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第51讲　重组DNA技术的基本工具
考点1　重组DNA技术的基本工具
一、基因工程的概念
二、重组DNA技术的基本工具
1．限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)
2．DNA连接酶
3．载体
考点2　(探究·实践)DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
1．实验原理
2．实验步骤
种类
质粒（常用载体）、噬菌体、
动植物病毒等
一个至多个限制酶切割位点
携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞
特点
后，能在细胞中进行自我复制，或整合
到受体DNA上，随受体DNA同步复制
常有特殊的标记基因，便于重组DNA分
子的筛选
作用
携带外源DNA片段进人受体细胞
提取
利用DNA和其他物质在理化性质方面的差
思路
异，提取DNA
实验原理
DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
DNA在不同浓度的NaCI溶液中溶解度不同
DNA
能溶于2mol/L的NaCl溶液
的性质
沸水浴
HDNA的鉴定：DNA+二苯胺试剂
蓝色
选材
选取洋葱（香蕉、菠菜、菜花或猪肝等）为实验材料
研磨
30g洋葱+10mL研磨液
过滤
过滤4℃冰箱放置取上清液（或离心后取上清液
在上清液中加入等体积、预冷的体积分数为95%
粗提取
的酒精溶液，静置2~3min,获取白色丝状物即
为粗提取的DNA
鉴定
加入5mL2mol/LNaC1溶液溶解DNA,再加入
4mL二苯胺试剂，沸水中加热5min,观察溶液
颜色变化
操作环境
生物体外
操作水平DNA分子水平
主要技术
基因工程
转基因等技术
操作结果
赋予生物新的遗传特性，创造出更符合
人们需要的新的生物类型和生物产品
变异原理
基因重组
来源
主要来自原核生物
种类
分离的限制酶有数千种
识别双链DNA分子的特定核苷酸序列
限制酶
特点
(专一性)
使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开
作用
断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键
结果
产生黏性末端或平末端
作用将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制
酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
DNA
连接酶
来源，
大肠杆菌
E.coli DNA
连接酶
功能、主要“缝合”黏性末端，“缝
合”平末端的效率较低
类型
来源，T4噬菌体
T4 DNA
连接酶
功能，“缝合”
黏性末端和平末端

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