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第49讲　动物细胞工程
选择性必修3　生物技术与工程
第九单元　生物技术与工程
课标要求 1．阐明动物细胞培养的条件和过程。
2．阐明动物细胞核移植的原理和过程。
3．阐明动物细胞融合的概念。
4．概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。　5．简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
考情微观 1．动物细胞培养技术：2024·贵州适应性测试T16。
2．动物细胞融合和单克隆抗体的制备：2024·贵州适应性测试T18，2025·贵州卷T16。
3．动物细胞核移植技术：2024·贵州适应性测试T16。
考点1　动物细胞培养
一、填空表述
1．(人教版选择性必修3 P43图2-9)一般来说，动物细胞培养需要满足以下条件：
2．(人教版选择性必修3 P44)在体外培养细胞时，培养液还需要定期更换，以便清除代谢物，防止________________________________。
3．(人教版选择性必修3 P44)细胞贴壁：__________________________________。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会____________的现象。
细胞代谢物积累对细胞自身造成危害
细胞贴附在培养瓶的瓶壁
上的现象
停止分裂增殖
4．(人教版选择性必修3 P45)人们通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为________。将分瓶后的细胞培养称为________。贴壁细胞需要重新用________等处理，使之分散成单个细胞，然后再用______收集。之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。
5．细胞在培养过程中分裂受阻的原因：________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
原代培养
传代培养
胰蛋白酶
离心法
悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻；对于贴壁细胞来说，除上述因素外，还会因为接触抑制而停止分裂增殖
6．(人教版选择性必修3 P46)在一定条件下，干细胞可以分化成其他类型的细胞。干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括______________________等。
7．动物细胞培养一般用____培养基，植物组织培养一般用____培养基。
胚胎干细胞和成体干细胞
液体
固体
二、概念检测
1．培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳。 (　　)
2．营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制。 (　　)
提示：营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞也会发生接触抑制。
3．从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞。 (　　)
提示：动物组织用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞为原代细胞。
√
×
×
4．已分化的T淋巴细胞也能被诱导为iPS细胞。 (　　)
5．一般认为，成体干细胞具有发育成完整个体的能力。 (　　)
提示：一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织。
√
×
(人教版选择性必修3 P44～45正文及P45图2-12)干细胞的成功培养是动物细胞培养领域的重要成就之一，许多科
学家投入相关的研究中。右图为动物细胞
培养过程中，细胞数量的指数变化示意图。
回答下列问题：
(1)动物体的干细胞包括胚胎干细胞和________________，后者的特点是_______________________________________________________。
(2)动物细胞培养一般会选用幼龄动物的器官或组织进行细胞培养，原因是________________________________________________________________________________________________________________。
(3)从图上可以看出，随着细胞传代次数增加，传代的间隔时间
______________(填“显著变大”“显著变小”或“基本相等”)，随着培养时间的增加，悬浮培养的细胞会出现细胞分裂受阻的现象，其原因是_____________________________________________________________________________________________________________(答出3点即可)。
(4)图中无限细胞系是由许多能无限增殖的细胞组成的，试分析无限细胞系形成的根本原因是________________________________________________________________________________________________。
提示：(1)成体干细胞　具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力
