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第53讲　动物细胞工程
选择性必修3　生物技术与工程
第九单元　生物技术与工程
1．阐明动物细胞培养是从动物体中获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。　2．阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程。　
3．阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。　4．概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。　5．简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
一、动物细胞培养
1．原理：__________。
2．地位：动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞核移植、______________等，其中______________是动物细胞工程的基础。
考点1　动物细胞培养
细胞增殖　
动物细胞融合　
动物细胞培养　
3．培养条件
(1)
(2)
培养液
(3)
(4)
7.2～7.4　
95%空气和5% CO2　
特别提醒
动物细胞培养一般用液体培养基，植物组织培养一般用固体培养基。
4．培养过程
(1)制备细胞悬液
胰蛋白酶　
胶原蛋白酶　
单个细胞　
培养液
(2)动物细胞培养
瓶壁
表面
相互接触
停止分裂增殖
前
后
教材隐性知识
1．(人教版选择性必修3 P45图2-12)用胰蛋白酶处理动物组织，对细胞的消化有两种情况：
(1)短时间内细胞________(填“会”或“不会”)被消化，原因是___________________________________________________________。
(2)长时间后细胞________(填“会”或“不会”)被消化，原因是___________________________________________________________。
提示：(1)不会　细胞表面具有糖蛋白，对细胞具有一定的保护作用　(2)会　细胞表面糖蛋白的保护作用是有限的；细胞膜主要成分中的蛋白质可被胰蛋白酶水解
二、干细胞培养及其应用
1．干细胞的概念：动物和人体内仍保留着少数具有________________的细胞。
2．来源：早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官。
分裂和分化能力　
3．分类：包括胚胎干细胞(ES细胞)和成体干细胞等。
(1)
(2)
所有组织和器官
特定的细胞或组织　
(3)
胚胎干细胞
教材隐性知识
2．(人教版选择性必修3 P46相关信息)科学家借助载体将特定基因导入细胞中，直接将________________导入细胞中或者用__________等来诱导形成iPS细胞。
提示：特定蛋白　小分子化合物
[深化拓展]
动物细胞培养和植物组织培养的比较
项目 动物细胞培养 植物组织培养
理论基础 细胞增殖 植物细胞的全能性
培养前处理 无菌；用机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理，使组织分散成单个细胞 无菌、离体
取材 动物胚胎或幼龄动物的器官或组织等 植物幼嫩的部位或花药等
项目 动物细胞培养 植物组织培养
培养基性质 液体 固体
培养基成分 糖类、氨基酸、无机盐、维生素和血清等 水、矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和琼脂等
结果 产生大量细胞，不形成新个体 可产生新个体
项目 动物细胞培养 植物组织培养
应用 人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产 快速繁殖、作物脱毒、细胞产物的工厂化生产和单倍体育种等
相同点 ①都需人工条件下的无菌操作；②都需要适宜的温度、pH等条件；③都进行有丝分裂，都不涉及减数分裂
1．进行动物细胞培养时，血清应经过高温处理后加入培养基。 (　　)
提示：高温会使血清中促进细胞生长和增殖的营养物质失活，而使培养的动物细胞生长缓慢等。
2．用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存。 (　　)
提示：用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，也可以冷冻保存。
×
×
3．培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳。 (　　)
4．已分化的T淋巴细胞也能被诱导为iPS细胞。 (　　)
5．一般认为，成体干细胞具有发育成完整个体的能力。 (　　)
提示：一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。
×
√
√
(人教版选择性必修3 P44～45正文及P45图2-12)干细胞的成功培养是动物细胞培养领域的重要成就之一，许多科学家投入相关的研究中。下图为动物细胞培养过程中，细胞数量的指数变化示意图。
(1)从原理上分析，动物细胞培养和植物组织培养的不同之处是___________________________________________________________
___________________________________________________________，
进行动物细胞培养时，首先要将组织块分散成单个细胞，所采用的方法有_____________________________________________________
___________________________________________________________。
(2)从图上可以看出，随着细胞传代次数增加，传代的间隔时间__________(填“显著变大”“显著变小”或“基本相等”)，随着培养时间的增加，悬浮培养的细胞会出现细胞分裂受阻的现象，其原因是_____________________________________________________
___________________________________________________________(答出3点即可)。
(3)图中无限细胞系是由许多能无限增殖的细胞组成的，试分析无限细胞系形成的根本原因是_____________________________________
___________________________________________________________。
提示：(1)动物细胞培养和植物组织培养所依据的原理分别是细胞增殖和植物细胞的全能性　用机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理一段时间
