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四川省南充市高坪中学2025-2026学年高二下学期第二次月考生物试题
一、单选题
1．葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛。研究人员以脯氨酸替代葡萄糖异构酶第138位的甘氨酸，其热稳定性有了很大的提高。下列叙述错误的是（　　）
A．可对GI基因相关位点碱基进行替换
B．可将改造后的GI直接导入大肠杆菌中表达
C．在细胞中合成改造后的GI遵循中心法则
D．改造后的GI与原GI的空间构象有所差别
2．下列关于生物技术相关实验操作的描述，正确的是（ ）
A．制作酸奶时，要先通气后密封，既能加快乳酸菌繁殖又有利于其发酵
B．纯化微生物时，所用培养皿、培养基及接种环均需进行灭菌处理
C．诱导形成愈伤组织时，必须给予适宜温度、pH及光照等环境条件
D．传代培养动物细胞时，均需先用胰蛋白酶等处理，离心制成细胞悬液后再分瓶培养
3．某同学利用蓝莓果实制作果醋，图示其操作的简易流程。下列相关叙述正确的是（　　）
A．果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同
B．过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率
C．过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌
D．过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气
4．井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变种(JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长)发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于JGs发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（ ）
A．JGs可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的基因
B．JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，一定会提高井冈霉素的产量
D．井冈霉素作为微生物农药来防治水稻病害，有利于农业的可持续发展
5．如图是在氧气充足的条件下筛选某种营养缺陷型但高产酒精的酿酒酵母的示意图，已知营养缺陷型酵母只能在完全培养基上生长而不能在基本培养基上生长。原位影印是通过无菌绒布将原培养基上菌落保持位置不变接种到新培养基的过程。下列相关描述正确的是（ ）
A．进行紫外线处理的目的是对菌液进行消毒
B．①②④均为完全培养基，可采用干热灭菌的方法
C．C过程应将菌株分别转印至培养基③④，然后用涂布器涂布均匀
D．要获得高产酒精的酿酒酵母，应该从④中挑取D菌落进行纯化培养
6．水母雪莲是我国一种名贵药材，主要活性成分为次生代谢产物黄酮。水母雪莲生长缓慢，长期的掠夺性采挖导致该药材资源严重匮乏。研究人员开展了悬浮培养水母雪莲细胞合成黄酮的工程技术研究，结果如表所示。下列叙述正确的是（ ）
转速/(r/ min) 55 65 75 85
相对生长速率 0.21 0.25 0.26 0.25
细胞干重/(g/L) 7.5 9.7 11.4 9.5
黄酮产量/(g/L) 0.2 0.27 0.32 0.25
A．该工程技术的生物学原理是植物细胞具有全能性
B．黄酮不是水母雪莲细胞生长和生存所必需的
C．悬浮培养目的是提高单个水母雪莲细胞中黄酮含量
D．转速为85 r/min时不利于细胞分裂，有利于黄酮的积累
7．如图表示某种哺乳动物受精作用及早期胚胎发育的部分过程。下列有关叙述正确的是（ ）
A．图1中各细胞内的DNA分子数目与体细胞中相同
B．图2和图3中的极体都将继续分裂
C．图1到图3的过程发生在子宫
D．受精的标志是图2中出现雌、雄原核
8．被称为“沙漠之舟”的单峰骆驼在野外几乎灭绝，科研人员为拯救濒危野化单峰骆驼，利用现代生物技术尝试进行人工培育，流程如图所示。下列相关叙述正确的是（　　）
A．过程①通常对B驯养单峰骆驼注射性腺激素使其超数排卵
B．野化单峰骆驼C可以选择雌性个体，也可以选择雄性个体
C．可用蛋白酶合成促进剂激活重构胚使其完成细胞分裂和发育进程
D．过程④为胚胎移植，需对受体注射免疫抑制剂使胚胎顺利植入
9．某研究小组以新鲜洋葱为材料进行“DNA粗提取与鉴定”实验。操作流程如下：①组织捣碎后加入研磨液充分研磨；②过滤取滤液，置于4 ℃冰箱静置分层；③取上清液加入等体积预冷的95%酒精；④离心后收集沉淀物；⑤取部分沉淀加NaCl溶解后进行二苯胺鉴定。下列叙述正确的是（ ）
A．步骤③中因为DNA不溶于酒精而某些蛋白质可溶，所以冷酒精可使DNA快速析出
B．步骤⑤鉴定时，直接取④离心收集的沉淀物与二苯胺混合，室温下放置观察颜色变化
C．若利用提取物进行PCR后，进行琼脂糖凝胶电泳，迁移距离越大的DNA片段相对分子质量越大
D．步骤②静置后DNA主要存在于沉淀中，需用高浓度NaCl溶液重新溶解
10．利用蛋白质工程对干扰素进行改造，可在一定条件下延长其保存时间。下列叙述错误的是 （ ）
A．天然蛋白质合成的过程按照中心法则进行，蛋白质工程与之相反
B．利用蛋白质工程对干扰素进行改造时，操作对象是干扰素
C．经改造后的干扰素基因能通过工程菌的繁殖实现遗传
D．对干扰素的改造遇到的难题之一是干扰素的高级结构十分复杂
11．如图为利用玉米（2n=20）芽尖细胞进行实验的流程示意图。下列叙述正确的是（ ）
A．植株C的性状和植株A相同
