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青海省海南州高级中学2025-2026学年高二下学期6月月考生物试卷
一、单选题
1．某同学在制作泡菜前，查阅资料得知，可以向泡菜坛中加入一些“陈泡菜水”。在制作泡菜时，他在不同时间测定了泡菜中的亚硝酸盐含量，结果如图所示。下列有关叙述错误的是（　　）
A．泡菜发酵过程中亚硝酸盐的含量会先升高后降低，可通过在第5天后检测亚硝酸盐含量确定泡菜取食时间
B．该同学制作出的泡菜“咸而不酸”，可能的原因是食盐浓度过高、发酵温度过低等
C．第3天亚硝酸盐含量较低，此时是泡菜的最佳取食时间
D．泡菜制作过程中加入的“陈泡菜水”不需要进行灭菌处理
2．发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。下列叙述正确的是（　　）
A．腐乳味道鲜美，易于消化吸收，主要是因为酵母菌将豆腐中的蛋白质分解成小分子
B．利用乳酸菌制作泡菜的过程中，先通气培养，后密封发酵
C．缺乏氧气和糖源时，醋酸菌可将乙醇氧化成乙醛，再将乙醛氧化成乙酸
D．发酵过程中发酵条件变化会影响微生物的生长繁殖和代谢途径
3．发酵工程就是利用微生物的特定功能，规模化生产对人类有用的产品。下列关于发酵工程及其应用的叙述中，正确的是（　　）
A．要提高酵母菌的酒精产量，只能采用基因工程育种
B．通过发酵工程生产谷氨酸的培养基属于液体培养基
C．现代化发酵工程的中心环节是产物的分离与提纯
D．只有发酵工程的中心环节结束时才需要检测培养液中的微生物数量、产品浓度等
4．下表是配制的两种培养基，某同学利用它们从土壤中分离出可以高效降解污染物M（一种含有C、H、O、N的有机物）的分解菌。下列关于培养基的描述，正确的是（　　）
无机盐 葡萄糖 M 琼脂 水
培养基甲 + + + - +
培养基乙 + + + + +
A．培养基甲：液体培养基，可用于目标菌的长期保存
B．培养基乙：固体培养基，以污染物M为唯一碳源和氮源
C．培养基甲：液体培养基，可直接获得目标菌的单菌落
D．培养基乙：选择培养基，可用于分离能降解M的目的菌
5．为从土壤中分离并计数能降解石油的微生物，科研人员按照下图所示流程进行操作。将土壤样品加入选择培养基中振荡培养一段时间后，取培养液进行梯度稀释，再分别取适量稀释液在平板上进行涂布或划线接种。图中甲为涂布平板后培养获得的一个平板，乙和丙为两种不同的平板划线接种操作结果。下列叙述正确的是（　　）
A．选择培养可以增加石油降解菌的浓度，但不影响其他微生物的生长
B．平板甲接种时需将涂布器进行灼烧灭菌，冷却后蘸取菌液再均匀涂布
C．若统计到甲平板菌落数为180，则可直接得出每克样品中的活菌数为180个
D．乙、丙培养均可能获得单菌落，和乙相比，丙种操作更适用于稀释度较低的样品
6．我国农业科研团队利用从盐碱地土壤中筛选出的高效脲酶产生菌，制备成新型尿素缓释菌剂，可将尿素利用率提升40%以上，显著减少盐碱地氮素流失。研究人员从盐碱地土壤样本中分离该类目的菌，下列操作与原理的叙述正确的是（　　）
A．配制选择培养基时，需以尿素为唯一氮源并将pH调至中性偏酸，同时加入酚红指示剂用于目的菌鉴别
B．对土壤样液进行梯度稀释后，可采用平板划线法接种，通过统计单菌落数计算土壤中活菌的数量
C．若培养基上长出的菌落周围红色环带宽度越宽，说明该菌株产脲酶能力越强，用于制备菌剂时尿素利用率提升效果越好
D．将纯化得到的目的菌接种至液体培养基中，置于摇床振荡培养的主要目的是促进尿素的分解
7．如图是利用甲、乙两种植物通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐杂种植株的流程图。下列说法错误的是（　　）
A．除PEG诱导甲、乙原生质体融合外，还可采用高Ca2+-高pH融合法
B．c过程中杂种细胞再生出细胞壁，标志着细胞融合完成
C．愈伤组织经脱分化和再分化获得c，一般不需要光照
D．进行d过程时将植株种植在高盐的环境中，筛选出耐盐植株
8．近年来，三维（3D）细胞培养技术在骨组织再生和骨肿瘤等领域均有广泛应用。3D细胞培养技术是一种仿生的细胞培养技术，其核心在于体外模拟体内复杂的细胞微环境，3D培养的干细胞为骨组织的修复和替代提供了新策略，患者来源的细胞可以整合到3D培养系统中，为精准诊疗的开发和提供了体外模型。下列说法错误的是（　　）