(2)基本相等　细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素(答出3点即可)
(3)传代培养的细胞遗传物质发生改变，细胞获得无限增殖的能力
考向1　动物细胞培养
1．(链接人教版选择性必修3 P44正文)动物细胞培养是动物细胞工程的基础，培养过程中，动物组织经处理后的初次培养称为原代培养，分瓶之后的培养称为传代培养。下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是(　　)
A．无论原代培养还是传代培养，大多数细胞是悬浮在培养液中生长增殖的
B．进行分瓶培养的原因之一是贴壁细胞发生接触抑制
C．动物细胞培养液中可添加抗生素防止杂菌生长
D．进行动物细胞培养需将培养液的pH调至7.2～7.4
√
A　[在原代培养过程中，大多数动物细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，A错误。正常分裂的细胞在培养瓶中会出现接触抑制现象，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞通常会停止分裂增殖。当要获得大量细胞时，就要对原代培养的细胞分瓶，进行传代培养，B正确。动物细胞培养液中添加抗生素可以防止杂菌生长，避免污染，C正确。进行动物细胞培养需将培养液的pH调至7.2～7.4，以便于动物细胞更好地生长，D正确。]
2．(链接人教版选择性必修3 P45图2-12)下图为动物细胞培养的基本过程，以下叙述正确的是(　　)
A．a、b、c、d瓶中的pH一般需要调到7.35～7.45之间，以维持细胞生存
B．将组织用胰蛋白酶处理去掉细胞膜上的糖被，制成b瓶中的细胞悬液
C．c、d瓶中的培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、抗生素和动物血清等营养
D．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同，但都有有机物
√
D　[多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，因此 a、b、c、d瓶中的pH一般需要调到7.2～7.4，以维持细胞生存，A错误；将剪碎的组织用胰蛋白酶处理一段时间，去掉组织细胞间的蛋白质，使其分散成单个细胞，制成b瓶中的细胞悬液，B错误；c、d瓶中的培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等营养，C错误；动物细胞与植物细胞对营养的需求存在差异，因此动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同，但都有有机物，D正确。]
考向2　干细胞培养及其应用
3．(链接人教版选择性必修3 P46相关信息)我国科学家使用小分子化合物处理小鼠体细胞，成功获得诱导多能干细胞(iPS细胞)，降低了通过导入原癌基因c-Myc等基因制备iPS细胞的潜在成瘤风险。下列叙述正确的是(　　)
A．iPS细胞的潜在成瘤风险来自c-Myc基因促进了细胞的分裂
B．干细胞培养也需在培养液中添加血清等天然成分后进行高压蒸汽灭菌处理
C．用小鼠体细胞制备诱导多能干细胞，体现动物体细胞具有全能性
D．利用健康人的体细胞制备成iPS细胞用于疾病治疗，理论上可避免发生免疫排斥反应
√
A　[原癌基因c-Myc会促进细胞的分裂，A正确；动物细胞培养液中的血清含有蛋白质等活性成分，高压蒸汽灭菌会使其变性失活，B错误；将体细胞诱导为iPS细胞，不能体现细胞全能性，C错误；非亲缘iPS细胞HLA不同，使用非亲缘iPS细胞不能解决干细胞移植中HLA造成的免疫排斥，即利用健康人的体细胞制备成iPS细胞用于疾病治疗，不能避免发生免疫排斥反应，D错误。]
一、动物细胞融合技术
1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成______细胞的技术。
2．方法：PEG融合法、电融合法和________________等。
3．原理：________________。
4．结果：形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的单核细胞，称为__________。
考点2　动物细胞融合技术与单克隆抗体
一个　
灭活病毒诱导法
细胞膜的流动性
杂交细胞
5．意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能；成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段，为制造____________开辟了新途径。
单克隆抗体
教材隐性知识
(人教版选择性必修3 P49旁栏思考)19世纪30年代，科学家发现患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中存在多核细胞，这些多核细胞的来源可能是_______________________________________
___________________________________________________________。
提示：患者体内的病毒直接诱导多个细胞融合而形成多核细胞
二、单克隆抗体及其应用
1．传统抗体的制备
(1)方法
(2)缺点：产量低、______低、________差。
抗体
血清　
纯度　
特异性　
2．单克隆抗体的制备及其应用
(1)制备原理：一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外______(填“能”或“不能”)无限增殖；骨髓瘤细胞能__________；B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能________________________。
不能
大量增殖
产生足够数量的特定抗体
(2)制备过程
B　
交癌
杂
抗体
抗体
检测
所需抗体
特定抗原
阳性
(3)优点
①能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生________结合。
②可以______制备。
(4)应用
①被广泛用作______试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
②运载______，形成抗体—药物偶联物，实现对肿瘤细胞的________杀伤。
③用于__________。
特异性　
大量　
诊断　
药物
选择性
治疗疾病
[深化拓展]
1．植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
2．单克隆抗体制备过程中两次筛选的原因、方法及目的
项目 第一次筛选 第二次筛选
筛选 原因 诱导融合后会得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞 由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞
项目 第一次筛选 第二次筛选
筛选 方法 用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长 用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群
筛选 目的 得到杂交瘤细胞 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
1．有的病毒经灭活处理后，可用于细胞工程中介导动物细胞的融合。 (　　)
2．将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞。 (　　)
提示：将骨髓瘤细胞和B淋巴细胞混合，经诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等。
×
√
3．胰高血糖素受体单克隆抗体(mAb)的制备可能涉及细胞融合技术。 (　　)
4．抗体—药物偶联物通常由抗体、接头、药物(如细胞毒素)三部分组成。 (　　)
5．单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选利用了抗原—抗体结合的原理。 (　　)
√
√
√
(人教版选择性必修3 P48～49图2-16及P50思考·讨论)人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白Ⅱ(cTnI)和肌钙蛋白C(cTnC)，其中cTnI在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。请据图分析回答下列问题：
(1)每隔2周用cTnI 作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是___________________________________________________________
___________________________________________________________。
(2)甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是_________________，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得____
___________________________________________________________。
(3)据图分析，ADC中抗体的作用是_________________________，药物的作用是___________________________________________，
与直接使用药物进行化疗杀伤肿瘤细胞相比， ADC在临床应用上的优势为_______________________________________________。
提示：(1)加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞
(2)乙和丙　能产生(特异性强、灵敏度高的)抗cTnI抗体的杂交瘤细胞
(3)与肿瘤细胞特异性结合，将药物带到肿瘤细胞　诱发肿瘤细胞凋亡而杀伤肿瘤细胞　特异性强，毒副作用小
考向1　动物细胞融合技术
1．(链接人教版选择性必修3 P48正文)人的体细胞与小鼠体细胞进行融合得到的杂种细胞，在持续分裂过程中人类染色体会逐渐丢失，最后只剩一条或几条。如图表示人的缺乏HGPRT酶突变细胞株(HGPRT－)和小鼠的缺乏TK酶细胞株(TK－)融合后并在HAT培养液中培养的过程，已知只有同时具有HGPRT酶和TK酶的融合细胞才可在HAT培养液中长期存活与繁殖。下列叙述错误的是(　　)
A．过程①可用的方法有PEG融合法、电融合法等
B．过程②通常在培养皿或松盖的培养瓶中进行，淘汰融合的具有同种核的细胞和未融合的细胞
C．从图示结果看，可以确定人的TK酶基因位于17号染色体上
D．该方法可以对鼠基因定位，小鼠的HGPRT酶基因位于3号染色体上
√
D　[过程①为小鼠体细胞与人体细胞的融合，可用的方法有PEG融合法、电融合法等，A正确；过程②融合细胞的筛选，通常在培养皿或松盖的培养瓶中进行，淘汰融合的具有同种核的细胞(小鼠体细胞＋小鼠体细胞、人体细胞＋人体细胞)和未融合的细胞，B正确；从培养结果可以看出，培养获得的细胞中均具有小鼠的全部染色体，但是只有含人的17号染色体的细胞存活下来，由此可得，人的TK酶基因位于17号染色体，C正确；由于小鼠的染色体没有缺失，因此不可以对小鼠的基因进行定位，D错误。]
考向2　单克隆抗体的制备及应用
2．(不定项)(链接人教版选择性必修3 P49图2-16)如图是制备抗白细胞介素-6(IL-6)单克隆抗体的示意图。下列叙述错误的是(　　)
A．步骤①给小鼠注射IL-6后，应从脾中分离筛选T淋巴细胞
B．步骤②在脾组织中加入胃蛋白酶，制成单细胞悬液
C．步骤③加入灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性
D．步骤④经过克隆化培养和抗体检测筛选出了杂交瘤细胞
√
√
√
ABD　[本实验的目的为制备抗IL-6单克隆抗体。步骤①：用IL-6对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞，A错误。步骤②：在脾组织中加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶，制成单细胞悬液；胃蛋白酶的适宜pH为1.5，而动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，在此环境下胃蛋白酶会失活，B错误。步骤③：诱导骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合，可以用灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性，C正确。步骤④：目的是筛选出杂交瘤细胞，应通过特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才会生长；步骤⑤：经过克隆化培养和抗体检测筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞，D错误。]
3．(链接人教版选择性必修3 P50思考·讨论)为降低乳腺癌化疗副作用，科研人员在单克隆抗体技术基础上构建抗体—药物偶联物(ADC)，ADC通常由抗体、接头和药物组成，制备和治疗过程如图1和图2。已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。小鼠淋巴细胞中有这两种途径，但一般不分裂，而骨髓瘤细胞中没有S途径，却能分裂。下列叙述错误的是(　　)
A．图1过程对小鼠进行免疫处理后，应该从该小鼠的脾中获取B淋巴细胞
B．若①是在含氨基蝶呤试管中促融，只考虑两两融合，则试管中能增殖的细胞只有2种
C．图1中a和b分别是抗体和药物，两部分通过接头结合在一起，从而获得ADC
