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第49讲　动物细胞工程
考点1　动物细胞培养
一、动物细胞培养
1．原理：细胞增殖。
2．地位：动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
3．培养条件
(1)营养：除糖类、氨基酸、无机盐和维生素等细胞所需的营养物质外，通常还需加入血清等一些天然成分。
(2)无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。培养液需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
(3)温度、pH和渗透压：哺乳动物细胞培养的温度多以(36.5±0.5) ℃为宜，多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，此外，渗透压也是动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数。
(4)气体环境：95%空气＋5%CO2(维持培养液的pH)。
4．过程(如图)
二、干细胞培养及其应用
考点2　动物细胞融合技术与单克隆抗体
一、动物细胞融合技术
1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2．方法：PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
3．原理：细胞膜的流动性。
4．结果：形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
5．意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能；成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
二、单克隆抗体及其应用
1．制备原理：一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖；B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量繁殖，又能产生足够数量的特定抗体。
2．制备过程
3．优点
(1)能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合。
(2)可以大量制备。
4．应用
(1)被广泛用作诊断试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
(2)运载药物，形成抗体—药物偶联物，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。
(3)用于治疗疾病。
考点3　动物体细胞核移植技术和克隆动物
一、动物细胞核移植技术
1．概念：将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
2．原理：动物细胞核的全能性。
3．分类：
(1)胚胎细胞核移植。
(2)体细胞核移植。
4．体细胞核移植的过程
二、体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题
前景 畜牧业 加速家畜遗传改良进程、促进优良畜群繁育
保护濒 危物种 有望增加濒危物种的存活数量
医药 卫生 ①作为生物反应器生产医用蛋白 ②转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以用于异种移植 ③人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相应的细胞、组织或器官，可用于器官移植
问题 ①该技术成功率非常低 ②绝大多数克隆动物存在健康问题，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷

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