(2)幼龄动物的器官或组织的分裂能力强
(3)基本相等　细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等(答出3点即可)
(4)传代培养的细胞遗传物质发生改变，细胞获得不死性，能无限增殖
考向1　动物细胞培养
1．(链接人教版选择性必修3 P45图2-12)3D细胞培养是将动物细胞与三维支架材料(如水凝胶)结合，模拟体内立体微环境的技术。其实验流程为：组织取样→酶解分散→与支架材料混合→三维培养→检测分析，如下图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．制备细胞悬液时，延长胰蛋白酶处理时间有利于充分分离细胞
B．培养箱需提供95% O2维持细胞呼吸和5% CO2以维持酸碱平衡
C．常规细胞培养存在接触抑制，3D细胞培养因空间扩展可无限增殖
D．该技术可通过分析不同深度的细胞活性来评估药物对组织内部靶点的作用
√
D　[制备细胞悬液时，胰蛋白酶处理时间过长会破坏细胞结构，对细胞造成损伤，不利于细胞的培养等后续操作，A错误；培养箱需提供95%空气＋5%CO2，CO2以维持酸碱平衡，B错误；3D细胞培养虽然模拟了体内立体微环境，但细胞仍然具有接触抑制等特性，不会无限增殖，C错误；3D细胞培养模拟体内立体微环境，通过分析不同深度的细胞活性来评估药物对组织内部靶点的作用是合理的，D正确。]
归纳提升
动物细胞培养与植物组织培养的对比
项目 动物细胞培养 植物组织培养
理论基础 细胞增殖 植物细胞的全能性
培养前处理 无菌；用机械的方法，也可以用胰蛋白酶或胶原蛋白酶等处理的方法，将组织分散成单个细胞 无菌、离体
项目 动物细胞培养 植物组织培养
取材 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 植物幼嫩的部位或花药等
培养基性质 液体 固体
培养基成分 糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等 水、矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和琼脂等
项目 动物细胞培养 植物组织培养
结果 细胞培养产生大量细胞，不形成新个体 可产生新个体
应用 人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产 快速繁殖、作物脱毒、细胞产物的工厂化生产和单倍体育种等
相同点 ①都需人工条件下的无菌操作；②都需要适宜的温度、pH等条件；③都进行有丝分裂，都不涉及减数分裂
考向2　干细胞培养及其应用
2．(链接人教版选择性必修3 P47图2-14)类器官是具有一定空间结构的组织类似物，能够在结构和功能上模拟真实器官。研究者通过对结膜细胞培养并加入相关基因，使其诱导成为多能干细胞(iPS细胞)，并模拟胚胎发育，逐步形成特定的类器官。如图是人类结膜细胞培养成第一个人结膜类器官的示意图。下列叙述正确的是(　　)
A．结膜细胞的遗传物质与iPS细胞是相同的
B．培养上述细胞过程中可加入适量抗生素及血清，以提供一些天然成分
C．成纤维细胞诱导培养成为人结膜类器官的过程中，细胞一直保持高度分化
D．上述过程中iPS细胞可以分化形成结膜类器官，不足以说明其具有全能性
√
D　[iPS细胞是加入关键基因后诱导出来的，故与结膜细胞的遗传物质不一样，A错误；细胞培养过程中加入适量抗生素可以防止微生物污染，血清可以提供一些天然成分，B错误；成纤维细胞诱导培养成为人结膜类器官的过程中，转入相关因子后诱导形成的iPS细胞分化程度较低，C错误；细胞全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有产生完整有机体或分化成其他各种细胞的潜能和特性，图中iPS细胞只发育形成了结膜类器官，不足以说明其具有全能性，D正确。]
一、填空表述
1．(人教版选择性必修3 P48)动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和________________等。
考点2　动物细胞融合技术与单克隆抗体
灭活病毒诱导法
2．(人教版选择性必修3 P48)细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使__________成为可能。
3．制备单克隆抗体需要的技术手段：动物细胞融合和动物细胞培养。制备单克隆抗体的原理：________________________________。
4．第一次筛选的目的是筛选出__________，方法是用特定的选择性培养基培养。经过筛选后未融合的细胞或融合后具有同种核型的细胞都会死亡，只有__________才能生长。
远缘杂交
一个B细胞只能产生一种特异性抗体
杂交瘤细胞
杂交瘤细胞
5．第二次筛选的目的是筛选出__________________________，方法是________________________。
6．(人教版选择性必修3 P50)单克隆抗体的优点是_________________________________________________________，并且可以大量制备。
能产生所需抗体的杂交瘤细胞
克隆化培养和专一抗体检验
能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合
7．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)______(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是
___________________________________________________________。
不需要