D．图2中ADC进入癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出药物最终作用于细胞核
√
B　[免疫细胞集中分布在脾，对小鼠进行免疫处理后，应该从该小鼠的脾中获取B淋巴细胞，A正确。在筛选杂交瘤细胞时，试管中共有5种细胞：未融合的B细胞、互融的B细胞、未融合的骨髓瘤细胞、互融的骨髓瘤细胞、互融的B细胞和骨髓瘤细胞；其中只有互融的B细胞和骨髓瘤细胞能增殖，B错误。图1中的a是抗体，b是药物，两部分通过接头结合在一起，从而获得ADC，C正确。根据图2判断，ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体释放水解酶可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致癌细胞凋亡，D正确。]
一、动物细胞核移植技术和克隆动物
1．概念：将动物一个细胞的________移入________________中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
2．原理：____________的全能性。
考点3　动物体细胞核移植技术和克隆动物
细胞核
去核的卵母细胞
动物细胞核
3．分类
(1)__________核移植。
(2)________核移植。
4．涉及技术：动物细胞培养、__________________、核移植技术、______________等。其中，核移植技术是核心技术。
胚胎细胞
体细胞　
动物细胞融合技术
胚胎移植技术
5．过程
MⅡ期　
显微
操作
重构胚
细胞分裂和发育
教材隐性知识
1．(人教版选择性必修3 P53图2-18)通常用去核的卵母细胞作为受体的原因是__________________________________________________
___________________________________________________________。
提示：它体积大、易操作、营养物质丰富，细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质
二、体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题
胚胎干细胞
非常低
健康
教材隐性知识
2．(人教版选择性必修3 P54相关信息)目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是__________法。也可采用梯度离心、________短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的__________。
提示：显微操作　紫外线　DNA变性
1．科学家采用体外受精技术获得紫羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的种群数量。此过程不涉及的操作是细胞核移植。 (　　)
2．在克隆哺乳动物过程中，通常作为核移植受体细胞的是去核的初级卵母细胞。 (　　)
提示：在克隆哺乳动物过程中，通常选择减数分裂Ⅱ中期的去核卵母细胞作为受体细胞，即次级卵母细胞。
√
×
3．体细胞核移植时，去核卵母细胞的“核”是指纺锤体—染色体复合物。 (　　)
4．重构胚是指人工重新构建的胚胎，具有发育成完整个体的能力。 (　　)
5．体细胞核移植技术有望增加濒危物种的存活数量。 (　　)
√
√
√
(链接人教版选择性必修3 P54思考·讨论及P66复习与提高T3)2017年，我国科学家首次培育了体细胞克隆猴。在培育过程中，我国科学家经过多年的反复试验，可以在10 s之内对卵母细胞进行去核操作，在15 s之内将体细胞注入去核的卵母细胞里。培育克隆猴的流程如下图所示，请结合图回答下列问题：
(1)在将体细胞的核移植到卵母细胞之前，必须先对卵母细胞进行去核操作的原因是_____________________________________________
___________________________________________________________。
(2)上述体细胞核移植技术培育的克隆动物，不是对细胞供体动物进行了100%复制，原因是______________________________________
___________________________________________________________。
(3)在此过程中，灭活的仙台病毒所起的作用是__________________
___________________________________________________________。
(4)研究人员将Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用TSA处理，上述操作的目的是_____________________________________________
___________________________________________________________，
这两种物质发挥作用的机制是________________________________
___________________________________________________________
___________________________________________________________。
提示：(1)为了使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自体细胞供体动物
(2)克隆动物细胞核中的DNA来自供体细胞核，线粒体中的DNA来自受体卵母细胞，另外，生物的性状还受环境的影响
(3)诱导细胞融合
(4)调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率　Kdm4d的mRNA表达组蛋白去甲基化酶，降低组蛋白的甲基化水平；TSA可以抑制组蛋白脱乙酰酶的作用，提高组蛋白的乙酰化水平
考向　动物体细胞核移植技术及应用
1．(链接人教版选择性必修3 P53图2-18)利用动物体细胞核移植技术培育转基因牛的过程如图所示，下列说法错误的是(　　)
A．对牛乙注射促性腺激素是为了收集更多的卵母细胞
B．卵母细胞去核应在其减数分裂Ⅰ中期进行
C．培养牛甲的体细胞时应定期更换培养液
D．可用PCR技术鉴定犊牛丁是否为转基因牛
√
B　[胚胎工程中，往往需要对雌性供体进行超数排卵处理，即注射促性腺激素促使其产生更多的卵母细胞，A正确。卵母细胞培养至MⅡ期(减数分裂Ⅱ中期)进行去核，B错误。动物细胞培养时，培养液需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，C正确。PCR技术可以检测受体细胞中是否导入了目的基因，D正确。]
