2) 幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞和分化程度高的细胞比较，哪些细胞更易于培养？为什么？
【答案】 细胞增殖能力与年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞则相反，所以，幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞更易于培养，同样，分化程度越低的细胞，增殖能力越强，所以更容易培养。
(3) 过程①和④是如何处理的？目的是什么？为什么不使用胃蛋白酶？
【答案】 过程①和④都是用胰蛋白酶处理的。前者是为了使细胞分散开来，后者是使细胞从培养瓶壁上脱离下来。胃蛋白酶的催化需要在酸性条件下进行，动物细胞培养液的pH为弱碱性。
(4) 动物细胞培养所用的培养液中有哪些成分？分别起什么作用？
【答案】 无机盐、微量元素等：维持渗透压的平衡，提供合成细胞内物质的原料；有机物(糖、氨基酸、促生长因子)：提供营养和能量，调节细胞的代谢；血清、血浆：补充培养细胞所需的暂不清楚的其他成分。
(5) 原代培养的细胞会出现什么现象？所有动物细胞的培养均有该现象吗？培养时需要控制哪些条件？放在二氧化碳培养箱中培养的目的是什么？
【答案】 贴壁生长，接触抑制。不是，如血液类的细胞无贴壁生长，一些肿瘤细胞无接触抑制现象。营养；严格的无毒、无菌环境；适宜的温度、渗透压和pH；适宜的气体环境。在二氧化碳培养箱中培养，二氧化碳的作用是维持pH的稳定。
(6) 原代培养和传代培养的定义分别是什么？
【答案】 原代培养：动物组织经处理后的初次培养。
传代培养：传代培养过程中，贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶处理，然后分瓶培养(或液态细胞悬液的分瓶培养)，让细胞继续增殖。
(7) 下面列举了动物细胞培养技术的部分应用和实例，请用线将它们连接起来：
①生产生物制品 a. 筛选抗癌药物
②用于基因工程 b. 生产病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体
③检测有毒物质 c. 培养受体细胞
④用于生理、病理、药理等研究 d. 判断物质的毒性
(8) 下图是科学家诱导iPS细胞形成的过程图，iPS细胞在适当的诱导条件下，可以定向分化成各种类型的细胞，如内分泌细胞、血细胞、心肌细胞和血管平滑肌细胞等。
①据图分析，iPS细胞的分化程度与____________干细胞最接近。
②图中a过程类似于植物组织培养中的__________过程，b过程的实质是____________________。
胚胎(全能)
脱分化
基因的选择性表达
③iPS细胞与胚胎干细胞不同的根本原因是______________________ __________________________________________。
④若用患者自身细胞制备的iPS细胞，在体外分化培养出某种组织细胞，并植入患者体内，治疗相应疾病，如果发现出现了免疫排斥现象，可能的原因是___________________________________________________ ___________________________。
DNA不同，iPS细胞比胚胎干细胞多了4个转录因子基因，来源也不同
4个转录因子基因表达的蛋白质释放到细胞外，可以被免疫细胞所识别，导致免疫排斥
⑤利用iPS细胞治疗镰状细胞贫血的过程是首先制备患者的iPS细胞，再将其诱导形成______________，最终输给患者使其产生血细胞。该过程是否能治疗镰状细胞贫血？为什么？
【答案】 不能，因为患者体细胞的相应基因是突变的，制成iPS细胞仍然是突变的，分化成的血细胞也是突变的，因此无法通过该方法治疗。
造血干细胞
⑥为什么iPS细胞的应用前景要优于ES细胞？
【答案】 ES细胞必须从胚胎中获取，涉及伦理问题，限制了其在医学上的应用。iPS细胞的诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应。
下图是制作抗病菌X的单克隆抗体示意图，请回答下列问题。
活动二　概述动物细胞融合与单克隆抗体的制备过程及应用
(1) 请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。
【答案】
(2) 单克隆抗体制备过程运用了动物细胞培养和________________技术。
动物细胞融合