使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合
二、概念检测
1．有的病毒经过灭活处理后，可用于细胞工程中介导动物细胞的融合。 (　　)
2．将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞。 (　　)
提示：若仅考虑细胞两两融合的情况，将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导后融合的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等。
√
×
3．甲状旁腺激素(PTH)水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，需要制备用PTH免疫的小鼠。 (　　)
4．我国科研团队研制出全球首个以尿液中的抗原为靶标的戊肝诊断试剂盒，该试剂盒还可用于其他类型病毒性肝炎的检测。 (　　)
提示：抗体具有特异性，因此戊肝诊断试剂盒只能用于戊肝的检测，不能用于其他类型病毒性肝炎的检测。
√
×
(人教版选择性必修3 P48～49图2-16及P50思考·讨论)为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。
(1)上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是_________。
(2)经筛选2后的细胞具有的特点是_____________________________。
(3)单克隆抗体被广泛用作诊断试剂的原因是_______________________________________________________________________________。
(4)下图抗体—药物偶联物(ADC)通过将具有生物活性的小分子药物与单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。如下图所示。单克隆抗体是ADC中的__________部分(填“a”或“b”)，其作用是_________________________________________________________。
提示：(1)诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞
(2)既可无限增殖，又可产生特异性抗体
(3)单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备
(4)a　单克隆抗体能精确地定位乳腺癌细胞，让药物作用于乳腺癌细胞，实现了ADC对癌细胞的选择性杀伤，可以降低乳腺癌治疗药物的副作用
考向1　动物细胞融合技术
1．(链接人教版选择性必修3 P48正文)科研人员诱导A、B两种动物细胞融合并进行培养(仅考虑两两融合)。据A、B两种细胞的生活环境(下表)以及融合细胞只能生长在选择培养基Ⅱ上，生长环境的pH为4～6的事实，分析下列说法正确的是(　　)
A 细胞 只能在选择培养基Ⅰ上生长，生长环境的pH为4～6
B细胞 只能在选择培养基Ⅱ上生长，生长环境的pH为7～8
A．动物细胞培养使用的培养基都是天然培养基
B．PEG 融合法和高 Ca2+—高pH融合法均可诱导两种细胞融合
C．将融合后的细胞置于CO2培养箱以维持培养液的pH为7～8
D．选择培养基Ⅱ上存活下来并生长的细胞不一定是目标融合细胞
√
D　[动物细胞培养使用的培养基都是合成培养基，A错误；A细胞和B细胞生长环境对pH有要求，不可用高Ca2+—高pH融合法，B错误；CO2的主要作用是维持培养液的pH，且为了筛选融合细胞，应用选择培养基Ⅱ且维持其生长环境的pH为4～6，C错误；选择培养基Ⅱ上生存的细胞可能有融合细胞和B细胞，不一定是目标融合细胞，D正确。]
考向2　单克隆抗体的制备及应用
2．(链接人教版选择性必修3 P49图2-16)下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的是(　　)
A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间
B．W细胞是先提取B淋巴细胞再用PML蛋白免疫而获得
C．步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞
D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体
√
D　[PML蛋白单克隆抗体的制备过程，应用PML蛋白作为抗原间隔多次免疫小鼠，目的是获得更多的能产生PML蛋白抗体的B淋巴细胞，A错误；W细胞是先用PML蛋白免疫而获得相应的B淋巴细胞，B错误；据题意可知，步骤1是诱导W细胞与骨髓瘤细胞融合，步骤2是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，C错误；据结果可知，应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体，因为孔2中的细胞只产生PML蛋白单克隆抗体，D正确。]
归纳提升
单克隆抗体制备过程中两次筛选的原因、方法及目的
项目 第一次筛选 第二次筛选
筛选原因 诱导融合后会得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞 由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞
项目 第一次筛选 第二次筛选