2．(链接人教版选择性必修3 P55概念检测T2)2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如图所示技术路线。为了某些需要，需对胚胎的性别进行鉴定。据图分析下列叙述正确的是(　　)
A．通过核移植获得的受精卵中，遗传物质全部来自母亲
B．三亲婴儿的培育还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术
C．对胚胎性别进行鉴定时，从囊胚中取出几个细胞的内细胞团，提取DNA做分析鉴定
D．精子与MⅡ期卵母细胞受精的标志是雌雄原核融合形成合子
√
B　[通过核移植获得的受精卵中，核遗传物质来自母亲和精子，质基因来自捐献者的卵母细胞，A错误；三亲婴儿的培育除了细胞核移植外，还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术，B正确；对胚胎性别进行鉴定时，应从囊胚中的滋养层细胞中提取DNA做分析鉴定，而不是内细胞团，否则会影响胚胎发育，C错误；精子与MⅡ期卵母细胞受精的标志是在卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体，D错误。]
体验真题　感悟高考 · 有章可循
1．(2025·广东卷)将人眼睑成纤维细胞传代培养后，再培养形成支架，在该支架上接种人口腔黏膜上皮细胞，培养一段时间后分离获得上皮细胞片层，可用于人工角膜的研究。上述过程不涉及(　　)
A．制备细胞悬液
B．置于5% CO2等适宜条件下培养
C．离心收集细胞
D．用胰蛋白酶消化支架后分离片层
√
D　[动物细胞培养时，为增大细胞与培养液的接触面积，需要制备细胞悬液，A不符合题意；置于5% CO2等适宜条件下培养，其中5%的CO2可维持培养液的pH，B不符合题意；在人眼睑成纤维细胞传代培养过程中需要通过离心收集细胞，C不符合题意；不能用胰蛋白酶消化支架，避免将上皮细胞片层分离成单独细胞，D符合题意。]
2．(2025·湖北卷)利用犬肾细胞MDCK扩增流感病毒，生产流感疫苗，具有标准化、产量高等优点。但MDCK细胞贴壁生长的特性不利于生产规模的扩大，严重制约疫苗的生产效率。研究人员通过筛选，成功获得一种无成瘤性的(多代培养不会癌变)、可悬浮培养的MDCK细胞——XF06。下列叙述错误的是(　　)
A．XF06悬浮培养可提高细胞密度，进而提升生产效率
B．细胞贴壁生长特性的改变是由于流感病毒感染
C．可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒
D．采用无成瘤性细胞生产疫苗，是为了避免疫苗中有致瘤DNA的污染
√
B　[根据题意，与贴壁生长的细胞培养相比，XF06悬浮培养能更充分利用空间，有利于提高细胞密度，从而提升生产疫苗的效率，A正确；细胞贴壁生长特性的改变是筛选的结果，不是流感病毒感染导致的，B错误；在细胞裂解液中，流感病毒和其他细胞裂解物的密度、质量等性质不同，可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒，C正确；根据题意可知，无成瘤性MDCK细胞经多代培养不会发生癌变，采用无成瘤性细胞生产疫苗，能避免疫苗中有致瘤DNA的污染，D正确。]
3．(2025·甘肃卷)肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一种细胞因子，高浓度时可以引发疾病。研究者利用细胞工程技术制备了TNF-α的单克隆抗体，用于治疗由TNF-α引发的疾病，制备流程如下图。下列叙述正确的是(　　)
A．①是从小鼠的血液中获得的骨髓瘤细胞
B．②含未融合细胞、同种核及异种核融合细胞
C．③需用特定培养基筛选得到大量的杂交瘤细胞
D．④需在体外或小鼠腹腔进行克隆化培养和抗体检测
√
B　[从小鼠的血液中不能获得骨髓瘤细胞，A错误；B细胞和骨髓瘤细胞的融合是随机的，可能有些细胞不发生融合，有些两两融合，有些多个融合，有同种核融合细胞，也有异种核融合细胞，B正确；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，但不能得到大量的杂交瘤细胞，C错误；克隆化培养和抗体检测获得目标杂交瘤细胞，该过程在多孔板上进行，D错误。]
4．(2025·重庆卷)为保护濒危哺乳动物甲，科研工作者将甲的近亲物种乙(种群数量多)进行了如图所示的研究，下列叙述正确的是(　　)
A．克隆动物的核基因组来源于甲、乙
B．体外受精需用获能的精子与MⅠ期的卵母细胞受精
C．囊胚①的内细胞团可发育为胎盘、个体
D．滋养层可影响内细胞团的发育
√
D　[克隆动物的核基因组来源于甲，细胞质中的基因来源于乙，A错误；体外受精需用获能的精子与MⅡ期的卵母细胞受精，而不是MⅠ期，B错误；囊胚①的内细胞团可发育为个体，滋养层细胞发育为胎膜和胎盘，C错误；滋养层可影响内细胞团的发育，如滋养层细胞分泌的某些物质可能会影响内细胞团细胞的发育，D正确。]
5．(2025·黑吉辽蒙卷)研究显示，约70%的小鼠体细胞核移植胚胎未能成功发育至囊胚期，且仅有约2%的胚胎移植到代孕母鼠后可正常发育。下列叙述错误的是(　　)
A．体细胞核进入去核的MⅡ期卵母细胞形成重构胚
B．移植前胚胎发育率低，可能是植入的体细胞核不能完全恢复分化前的功能状态
C．胚胎移植到代孕母鼠后成活率低，可能是早期胚胎未能及时从滋养层内孵化
D．为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代替体细胞核移植
√
C　[体细胞核移植是将体细胞的核注入去核的MⅡ期卵母细胞中形成重构胚，A正确；移植前胚胎发育率低，一方面可能是植入的体细胞核不能完全恢复分化前的功能状态，另一方面可能是对动物胚胎进行操作的技术尚不完善，B正确；早期胚胎是在透明带内进行孵化的，C错误；动物胚胎细胞分化程度低，表达全能性相对容易，为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代替体细胞核移植，D正确。]
课时数智作业(五十三)　动物细胞工程
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1．(2025·山东淄博一模)三维细胞培养技术(3D细胞培养)是通过人工模拟细胞间质微环境，允许动物细胞在三维空间中生长和相互作用的技术。与传统的细胞培养相比，3D细胞培养更接近体内细胞的实际生长环境。下列说法正确的是(　　)
A．传统细胞培养时，细胞并不都需要贴附于某些基质表面才能生长增殖
B．用胰蛋白酶处理传统培养的贴壁细胞，断裂其胞间连丝使之游离便于传代
C．3D细胞培养前需要对动物组织进行灭菌处理，培养时需定期更换培养液
D．利用3D细胞培养技术研究干细胞分化过程时，通常需要进行分瓶处理
√