A．3D细胞培养应置于95%的空气和5%的CO2的气体环境中进行培养
B．在体外培养3D细胞时，必须保证无菌、无毒的环境
C．利用患者细胞培养出干细胞分化出的骨组织细胞移植后会发生免疫排斥
D．运用3D细胞培养技术培育动物器官或组织，开创人类疾病治疗的新方法
9．世界首例克隆牦牛在西藏诞生，突破高原动物克隆技术瓶颈。目前利用现代生物技术救助牦牛较为常见的方法主要有两种，如图所示，其中①、②代表过程，a～f代表个体。下列叙述正确的是（　　）
A．过程②常用显微操作去核
B．使用性激素诱发牦牛a进行超数排卵
C．重构胚通常培养至原肠胚等早期胚胎阶段，再进行胚胎移植
D．牦牛e的遗传物质来自牦牛a和牦牛b，牦牛f的遗传物质只来自牦牛c
10．单纯疱疹病毒1型（HSV-1）可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。某科研机构利用二倍体小鼠为实验材料，获得了抗HSV-1的单克隆抗体。下列说法不正确的是（　　）
A．制备前，先给小鼠注射纯化的HSV-1蛋白，目的是刺激小鼠产生能够分泌相应抗HSV-1抗体的B淋巴细胞
B．用灭活病毒或PEG可诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合
C．筛选产生抗HSV-1抗体的杂交瘤细胞时，培养液中常需添加动物血清、琼脂、抗生素等物质
D．获得的杂交瘤细胞不是二倍体细胞，但具有既能无限增殖，又能产生抗HSV-1抗体的特点
11．某生物实验室常用4种限制酶，这些限制酶的识别序列和切割位点如下。下列相关叙述正确的是（　　）
A．DNA 片段被PstⅠ 切割一次，会形成 1 个游离的 5'末端
B．用限制酶SmaⅠ和EcoRⅠ切割后产生的均为平末端
C．EcoRⅠ和 PstⅠ切割后形成的黏性末端可通过 DNA 连接酶连接
D．含有1个EcoRⅠ识别位点的环状DNA，被EcoRⅠ切割后可形成1个DNA片段
12．某质粒上含有两种抗性基因，如图所示。将目的基因插入不同位点（a、b、c）会获得不同的重组质粒。若将不同的重组质粒分别导入细菌（该细菌自身不含图中的两种抗性基因）中，则细菌在不同培养基上的生长情况对应不合理的是（　　）
选项 目的基因插入位点 添加氨苄青霉素的培养基 添加四环素的培养基
A 质粒没有导入目的基因 √ √
B 目的基因插入a位点 × √
C 目的基因插入b位点 √ ×
D 目的基因插入c位点 × ×
注：“√”表示存活，“×”表示不能存活。
A．A B．B C．C D．D
13．基因工程常用的载体是质粒，关键原因在于其具备特定的结构特点。下列说法错误的是（　　）
A．质粒有一个至多个限制酶切割位点
B．质粒含有RNA复制起点，可在宿主细胞中自我复制
C．质粒携带的抗生素抗性基因便于重组DNA分子的筛选
D．基因工程的载体也可选用噬菌体和动植物病毒
14．在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，下列关于操作流程的叙述错误的是（　　）
A．DNA溶于酒精，某些蛋白质不溶于酒精，可利用这一原理初步分离DNA与蛋白质
B．通常不选用哺乳动物血液作为实验材料，因为哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核
C．将洋葱切碎、研磨、过滤，滤液静置于4℃冰箱中几分钟后，DNA存在于上清液中
D．可利用二苯胺试剂鉴定丝状物的主要成分——DNA，沸水浴后观察是否出现蓝色
15．培育转基因抗虫棉时，需要将Bt抗虫基因进行“切割”、改造和“拼接”；将重组DNA导入棉花细胞内并表达。下列有关基因工程叙述正确的是（　　）
A．限制酶、RNA聚合酶可作用于DNA上的磷酸二酯键
B．T4DNA连接酶只能连接具有互补黏性末端的DNA片段
C．构建基因表达载体时只能用一种限制酶切割目的基因和质粒
D．构建的基因表达载体上应具备启动子、终止子等调控元件
16．COR47基因是拟南芥中的一种冷响应基因。实验小组为探究COR47基因的调控机制，将COR47基因进行PCR扩增。下图表示COR47基因的部分序列。下列相关叙述错误的是（　　）
A．PCR扩增COR47基因的部分序列时，应当选用的引物组合是引物b和引物c
B．PCR所用的酶是一种耐高温的DNA聚合酶，其激活需要Mg2+
C．当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