筛选方法 用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长 用多孔培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群
筛选目的 得到杂交瘤细胞 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
一、填空表述
1．“去核”是去除____________________。重构胚是指人工重新构建的胚胎，具有____________________。
2．(人教版选择性必修3 P54相关信息)目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是__________。也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。
考点3　动物体细胞核移植技术和克隆动物
纺锤体—染色体复合物
发育成完整个体的能力
显微操作法
3．选择去核卵母细胞作为受体细胞的原因：营养丰富；体积大，易操作；______________________________。
4．与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是____________________________________________________________________________________________________。
含有激发细胞核全能性表达的物质
动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难
二、概念检测
1．通过克隆技术形成重组细胞并发育成一个新个体，体现了动物细胞的全能性。 (　　)
提示：动物体细胞核移植的原理是动物体细胞核的全能性。
2．在克隆哺乳动物过程中，通常作为核移植受体细胞的是去核的初级卵母细胞。 (　　)
提示：在克隆哺乳动物过程中，通常选择减数分裂Ⅱ中期的去核卵母细胞作为受体细胞，即次级卵母细胞。
×
×
3．体细胞核移植胚胎发育率低，可能是植入的体细胞核不能完全恢复分化前的功能状态。 (　　)
4．可用Ca2+载体激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程。 (　　)
√
√
(人教版选择性必修3 P66复习与提高T3改编)2017年，我国科学家首次培育了体细胞克隆猴。在培育过程中，我国科学家经过多年的反复试验，可以在10 s之内对卵母细胞进行去核操作，在15 s之内将体细胞注入去核的卵母细胞里。培育克隆
猴的流程如右图所示，请结合下图回答
下列问题：
(1)在将体细胞的核移植到卵母细胞之前，必须先对卵母细胞进行去核操作的原因是_________________________________________________________________。
(2)上述体细胞核移植技术培育的克隆动物，不是对体细胞供体动物进行了100%复制，原因是_______________________________________________________________________________________________。
(3)在此过程中，灭活的仙台病毒所起的作用是_____________________________________________________________________________。
(4)研究人员将Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用TSA处理，上述操作的目的是_____________________________________________，
这两种物质发挥作用的机制是___________________________________________________________________________________________。
提示：(1)为了使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自体细胞供体动物
(2)克隆动物细胞核中的DNA来自供体细胞核，线粒体中的DNA来自受体卵母细胞，另外，生物的性状还受环境的影响
(3)诱导细胞融合
(4)调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率　Kdm4d的mRNA表达组蛋白去甲基化酶，降低组蛋白的甲基化水平；TSA可以抑制组蛋白脱乙酰酶的作用，提高组蛋白的乙酰化水平
考向　动物体细胞核移植技术及应用
1．(2024·贵州适应性测试)利用动物体细胞核移植技术可培育高产奶牛，流程如图所示。下列叙述错误的是(　　)
A．犊牛W有母牛X细胞中的线粒体DNA
B．犊牛W的遗传性状与母牛X相似度更高
C．重构胚的形成可采用电融合的方法
D．细胞培养时需添加氨基酸等营养物质
√
B　[母牛X提供细胞质，因此犊牛W有母牛X细胞中的线粒体DNA，A正确；母牛Y提供细胞核，细胞核是遗传信息库，因此犊牛W的遗传性状与母牛Y相似度更高，B错误；可以采用电融合法促使两个细胞融合形成重构胚，C正确；细胞培养时需添加氨基酸、糖等营养物质供给细胞正常生命活动需要，D正确。]
2．(链接人教版选择性必修3 P55概念检测T2)2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如图所示技术路线。为了某些需要，需对胚胎的性别进行鉴定。据图分析下列叙述正确的是(　　)
A．通过核移植获得的受精卵中，遗传物质全部来自母亲
B．“三亲婴儿”的培育还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术