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A　[传统细胞培养时，体外培养的动物细胞可分为两大类：一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖，另一类细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，大多数细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，但并非所有细胞均需要，A正确；胞间连丝是植物细胞间的结构，动物细胞间不存在胞间连丝，B错误；细胞培养过程需要营造无菌、无毒的环境，包括定期更换培养液等，但不能对动物组织进行灭菌处理，C错误；分瓶处理通常是指在传统细胞培养中，当细胞密度过高时，将细胞分散到多个培养瓶中继续培养，而在3D细胞培养中，细胞是在三维结构中生长，因此通常不需要进行分瓶处理，D错误。]
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2．(2025·江苏南通模拟)人羊膜上皮细胞(hAECs)来源于胎盘羊膜，具有干细胞特性(多向分化潜能、低免疫原性)。研究发现在脑中风1至3天后注射hAECs能改善脑功能状况，有利于患者的恢复。相关叙述正确的是
(　　)
A．中风患者脑缺血导致大脑神经元死亡的过程属于细胞凋亡
B．从分娩后的胎盘中提取hAECs用于治疗，可减少道德伦理上的争议
C．体外传代培养hAECs时，若使用胃蛋白酶需将溶液调为酸性
D．hAECs能用于中风治疗，与其分化程度低且不存在免疫排斥有关
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B　[中风患者脑缺血导致大脑神经元死亡对机体是有害的，因而该过程属于细胞坏死，A错误；从分娩后的胎盘中提取hAECs用于治疗，因为该过程不破坏胚胎，可减少道德伦理上的争议，B正确；体外传代培养hAECs时，若使用胃蛋白酶需将溶液调为酸性，但该条件是不利于细胞传代培养的，因而通常用胰蛋白酶和胶原蛋白酶处理细胞，C错误；hAECs具有干细胞特性，可分化为神经细胞等，因而可用于中风治疗，这与其分化程度低有关，该细胞具有低免疫原性，但并非不存在免疫排斥，D错误。]
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3．(2025·河南信阳模拟)科研人员诱导A、B两种动物细胞融合并进行培养(仅考虑两两融合)。据A、B两种细胞的生活环境(下表)以及融合细胞只能生长在选择培养基Ⅱ上，生长环境的pH为4～6的事实，分析下列说法正确的是(　　)
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A细胞 只能在选择培养基Ⅰ上生长，生长环境的pH为4～6
B细胞 只能在选择培养基Ⅱ上生长，生长环境的pH为7～8
A．动物细胞培养使用的培养基都是天然培养基
B．PEG 融合法和高 Ca2+—高pH融合法均可诱导两种细胞融合
C．将融合后的细胞置于CO2培养箱以维持培养液的pH为7～8
D．选择培养基Ⅱ上存活下来并生长的细胞不一定是目标融合细胞
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D　[动物细胞培养使用的培养基都是合成培养基，A错误；A细胞和B细胞生长环境对pH有要求，不可用高Ca2+—高pH融合法，B错误；CO2的主要作用是维持培养液的pH，且为了筛选融合细胞，应用选择培养基Ⅱ且维持其生长环境的pH为4～6，C错误；选择培养基Ⅱ上生存的细胞可能有融合细胞和B细胞，不一定是目标融合细胞，D正确。]
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4．(2025·河北衡水模拟)2024年《科学》杂志报道，科学家成功研发新型抗体
——药物偶联物(ADC)“DS-8201”，该药物由靶向HER2蛋白的单克隆抗体与细胞毒性药物ENH-1通过可裂解连接子偶联而成，用于治疗HER2阳性乳腺癌。下列叙述错误的是(　　)
A．制备DS-8201中的单克隆抗体，需将HER2蛋白注入小鼠体内以激活B淋巴细胞
B．体外培养杂交瘤细胞时，需定期更换培养液以清除代谢废物和补充营养物质
C．ENH-1能够特异性识别并杀伤HER2阳性乳腺癌细胞，而对正常细胞无影响
D．该药物在溶酶体中被降解后释放ENH-1，体现了连接子的“可裂解”特性
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C　[单克隆抗体的制备需要先用特定抗原(此处为HER2蛋白)免疫小鼠，得到能产生特异性抗体的激活的B淋巴细胞，A正确。杂交瘤细胞在体外培养时，需要定期更换培养液以清除细胞代谢废物，同时补充营养物质，这是动物细胞培养的基本要求，B正确。ENH-1是细胞毒性药物，本身不具有特异性识别能力。特异性识别是由单克隆抗体部分实现的。ENH-1通过抗体靶向递送到特定细胞后才发挥作用，C错误。ADC药物的关键特征之一就是其可裂解连接子，该连接子能在溶酶体中被降解，从而释放细胞毒性药物ENH-1，这是ADC药物的核心作用机制，D正确。]
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5．(2025·四川成都一模)双特异性抗体(BsAb)含有两个独立的抗原结合位点。科学家用大鼠(2n)细胞和小鼠(2N)细胞制备出抗T细胞标志物(CD3，CD3可参与T细胞的信号转导)和抗肿瘤标志物(EpCAM)的BsAb，用于治疗EpCAM阳性肿瘤，部分过程如下图所示。下列分析错误的是(　　)
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A．通过细胞克隆化培养和抗体检测，可获得产生特定抗体的杂交瘤细胞
B．同时用CD3和EpCAM免疫小鼠，能获得产生BsAb的B淋巴细胞
C．可用灭活病毒诱导法获得四源杂交瘤细胞，该细胞最多含16个染色体组
D．BsAb可能通过同时结合EpCAM和CD3，激活T细胞来杀伤肿瘤细胞
√
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B　[通过细胞克隆化培养(将杂交瘤细胞单个分离培养)和抗体检测(筛选出能产生特定抗体的细胞)，可获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，A正确；一种B淋巴细胞只能产生一种特定的抗体，同时用CD3和EpCAM免疫小鼠，小鼠的免疫系统只会针对这两种抗原产生两种B淋巴细胞，不能获得产生BsAb的B淋巴细胞，B错误；用灭活病毒诱导法可获得四源杂交瘤细胞，大鼠杂交瘤细胞以及小鼠杂交瘤细胞均是由骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合形成，均含4个染色体组，融合后的四源杂交瘤细胞含8个染色体组，在有丝分裂后期最多含16个染色体组，C正确；BsAb含有两个独立抗原的结合位点，可同时结合EpCAM和CD3，招募并激活细胞毒性T细胞，利用细胞毒性T细胞杀伤肿瘤细胞，D正确。]
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6．(2025·辽宁朝阳模拟)如图为核移植实验过程示意图，根据图示分析，下列叙述正确的是(　　)
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A．胚胎和动物细胞的培养均需提供95%的O2和5%的CO2