D．COR47基因扩增时至少循环4次的产物中会出现双链等长的DNA片段
17．光敏色素在调节作物生长发育中具有重要作用。为研究拟南芥中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在小麦种质资源创制中的利用价值，科研人员将A基因转入到小麦中，对小麦受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列说法正确的是（　　）
A．构建基因表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅢ这两种限制酶
B．PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温
C．表达载体导入受体细胞后，可用含卡那霉素的培养基进行初步筛选
D．由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因小麦均培育成功
18．琼脂糖凝胶电泳常用于核酸样品的分析，样品1～4的电泳结果如图所示。已知样品1和2中的DNA分子分别是甲和乙，甲具有限制酶R的一个酶切位点，样品3和4中有一个样品是甲的酶切产物。下列叙述错误的是（ ）
A．图中的DNA条带是经染色后在300nm紫外灯下检测出来的
B．同一个凝胶中，DNA分子越大，迁移的速率越慢
C．甲、乙两种DNA分子所含碱基序列可能不同
D．据图推测样品3可能是甲被酶R切割后的产物
19．用Xho I和Sal I两种限制酶分别处理同一DNA片段（限制酶在对应切点均能切开）。酶切位点及酶切产物电泳结果分别如图1和图2所示。下列叙述错误的是（　　）
A．大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成
B．解旋酶与图1中的两种限制酶均能催化氢键断裂
C．图2泳道②中可能是用Xho Ⅰ处理得到的酶切产物
D．用两种限制酶同时处理该DNA电泳后可得到6种条带
20．获取目的基因的方法有多种，科学家从已分化的细胞中提取mRNA进行逆转录获得cDNA（互补DNA）后，再对cDNA进行PCR扩增，可利用此技术获取大量目的基因，具体过程如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A．将该技术获得的cDNA直接导入原来的细胞可增加相应蛋白质的含量
B．引物序列越短，越有利于其与目的基因的模板链结合以获得目标DNA
C．过程②需要加入缓冲液、原料、DNA模板、耐高温的DNA聚合酶和引物A、引物B等
D．过程②需要加入解旋酶，使mRNA-cDNA杂交链分散开形成单链结构
二、解答题
21．聚乙烯醇（PVA）是一种只含C、H、O的难降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶降解PVA。PVA可与碘形成蓝绿色复合物，复合物被降解后蓝绿色消失，形成透明圈。下图为PVA分解菌的筛选过程，①～⑤表示过程，Ⅰ～Ⅲ表示菌落。请回答以下问题：
(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供_____。甲培养基加入PVA作为_____，再加入硝酸盐等其他营养物质和碘，以及_____使培养基凝固。图中①所示的接种方法是_____，过程②将平板_____放入恒温培养箱中培养适宜时间，过程③应选_____的菌种进行接种，该菌种分解PVA的能力最强。
(2)③所用的接种工具是_____，该接种工具常用的灭菌方法是_____。可利用_____（填“固体”或“液体”）培养基对已筛选出的PVA分解菌进行扩大培养。
(3)判断培养基是否有杂菌污染，需将_____同时进行培养；判断某培养基是否具有筛选作用，需设置_____进行接种后培养，观察菌落数目，得出结论。
22．肿瘤细胞表面有受体EGFR，CD3是T细胞表面的标志性抗原。科研人员制备双特异性抗体EGFR/CD3，可招募T细胞定向移至肿瘤细胞，增强其对肿瘤细胞的杀伤力，过程如下图所示。
(1)动物细胞培养：培养动物细胞的培养基中通常会添加_____等天然成分，需要提供的气体条件中有CO2，其中CO2的作用是_____。注射EGFR进入小鼠体内后，可从小鼠脾脏中获取能产生特异性抗体的细胞B，并用_____酶进行处理分离制备成细胞悬液，细胞B与细胞A融合前，_____（填“需要”或“不需要”）通过原代培养扩大细胞B数量。