C．对胚胎性别进行鉴定时，从囊胚中取出内细胞团的几个细胞，提取DNA做分析鉴定
D．精子与MⅡ期卵母细胞受精的标志是雌雄原核融合形成合子
√
B　[通过核移植获得的受精卵中，核遗传物质一半来自母亲，一半来自父亲，质基因来自捐献者的卵母细胞，A错误；三亲婴儿的培育除了细胞核移植外，还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术，B正确；对胚胎性别进行鉴定时，应从囊胚中的滋养层细胞中提取DNA做分析鉴定，而不是内细胞团，否则会影响胚胎发育，C错误；精子与MⅡ期卵母细胞受精的标志是在卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体，D错误。]
课后分层作业(四十九) 　动物细胞工程
1．(2025·广东卷)将人眼睑成纤维细胞传代培养后，再培养形成支架，在该支架上接种人口腔黏膜上皮细胞，培养一段时间后分离获得上皮细胞片层，可用于人工角膜的研究。上述过程不涉及(　　)
A．制备细胞悬液
B．置于5% CO2等适宜条件下培养
C．离心收集细胞
D．用胰蛋白酶消化支架后分离片层
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
D　[动物细胞培养时，为增大细胞与培养液的接触面积，需要制备细胞悬液，A正确；置于5% CO2等适宜条件下培养，其中5%的CO2可维持培养液的pH，B正确；在人眼睑成纤维细胞传代培养过程中需要通过离心收集细胞，C正确；不能用胰蛋白酶消化支架，避免将上皮细胞片层分离成单独细胞，D错误。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
2．(2025·湖北卷)利用犬肾细胞MDCK扩增流感病毒，生产流感疫苗，具有标准化、产量高等优点。但MDCK细胞贴壁生长的特性不利于生产规模的扩大，严重制约疫苗的生产效率。研究人员通过筛选，成功获得一种无成瘤性的(多代培养不会癌变)、可悬浮培养的MDCK细胞——XF06。下列叙述错误的是(　　)
A．XF06悬浮培养可提高细胞密度，进而提升生产效率
B．细胞贴壁生长特性的改变是由于流感病毒感染
C．可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒
D．采用无成瘤性细胞生产疫苗，是为了避免疫苗中有致瘤DNA的污染
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
B　[根据题意，与贴壁生长的细胞培养相比，XF06悬浮培养能更充分利用空间，有利于提高细胞密度，从而提升生产疫苗的效率，A正确；细胞贴壁生长特性的改变是筛选的结果，不是流感病毒感染导致的，B错误；在细胞裂解液中，流感病毒和其他细胞裂解物的密度、质量等性质不同，可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒，C正确；根据题意可知，无成瘤性MDCK细胞经多代培养不会发生癌变，采用无成瘤性细胞生产疫苗，能避免疫苗中有致瘤DNA的污染，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
3．(2025·贵州六校联考)某电商副总裁发起的“破冰行动”让更多人关注到了渐冻症，该病因患者肌肉逐渐不能动弹，就像被冻住了一样而得名。研究表明，渐冻症是因为突变基因导致运动神经元合成了毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动。研究实验中发现，利用诱导多能干细胞(iPS细胞)制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列相关描述不正确的是(　　)
A．iPS细胞能分裂和分化形成多种细胞，体现了细胞的全能性
B．iPS 细胞与其分化成的子细胞中的 RNA 和蛋白质不完全相同
C．理论上，iPS 细胞用来治疗渐冻症可避免免疫排斥反应
D．可通过导入某种调节因子抑制突变基因表达来治疗渐冻症
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A　[细胞的全能性是指已经分裂和分化的细胞能够分化成其他各种细胞以及发育成完整个体的潜能。iPS细胞分裂和分化形成多种细胞未体现细胞的全能性，A错误。细胞分化的实质是基因的选择性表达，iPS细胞与其分化成的子细胞中的 RNA 和蛋白质不完全相同，B正确。iPS细胞可增殖分化形成正常的神经细胞，若iPS细胞来源于患者自身细胞，移植后不会引发免疫排斥，C正确。导入某种调节因子抑制突变基因表达，使神经元细胞不能合成毒蛋白，从而达到治疗疾病的目的，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
4．(2025·贵州贵阳月考)人绒毛膜促性腺激素(HCG)是人体内的一种糖蛋白激素，可通过肾小球从尿液中排出。在妊娠早期，HCG的浓度迅速升高。科学家以HCG为抗原制备出单克隆抗体，发明了早孕检测试剂，可在受精10天左右检测出是否怀孕。下列叙述正确的是(　　)
A．用纯化的HCG反复注射到小鼠体内，产生的抗体为单克隆抗体
B．等量B细胞和骨髓瘤细胞经诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞
C．体外培养单个B细胞可以获得大量针对HCG的单克隆抗体
D．经选择培养的杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和抗体检测
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