B．核移植技术的基础是动物细胞核的全能性
C．受体动物超数排卵后为胚胎提供了相同的生理环境
D．成年动物细胞核移植成功率比胚胎细胞核移植成功率低
√
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D　[胚胎和动物细胞的培养均需提供95%的空气和5%的CO2，A错误；动物细胞工程常用的技术有动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础，因此核移植技术的基础是动物细胞培养，B错误；对受体动物进行同期发情处理后为胚胎提供了相同的生理环境，C错误；由于动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难，因此成年动物细胞核移植成功率比胚胎细胞核移植成功率低，D正确。]
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7．(2025·安徽卷)细胞工程技术已在生物制药和物种繁育等领域得到了广泛应用。下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是(　　)
A．从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞
B．将特定基因或特定蛋白导入已分化的T细胞，可将其诱导形成iPS细胞
C．将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合的细胞即为能分泌所需抗体的细胞
D．采用胚胎分割技术克隆动物常选用桑葚胚或囊胚，因这两个时期的细胞未发生分化
√
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B　[从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为原代细胞，A错误。将特定基因或将特定蛋白导入已分化的T细胞可诱导其形成iPS细胞，B正确。将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后形成的细胞不一定是能分泌所需抗体的细胞，如骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合形成的细胞，C错误。囊胚期的细胞已开始分化，D错误。]
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8．(不定项)(2025·湖南岳阳模拟)与自然受精胚胎相比，体细胞核移植(SCNT)囊胚发育率偏低。研究发现，SCNT胚胎中METTL3表达不足，导致相关mRNA降解，干扰了囊胚的正常发育。METTL3过表达可提高囊胚发育率，具体机制如下图所示。下列叙述错误的是(　　)
题号
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注：m6A是细胞中常见的RNA甲基化修饰形式。
A．m6A修饰不会改变AURKB蛋白mRNA的核苷酸序列
B．m6A修饰可能提高了AURKB蛋白mRNA的稳定性，避免其被蛋白酶水解
C．体细胞核移植技术中的去核是去除卵母细胞中由核膜包被的细胞核
D．培养重构胚时，为减轻代谢物积累对细胞的伤害，可在培养液中加入抗生素
√
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√
BCD　[m6A修饰导致AURKB蛋白mRNA发生的甲基化不会改变自身的核苷酸序列，但可能会影响翻译过程，从而改变生物的表型，A正确；据图可知通过AURKB蛋白mRNA的m6A修饰，提高了AURKB蛋白mRNA的稳定性，防止RNA酶水解mRNA，B错误；体细胞核移植技术中的去核操作中选择处于MⅡ中期的卵母细胞的细胞核，此时的卵母细胞的核其实是纺锤体—染色体复合物，没有核膜，C错误；为了防止动物细胞培养过程中被细菌污染，可在培养液中加入一定量的抗生素，若为减轻代谢物积累对细胞的伤害，可以更换培养基，D错误。]
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9．(12分)(2025·陕西安康模拟)埃博拉病毒(EBOV)是一种极其危险且罕见的病毒，其引起的埃博拉出血热是世界上最致命的病毒性出血热之一。NP蛋白在EBOV的复制中具有重要作用，也是检测EBOV的重要靶蛋白。研究人员从EBOV中分离出NP蛋白，并用于制备抗EBOV单克隆抗体，相关实验流程如图1所示。请回答下列问题：
题号
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(1)在培养骨髓瘤细胞时，所用培养液中常需要添加血清，原因是___________________________________________________________。
图1中给小鼠注射NP蛋白的目的是_____________________________
___________________________________________________________。
提供细胞生长所需的营养物质(如生长因子)
诱导小鼠产生针对NP蛋白的特异性B淋巴细胞
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(2)利用抗EBOV单克隆抗体检测血浆中EBOV含量的原理如图2所示。为判断某人是否感染了EBOV，研究人员进行了两组检测。先将抗EBOV单克隆抗体固定在支持物上，甲组向
检测体系中同时添加一定量该人的血液和适
量酶标记的NP蛋白；乙组向检测体系中只添
加等量酶标记的NP蛋白。保温一段时间后洗
涤，再向甲、乙两组检测体系中添加a，最后
比较b。
题号
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①甲组向检测体系中添加一定量该人血液的同时，还需加入适量酶标记的NP蛋白，目的是______________________________________
___________________________________________________________。
②请将上述步骤补充完整：a．______________________________。
b．_______________________________________________________。
③预期结果和结论：_________________________________________
______________________________________________________________________________________________________________________。
作为竞争性抗原，与患者血液中的NP蛋白(若存在)竞争结合固定在支持物上的抗体
酶反应的底物(如白色底物)
甲、乙两组蓝色的显色强度