(3) 细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。人体淋巴细胞尽管有这两条途径，但不能无限增殖，肿瘤细胞尽管没有S途径，但能无限增殖。请依据该原理，设计化学方法获得C所示细胞的流程：动物细胞培养液中加入图中所示__________(填字母)细胞，再加入聚乙二醇和____________两种药剂，置于________恒温培养箱中培养一段时间，能够增殖的细胞只有______(填字母)。与植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合可还使用什么进行诱导？
【答案】 灭活的病毒。
A、E
氨基蝶呤
CO2
C
(4) 图C所示细胞仍然不能作为生产目标单克隆抗体的种子细胞，原因是什么？图D所示细胞具有什么特点？
【答案】 因为图C所示细胞可能混有不能产生抗体或产生其他抗体的杂交瘤细胞。既能无限增殖，又能产生特定抗体。
(5) 图G中细胞的获取需要经过克隆化培养及抗体检测，该过程一般在多孔细胞培养板上进行。先将细胞悬液稀释到7～10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是什么？
【答案】 使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
(6) 用抗HCG单克隆抗体做出诊断试剂，能在妊娠初期即可作出诊断，主要是因为该抗体具有什么优点？
【答案】 特异性强、灵敏度高。
我国首例完全自主培育的克隆猫“大蒜”在胚胎移植66 d后顺利分娩诞生，“大蒜”是一只非常可爱的短毛猫，小猫现在健康状况良好。这次成功培育克隆猫是世界为数不多的成功案例之一，标志着我国在克隆领域又迈进了一大步。下图为克隆猫“大蒜”培育过程的示意图，请回答下列有关问题。
活动三　概述动物细胞核移植以及克隆动物
(1) 用于核移植的供体细胞一般选用10代以内的细胞，为什么？受体细胞通常需要培养至什么时期？
【答案】 10代以内的细胞具有正常的二倍体核型。MⅡ期。
(2) 从细胞水平分析，与取出体细胞的细胞核进行移植相比，过程②直接将猫“大蒜”的体细胞注入去核卵母细胞的优势是什么？
【答案】 避免取核过程对细胞核造成损伤。
(3) 过程②通常用去核卵母细胞作受体细胞，该卵母细胞通常需发育到什么时期？选择该细胞除了它体积大易操作、营养物质丰富外，还因为它的细胞质中可能含有什么物质？
【答案】 MⅡ期。促进细胞核全能性表达的物质。
(4) 为什么体细胞核移植较胚胎细胞核移植更困难？通过体细胞核移植方法生产的克隆动物，不是对体细胞供体动物进行了100%的复制，原因是什么？
【答案】 动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难。克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但线粒体中的DNA来自受体卵母细胞。
(5) 克隆动物过程中用到哪些技术手段？获得克隆动物的生殖方式是什么？
【答案】 核移植、早期胚胎培养、胚胎移植。无性生殖。
名 卷 优 选
2
4
5
1
3
7
9
6
8
1. [2025北京卷]动物细胞培养基一般呈淡红色。某次实验时，调控pH的CO2耗尽，培养基转为黄色。由此推断使培养基呈淡红色的是(　　)
A. 必需氨基酸 B. 抗生素
C. 酸碱指示剂 D. 血清
【解析】 必需氨基酸是细胞生长的营养成分，不参与指示pH变化，A错误；抗生素用于抑制微生物污染，与培养基颜色无关，B错误；酸碱指示剂(如酚红)在培养基中用于显示pH变化，在低pH值时酚红使培养液呈黄色，而较高的pH值时使培养液呈紫色，pH值7.2～7.4时为红色，C正确；血清提供生长因子，不直接导致颜色变化，D错误。
C
2
4
5
1
3
7
9
6
8
2. [2026无锡月考]细胞工程技术已在生物制药和物种繁育等领域得到了广泛应用。下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是(　　)
A. 从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞
B. 将特定基因或特定蛋白导入已分化的T细胞，可将其诱导形成iPS细胞
C. 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合的细胞即为能分泌所需抗体的细胞
D. 采用胚胎分割技术克隆动物常选用桑葚胚或囊胚，因这两个时期的细胞未发生分化
B
2
4
5
1
3
7
9
6
8
【解析】 胰蛋白酶处理后直接培养的细胞为原代细胞，A错误；融合细胞有具有同种核的融合细胞和杂交瘤细胞，需筛选才能获得分泌特定抗体的杂交瘤细胞，C错误；囊胚细胞已开始分化，D错误。