D　[单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，用纯化的HCG反复注射到小鼠体内，会刺激多个B细胞克隆增殖分化，产生多种浆细胞，不是单克隆抗体，A错误；B细胞和骨髓瘤细胞融合时，可能形成B－B融合细胞、骨髓瘤－骨髓瘤融合细胞及未融合的细胞，并非全部为杂交瘤细胞，B错误；单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，B细胞属于高度分化的细胞，无法在体外培养条件下无限增殖，因此单个B细胞无法通过体外培养获得大量抗体，C错误；经选择培养基筛选出的杂交瘤细胞可能分泌不同抗体，需通过克隆化培养(形成单细胞群)和抗体检测筛选出目标细胞，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
5．(2025·贵州黔东南模拟)某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S(含有多个不同的抗原决定簇，每一个抗原决定簇能够刺激机体产生一种抗体)。研究人员制备抗S单克隆抗体的过程如图所示，下列说法错误的是(　　)
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A．多次注射S抗原免疫小鼠是为了获得大量的能产生抗S抗体的B淋巴细胞
B．培养用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞时，需要保证无菌无毒的环境
C．单克隆抗体M和单克隆抗体N都能够识别S蛋白，说明制备的抗体不具有特异性
D．可用灭活病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
C　[浆细胞分泌抗体具有特异性，多次注射S抗原免疫小鼠是为了获得大量的能产生抗S抗体的B淋巴细胞，A正确；培养用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞时，需要保证无菌无毒的环境，可对培养用具灭菌、通过定期更换培养液等实现，B正确；由题意可知，病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S(含有多个不同的抗原决定簇，每一个抗原决定簇能够刺激机体产生一种抗体)，故单克隆抗体M和单克隆抗体N都能够识别S蛋白，但该现象仍可说明抗体具有特异性，C错误；灭活的病毒可用于对动物细胞进行融合，D正确。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
6．(2025·辽宁大连一模)体细胞核移植等技术推动了我国肉牛育种技术的发展。利用核移植技术繁育肉牛，下列思路不合理的是(　　)
A．从具有优良性状的个体上采集供体细胞
B．通过显微操作去除受体卵母细胞的核
C．利用电刺激或Ca2+载体激活重构胚
D．对原肠胚进行胚胎分割以提高胚胎利用率
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
D　[从具有优良性状的个体上采集供体细胞，这样可以将优良性状的遗传物质传递下去，为培育具有优良性状的肉牛提供基础，A正确；体细胞核移植时，需要通过显微操作去除受体卵母细胞的核，以保证重组细胞的遗传物质主要来自供体细胞的细胞核，B正确；利用电刺激或Ca2+载体激活重构胚，能够使重构胚恢复细胞分裂等生命活动，促进胚胎发育，C正确；胚胎分割应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚进行，原肠胚细胞已经出现了明显的分化，细胞的全能性受到限制，不适合进行胚胎分割，D错误。]
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
7．(2025·重庆卷)为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙(种群数量多)进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是
(　　)
题号
1
3
5
2
4
6
8
7
9
A．克隆动物的核基因组来源于甲、乙
B．体外受精需用获能的精子与MⅠ期的卵母细胞受精
C．囊胚①的内细胞团可发育为胎盘、个体
D．滋养层可影响内细胞团的发育
√
题号
1
3
5
2
4
6
8
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D　[克隆动物的核基因组来源于甲，细胞质中的基因来源于乙，A错误；体外受精需用获能的精子与MⅡ期的卵母细胞受精，而不是MⅠ期，B错误；囊胚①的内细胞团可发育为个体，滋养层细胞发育为胎膜和胎盘，C错误；滋养层可影响内细胞团的发育，如滋养层细胞分泌的某些物质可能会影响内细胞团细胞的发育，D正确。]
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8．(2025·辽宁模拟预测)我国在胚胎移植领域的成果已处于国际前沿，尤其在异种器官移植和高效繁育技术上。2025年3月，基因编辑猪肾脏成功移植到终末期肾病患者体内(技术流程见下图)，术后血肌酐恢复正常，成为亚洲首例活体异种肾移植案例。下列相关叙述错误的是(　　)
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①从猪耳提取体细胞→②基因编辑→③构建胚胎→④移植至代孕母猪体内→培育出无病原体供体
A．步骤①获得的体细胞培养时，为保证细胞正常增殖，往往要加入动物血清
B．步骤②基因编辑的目标之一是消除猪细胞表面引发人免疫排斥的关键抗原
C．步骤③构建胚胎，需要利用体细胞核移植技术、电融合以及早期胚胎培养