(2)诱导融合：细胞融合过程中可添加某种物质_____诱导细胞融合。④过程特有的诱导动物细胞融合的方法是_____。
(3)第一次筛选：常使用特定的选择培养基（如HAT 培养基），该培养基对未融合的细胞和_____细胞生长具有抑制作用。
(4)第二次筛选：筛选出杂交瘤细胞后，先进行_____培养，再利用_____法来筛选出获得能产生特定抗体的单克隆杂交瘤细胞。单克隆抗体的优点是_____（答出两点）。
(5)据图分析，抗体是由两条H链和两条L链组成的4条肽链的对称结构，双杂交瘤细胞会产生多种抗体，推测其可能的原因是_____。
23．胶原蛋白在维持器官、组织、细胞形态和功能等方面发挥着关键性作用，传统提取方法得到的胶原蛋白成分复杂，还可能携带动物病毒等。科学家将合成胶原蛋白的基因kit导入大肠杆菌构建基因工程菌，过程如图所示。回答下列问题：
(1)图中①过程需要使用_____酶，需要提供的原料是_____，该过程得到的DNA片段_____（填“含有”或“不含有”）启动子序列。
(2)研究人员利用PCR技术获取了大量目的基因kit，PCR反应体系加入_____种引物，在复性过程中引物会结合到互补DNA链的_____端上，使_____酶能够从引物的______端开始连接脱氧核苷酸，扩增n-2次，需要_____个引物。
(3)图中过程②是基因工程的核心步骤即_____，选用_____（填限制酶）切割质粒比只选一种限制酶切割更合理，原因是_____；为了实现目的基因与运载体的连接，需要对PCR的引物进行改造，具体的做法是_____。
(4)过程②获得的重组DNA分子除启动子外，还应含有_____等，启动子的作用是_____。为了初步筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，培养基甲中需要加入的物质是_____。
(5)双酶切kit基因与质粒pET-28a（+）长度为170bp的片段进行置换，构建重组质粒pET—28a（+）—kit，上述两种质粒经HindⅢ切割后片段长度如表所示（每种片段各1个）。由此判定kit基因长度为_____，该基因上有_____个HindⅢ切割位点。经添加有硫链丝菌素的培养基初步筛选后的大肠杆菌中不一定含有目的基因，原因是_____。
pET-28a（+） pET-28a（+）-kit
1000bp、2550bp 1050bp、2500bp、150bp
参考答案
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
答案 C D B D D C C C A C
题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
答案 D D B A D D B D B C
21．(1) 有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时阻止或抑制其他微生物的生长 唯一碳源 琼脂/凝固剂 稀释涂布平板法 倒置 Ⅱ
(2) 接种环 灼烧灭菌 液体
(3) 未接种的培养基/空白培养基 牛肉膏蛋白胨培养基/完全培养基
22．(1) 动物血清 维持培养液的pH 胰蛋白酶/胶原蛋白 不需要
(2) PEG（或聚乙二醇） 灭活病毒诱导法
(3)同种融合（或融合的具有同种核）
(4) 克隆化 抗原一抗体杂交（或抗体阳性检测） 特异性强、灵敏度高、能大量生产
(5)双杂交瘤细胞会表达产生两种H链和两种L链，H链和L链的结合又是随机的，因而产生多种抗体
23．(1) 逆转录 4种脱氧核苷酸 不含有
(2) 2 3’ DNA聚合酶 3’ 2n-1-2
(3) 基因表达载体的构建 BamHI和EcoRI 既可以避免目的基因、质粒自身环化，也能防止目的基因反向插入质粒，保证基因表达载体构建的正确性 在两种引物的5'端添加限制酶BamHI或EcoRI的识别序列
(4) 目的基因、终止子、复制原点、标记基因 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 硫链丝菌素
(5) 320bp 2 导入不含目的基因的空质粒的大肠杆菌也可以在该培养基上存活

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