2
4
5
3
7
9
6
8
3. 航天员叶光富和王亚平在天宫课堂上展示了培养的心肌细胞跳动的视频。下列叙述正确的是(　　)
A. 培养心肌细胞的器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌
B. 培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要CO2
C. 心肌细胞在培养容器中通过有丝分裂不断增殖
D. 心肌细胞在神经细胞发出的神经冲动的支配下跳动
1
B
2
4
5
3
7
9
6
8
1
【解析】 培养心肌细胞的器具要先进行高压蒸汽灭菌，但是试剂并不都需要灭菌，如动物血清不能进行高压蒸汽灭菌，否则会使其中的成分失活，A错误；培养心肌细胞时既需要氧气，有助于进行有氧呼吸，也需要CO2，有助于维持培养液的pH，B正确；心肌细胞高度分化，不进行有丝分裂，C错误；心肌细胞是在神经细胞释放的神经递质的支配下跳动，D错误。
2
4
5
3
7
9
6
8
4. [2024南通如皋适应性考]研究表明，髓系细胞触发受体2(TREM2)是一种免疫抑制受体，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。下图为TREM2单克隆抗体的制备流程图。下列相关说法正确的是(　　)
1
A. 步骤①和⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和TREM2抗体
B. 步骤③筛选得到的细胞需传代培养以防止出现接触抑制
C. 植物组织培养需要的气体条件和步骤⑥相同
D. TREM2单克隆抗体的使用可以增强免疫系统的监视功能
D
2
4
5
3
7
9
6
8
1
【解析】 步骤①向小鼠注射TREM2蛋白，让小鼠发生免疫反应，获得能产生抗体的B淋巴细胞，步骤⑤向小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，目的是获得单克隆抗体，A错误；步骤③筛选得到的是杂交瘤细胞，能无限增殖不会出现接触抑制，B错误；动物细胞培养过程中加入CO2用于调节培养液的pH，而植物组织培养的过程中不需要CO2培养箱，C错误。
2
4
5
3
7
9
6
8
5. [2025重庆卷]为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙(种群数量多)进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是(　　)
1
A. 克隆动物的核基因组来源于甲、乙
B. 体外受精需用获能的精子与MⅠ期的卵母细胞受精
C. 囊胚①的内细胞团可发育为胎盘、个体
D. 滋养层可影响内细胞团的发育
D
2
4
5
3
7
9
6
8
1
【解析】 克隆动物的核基因组来源于甲，细胞质中的基因来源于乙，A错误；体外受精需用获能的精子与MⅡ期的卵母细胞受精，B错误；囊胚①的内细胞团可发育为个体，滋养层细胞发育为胎膜和胎盘的一部分，C错误；滋养层可影响内细胞团的发育，如滋养层细胞分泌的某些物质可能会影响内细胞团细胞的分化等，D正确。
2
4
5
3
7
9
6
8
6. [2024江苏模拟]如图所示，将由两种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是(　　)
1
A. 同时注射两种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞
B. 利用双抗与蛋白类药物结合可以选择性杀伤靶细胞
C. 筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的两种抗原
D. 单抗制备时需要将免疫后的活化B细胞与骨髓瘤细胞融合
A
2
4
5
3
7
9
6
8
1
【解析】 同时注射两种抗原会刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，一种浆细胞只能产生一种抗体，并不能产生双抗，A错误；根据抗体与抗原特异性结合的原理，利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从而使药物作用于特定的靶细胞，B正确；双抗是由两种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子经过解偶联后重新偶联形成的，筛选时需要使用制备单克隆抗体时所使用的两种抗原来进行抗原—抗体检测，从而筛选出具有双特异性的抗体，C正确；单抗制备时需要将免疫后的活化B细胞与骨髓瘤细胞融合从而得到杂交瘤细胞，然后通过筛选得到既能产生相应抗体、又能大量增殖的杂交瘤细胞，D正确。