D．为提高步骤④成功率，应对代孕母猪进行同期发情处理，使用免疫抑制剂
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D　[在动物细胞培养过程中，由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养时，通常需要在培养基中加入动物血清等天然成分，以保证细胞的正常增殖，A正确。基因编辑的目标之一就是对猪细胞表面引发人免疫排斥的关键抗原进行改造或消除，从而降低免疫排斥反应的发生，提高移植的成功率，B正确。构建用于异种器官移植的胚胎，需要利用体细胞核移植技术将供体体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，形成重组细胞；核移植过程中需要用到电融合，然后通过电刺激等方法激活重组细胞使其分裂发
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育；最后进行早期胚胎培养，使其发育到一定阶段，所以步骤③构建胚胎，需要利用体细胞核移植技术、电融合以及早期胚胎培养，C正确。为提高步骤④代孕的成功率，应对代孕母猪进行同期发情处理，使代孕母猪的子宫生理状态与供体胚胎相适应，为胚胎植入创造良好的条件。但代孕母猪基本上不会对移植的胚胎产生免疫排斥反应，所以不需要使用免疫抑制剂，D错误。]
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9．(2025·陕西安康模拟)埃博拉病毒(EBOV)是一种极其危险且罕见的病毒，其引起的埃博拉出血热是世界上最致命的病毒性出血热之一。NP蛋白在EBOV的复制中具有重要作用，也是检测EBOV的重要靶蛋白。研究人员从EBOV中分离出NP蛋白，并用于制备抗EBOV单克隆抗体，相关实验流程如图1所示。请回答下列问题：
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(1)在培养骨髓瘤细胞时，所用培养液中常需要添加血清，原因是___________________________________________________________。
图1中给小鼠注射NP蛋白的目的是_____________________________________________________________。
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提供细胞生长所需的营养物质(如生长因子)
诱导小鼠产生针对NP蛋白的特异性B淋巴细胞
(2)利用抗EBOV单克隆抗体检测血浆中EBOV含量的原理如图2所示。为判断某人是否感染了EBOV，研究人员进行了两组检测。先将抗EBOV单克隆抗体固定在支持物上，甲组向检测体系中同时添加一定量该人的血液和适量酶标记的NP蛋白；乙组向检测体系中只添加等量酶标记的NP蛋白。保温一段时间后洗涤，再向甲、乙两组检测体系中添加a，最后比较b。
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①甲组向检测体系中添加一定量该人血液的同时，还需加入适量酶标记的NP蛋白，目的是__________________________________________________________________________________________。
②请将上述步骤补充完整：
a．________________________________________________________。
b．_______________________________________________________。
作为竞争性抗原，与患者血液中的NP蛋白(若存在)竞争结合固定在支持物上的抗体
酶反应的底物(如白色底物)
甲、乙两组蓝色的显色强度
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③预期结果和结论： _________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
若甲组蓝色的显色强度显著低于乙组，说明患者血液中含有NP蛋白(感染EBOV)；若甲、乙两组蓝色的显色强度无显著差异，说明患者未感染EBOV
[解析]　(1)动物细胞培养时，血清提供细胞生长、增殖所必需的营养成分，弥补合成培养基的不足，确保细胞正常生长。图1中给小鼠注射NP蛋白，诱导小鼠产生能分泌抗NP蛋白抗体的B细胞。(2)①若血液中存在EBOV的NP蛋白，会与酶标记的NP蛋白竞争结合抗体位点，减少酶标记物的结合量，降低检测信号，所以加入适量酶标记的NP蛋白作为竞争性抗原，与患者血液中的NP蛋白(若存在)竞争结合固定在支持物上的抗体，从而通过信号变化判断感染情况。
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②根据图示反应原理，待测抗原中的目标抗原和酶标记抗原竞争结合固相抗体，标记抗原的酶可催化白色底物变为蓝色产物。所以可以向甲、乙两组检测体系中添加酶反应的底物(如白色底物)即a为酶反应的底物(如白色底物)，最后检测并比较甲、乙两组的蓝色的显色强度即b为甲、乙两组蓝色的显色强度。③如果血液中NP蛋白的含量越少，酶标记抗原和抗体结合得越多，酶催化生成的蓝色产物就越多，检测体系蓝色就越深。预期结果和结论：若甲组蓝色的显色强度显著低于乙组，说明患者血液中含有NP蛋白较多(感染EBOV)；若甲、乙两组蓝色的显色强度无显著差异，说明患者未感染EBOV。
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