若甲组蓝色的显色强度显著低于乙组，说明患者血液中含有NP蛋白(感染EBOV)；若甲、乙两组蓝色的显色强度无显著差异，说明患者未感染EBOV
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[解析]　(1)动物细胞培养时，血清提供细胞生长、增殖所必需的营养成分，弥补合成培养基的不足，确保细胞正常生长。图1中给小鼠注射NP蛋白，诱导小鼠产生能分泌抗NP蛋白抗体的B淋巴细胞。(2)①若血液中存在EBOV的NP蛋白，会与酶标记的NP蛋白竞争结合抗体位点，减少酶标记物的结合量，降低检测信号，所以加入适量酶标记的NP蛋白作为竞争性抗原，与患者血液中的NP蛋白(若存在)竞争结合固定在支持物上的抗体，从而通过信号变化判断感染情况。②根据图示反应原理，待测抗原中的目标抗原和酶标记抗原竞争结合固相抗体，标记抗原的酶可催化白色底物变为蓝色产物。
题号
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所以可以向甲、乙两组检测体系中添加酶反应的底物(如白色底物)即a为酶反应的底物(如白色底物)，最后检测并比较甲、乙两组的蓝色的显色强度即b为甲、乙两组蓝色的显色强度。③如果血液中NP蛋白的含量越少，酶标记抗原和抗体结合得越多，酶催化生成的蓝色产物就越多，检测体系蓝色就越深。预期结果和结论：若甲组蓝色的显色强度显著低于乙组，说明患者血液中含有NP蛋白较多(感染EBOV)；若甲、乙两组蓝色的显色强度无显著差异，说明患者未感染EBOV。
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(教师用书独具)
1．(不定项)(2025·湖南长沙一模)6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)有F和S两种类型，分别由一对等位基因XF和XS编码。基因型为XFXS的女性体细胞中的两个X染色体会有一个随机失活，且这个细胞的后代细胞相应的X染色体均会发生同样的变化。将基因型为XFXS的女性皮肤组织用酶X处理后先进行细胞的原代培养，再对不同的单细胞分别进行单克隆培养。分别对原代培养和单克隆培养的细胞进行G6PD蛋白电泳检测，结果如图所示。下列有关分析正确的是(　　)
A．酶X可能是胰蛋白酶或胶原蛋白酶
B．单克隆培养细胞中的细胞2与细胞3的基因型不同
C．原代培养细胞有2个条带是不同细胞同时检测的结果
D．单克隆培养细胞中的细胞6与细胞7中XS所在的X染色体失活
√
√
√
ACD　[动物细胞之间的蛋白质可被胰蛋白酶或胶原蛋白酶分解，分散成单个细胞，A正确；单克隆培养的细胞，是通过有丝分裂得到的增殖的细胞，故单克隆培养的细胞2与细胞3所含基因相同，即基因型相同，只是表达的基因不一定相同，B错误；结合题干，基因型为XFXS的女性体细胞中的两个X染色体会有一个随机失活，故一个细胞中6-磷酸葡萄糖脱氢酶电泳后只显示一个条带，而原代培养的细胞电泳有2个条带，是因为同时检测了多个不同细胞，C正确；由题图可知，细胞6与细胞7均只含有F型蛋白，说明细胞6和细胞7中XS所在的染色体失活，D正确。]
2．(2025·重庆模拟)线粒体替代疗法(MRT)是一种细胞质替换技术，将目标细胞核转移到健康去核细胞中以预防细胞质基因遗传病，主要包括受精卵细胞核移植(PNT)和卵母细胞纺锤体—染色体复合物移植(ST)两种方法。已知在卵母细胞中，纺锤体区域的线粒体数量较少，而受精卵中线粒体均匀分布。下列说法正确的是(　　)
A．与ST相比，PNT的操作时间较早，细胞较为脆弱，因此成功率比ST低
B．与PNT相比，ST能够更好地避免线粒体DNA的遗传
C．只有通过PNT获得的胚胎才可能拥有三个个体的遗传物质
D．ST没有对胚胎进行操作，因此ST结束后不需要对重构胚进行激活处理
√
B　[PNT是受精卵细胞核移植，受精卵比卵母细胞发育程度高，与ST相比，PNT的操作时间较晚，A错误；因为卵母细胞中纺锤体区域线粒体数量较少，ST将卵母细胞纺锤体—染色体复合物移植到去核卵母细胞中，能更好地避免线粒体DNA的遗传，B正确；PNT是将受精卵的细胞核移植到去核的健康细胞中，ST是将卵母细胞的纺锤体—染色体复合物移植到去核的卵母细胞中，这两种方法获得的胚胎都拥有供核方、供质方以及精子来源方三个个体的遗传物质，C错误；不管是PNT还是ST，重构胚都需要进行激活处理才能正常发育，D错误。]
3．(不定项)(2025·山东临沂二模)PSMA是某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白，CD28是T细胞表面受体。将两株不同杂交瘤细胞融合形成的双杂交瘤细胞，既能够悬浮在培养基中生长繁殖，又可以产生双特异性抗体PSMA×CD28。PSMA×CD28既能选择性地靶向结合某种癌细胞表面的PSMA蛋白，又能特异性地结合T细胞表面的CD28蛋白，从而激活T细胞，通过活化的T细胞来识别和杀灭目标癌细胞。图1所示为双特异性抗体PSMA×CD28的制备流程，图2所示为双特异性抗体PSMA×CD28的结构及作用机理。下列分析正确的是(　　)
A．①过程需给小鼠分别注射PSMA蛋白、CD28蛋白，才能最终得到图2中有效激活T细胞和杀伤癌细胞的双特异性抗体PSMA×CD28
B．图1至少进行3次抗原检测进行筛选才能得到双杂交瘤细胞XY，最后一次筛选需在96孔板的孔洞中同时加入PSMA和CD28蛋白
C．对⑤过程得到的双杂交瘤细胞进行传代培养前，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
D．获得的杂交瘤细胞XY要置于含有95%空气和5%CO2混合气体的CO2培养箱中进行培养
√
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AD　[双特异性抗体生产过程中，应先将癌细胞表面的PSMA蛋白和T细胞表面的CD28蛋白分别作为抗原注射到小鼠体内，使小鼠产生免疫反应，才能最终得到图2中有效激活T细胞和杀伤癌细胞的双特异性抗体PSMA×CD28，A正确；筛选双特异性抗体时需要使用制备单克隆抗体时所使用的抗原物质，该过程需要先用一种抗原(如PSMA)筛选出能够分泌抗PSMA抗体的杂交瘤细胞，再用另一种抗原(如CD28)从已筛选出的杂交瘤细胞中筛选出能分泌抗CD28抗体的杂交瘤细胞，所以筛选获得双特异性抗体时至少需要进行2次抗
原检测，B错误；⑤过程得到的双杂交瘤细胞能悬浮在培养基中生长繁殖，不需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，只有贴壁生长的细胞进行传代培养前才需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，C错误；动物细胞培养时，通常将细胞置于含有95%空气和5% CO2 混合气体的CO2培养箱中进行培养，95% 空气提供细胞代谢所需的氧气，5%CO2可以维持培养液的 pH，所以获得的杂交瘤细胞XY要置于含有95%空气和5% CO2 混合气体的 CO2 培养箱中进行培养，D正确。]
谢 谢 ！

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