2
4
5
3
7
9
6
8
7. (多选)[2024南京模拟]嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)是癌症治疗的研究热点。其原理是将CAR基因导入T细胞获得CAR-T，进而表达出特异性更强的癌细胞抗原受体蛋白(CAR)。相比自然状态下的细胞毒性T细胞，CAR-T对肿瘤细胞的杀伤性、靶向性更强。治疗流程如图所示。下列叙述错误的有( )
1
ABC
A. 步骤②属于生物工程中的细胞工程
B. CAR-T细胞的CAR能特异性识别并杀伤癌细胞
C. 步骤④可选用动物病毒或噬菌体作为载体
D. 步骤⑤需定期更换培养液以补充营养物质并清除代谢废物
2
4
5
3
7
9
6
8
1
【解析】 步骤②设计新的蛋白质，属于蛋白质工程，A错误；CAR－T细胞的CAR能特异性识别癌细胞，细胞毒性T细胞杀死癌细胞，B错误；步骤④可选用灭活的动物病毒作为载体，噬菌体侵染的是细菌，噬菌体不能侵染动物细胞，C错误。
2
4
5
3
7
9
6
8
8. (多选)[2026淮安期中]细胞培养肉技术是一项新型食品合成技术，生产流程如图所示，下列叙述正确的有( )
1
ACD
A. 为满足规模化生产，可使用蛋白酶分离出具有体外增殖能力的干细胞进行培养
B. 为提高安全性，①过程使用的培养基中应添加高压蒸汽灭菌后的血清
C. ②过程中可通过悬浮培养、保证溶解氧含量等方式实现干细胞的大量增殖
D. 为获得肥瘦相间的培养肉，除肌纤维外，③过程中还需诱导分化出脂肪细胞
2
4
5
3
7
9
6
8
1
【解析】 为满足规模化生产，可使用蛋白酶分解细胞间的胶原蛋白、粘连蛋白等连接物质，从而分离出具有体外增殖能力的干细胞进行培养，A正确；血清不能使用高压蒸汽灭菌，通常采用过滤除菌法，B错误；细胞培养过程中通常会出现贴壁生长和接触抑制，影响增殖，②的生物反应器具有足够大的表面积，可以实现一定程度的悬浮培养，涡轮搅拌也可增加培养液中溶解氧含量，从而实现细胞的扩大培养，C正确；肥瘦相间的培养肉除了含有蛋白质外，还含有脂肪，因此还需诱导分化出脂肪细胞，D正确。
2
4
5
3
7
9
6
8
9. 下图表示利用经抗原免疫后的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞进行杂交，制备单克隆抗体的过程，请据图回答下列问题。
1
(1) 在单克隆抗体的制备过程中，应用了细胞工程中的____________ ____和________________两大技术。
(2) 将特定的抗原注入小鼠，需在一定时间内间隔注射3次，其目的是__________________________________________________。
动物细胞融
合
动物细胞培养
加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的抗体和淋巴细胞
2
4
5
3
7
9
6
8
(3) 培养杂交瘤细胞的培养基中需加入动物血清，原因是__________ ________________________，植物组织培养的培养基与该培养基在物理性质方面相比，需要添加________，杂交瘤细胞体外培养过程中，为避免细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，常采取的措施是__________________。
(4) 对筛选出来的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到 3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液_____(填“0.1”或“10”)mL，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
1
补充细胞
生长所需的未知营养物质
琼脂
定期更换培养液
0.1
2
4
5
3
7
9
6
8
(5) 单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(如癌变细胞等)并与之结合，而不攻击正常细胞，故可制成“生物导弹”，这是利用了__________________________________。
1
抗原与抗体高度特异性结合的特性
谢谢观看
Thank you for watching

展开更多......

收起↑