B．植株C体细胞有丝分裂后期染色体数与植株B形成的配子染色体数不同
C．细胞a和细胞c融合为细胞X，所以细胞X含有两个细胞核
D．植物体细胞杂交是指细胞a和细胞c诱导形成细胞X的过程
12．中国科学家利用相关生物学技术，成功培育出世界上首例只有双雌来源的孤雌小鼠和双雄来源的孤雄小鼠，实现了哺乳动物的同性繁殖，实验流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．上述过程培育获得的孤雄小鼠的性染色体组成均为XY
B．甲囊胚内细胞团均等分割可获得具有相同遗传物质的孤雌小鼠
C．去核卵细胞为孤雄小鼠早期胚胎的发育提供了营养物质
D．上述技术为拯救仅存单一性别的濒危哺乳动物提供了可能性
13．某小组通过PCR（假设引物长度为8个碱基，短于实际长度）获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行酶切（如图），再用所得片段与质粒连接成功构建了基因表达载体。下列叙述正确的是（ ）
A．其中一个引物序列为3'-TGCGCAGT-5'
B．步骤①所用的酶是SpeI和CfoI
C．用步骤①的酶对质粒进行酶切，至少获得2个片段
D．构建基因表达载体时需要使用限制酶和DNA聚合酶
14．增强子是可促进基因转录的一小段特殊DNA序列，现用PCR扩增增强子和Bt基因，然后重叠延伸使两片段融合，以实现对 Bt基因表达的调控，如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A．增强子中含多个起始密码子以促进基因转录
B．引物B、C的序列需一致以促进两片段融合
C．DNA 单链B、C 混合后才能延伸出融合片段
D．为获得大量融合片段可用引物A、D扩增融合片段
15．基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，以便进行重组和筛选。如图甲所示，限制酶I的识别序列和切割位点是-↓GATC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切割位点是-G↓GATCC-。图乙展示了将编码四种不同酶的基因OsGLO1、EeCAT、EeGCL和TSR与叶绿体转运肽基因连接，并搭载到农杆菌Ti质粒的T-DNA片段，构建多基因表达载体，最终在水稻叶绿体内构建了一条新代谢途径，从而提高了水稻的产量。根据图示判断下列操作正确的是（　　）

A．在图甲过程中，应选择用限制酶I切割质粒，用限制酶Ⅱ切割目的基因
B．在图甲过程中，应选择用限制酶Ⅱ切割质粒，用限制酶I切割目的基因
C．图乙中，OsGLO1基因、EeCAT基因的转录模板在DNA分子中的方向相同
D．应选择用含潮霉素和卡那霉素的选择培养基来筛选转化成功的水稻细胞
二、实验题
16．豆汁是北京独有的、久负盛名的传统风味小吃，以其独特的风味及丰富的营养深受当地居民的喜爱。下图是以绿豆为原料制备豆汁的传统工艺流程。混浆操作通常是将老浆直接倒入绿豆乳中，混合浆的沉淀与酸化过程实际属于乳酸发酵，其主要产酸微生物为乳酸菌。回答下列问题：
(1)混合浆发酵时所需的乳酸菌主要来自________。乳酸发酵过程中，能为乳酸菌同时提供碳源和能源的物质主要是________。
(2)欲测定混合浆中乳酸菌的含量多少，研究小组可采用的接种方法是________（填“平板划线法”或“稀释涂布平板法”），该方法测得的结果通常比实际值________（填“偏高”、“偏低”或“相同”），原因是________。
(3)为了筛选出产酸能力强的乳酸菌菌种，研究小组将不同稀释倍数的酸豆汁液接种到MRS固体培养基（添加了质量分数1.5%碳酸钙，遇酸发生反应会出现透明圈）上，在适宜条件下培养一段时间后，应挑取________的菌落进一步纯化和培养。
(4)将上述得到的乳酸菌分别接种到绿豆乳后，在相同条件下，检测相关指标，结果见下表。应优先选取菌株________作为优化发酵工艺的菌种，理由是________。
菌株类型 检测指标 菌株A 菌株B 菌株C 菌株D
絮凝率（%） 51.61 65.42 53.87 61.37
发酵液pH 3.59 4.09 4.15 3.78
豆汁风味 腐味 清香味 清香味 弱清香味
注：絮凝率与淀粉沉降分离速度正相关，淀粉沉降分离速度越快，豆汁品质越佳。
17．非洲狼尾草光合效率高，为培育高光合效率的水稻新品种，研究人员将粳稻与非洲狼尾草的原生质体融合并培育出杂种幼苗，如图1。研究人员同时开展了不同浓度的聚乙二醇（PEG）对原生质体融合率的影响实验（已知PEG浓度较高时对细胞具有毒害作用），实验结果如图2所示（异源融合率是指不同种的原生质体发生融合的概率）。回答下列问题：
(1)图1中，过程①需用________酶处理粳稻与非洲狼尾草的细胞；过程②除了用PEG处理诱导原生质体融合外，还有________（答2点）等具体方法，融合完成的标志是________。
(2)从过程④到过程⑤一般需要更换新的培养基，原因是________，并且过程⑤还需要给予适宜的光照，其作用是________。
(3)分析图2的实验结果，在此基础上，若想要进一步确定诱导粳稻与非洲狼尾草原生质体融合的最适PEG浓度，实验思路是________。
三、解答题
18．紧密连接蛋白（CLDN6）在乳腺癌、肝癌等多种癌症中特异性高表达，能促进肿瘤发生、生长和迁移等。美登素（DM1）是一种化疗药物，副作用较大。为实现DM1对肿瘤细胞的靶向作用，研究人员以CLDN6为靶点制备相应单克隆抗体并构建抗体-药物偶联物（CLDN6-DM1）。回答下列问题：
(1)CLDN6是一种跨膜蛋白，包括胞外区、跨膜区和胞内区，制备免疫小鼠所用的抗原时，应提取________区基因序列用于设计抗原。
(2)制备单克隆抗体时，先将纯化的抗原间隔多次注射到小鼠体内，其目的是________；一段时间后，再取出免疫小鼠的脾细胞与体外培养的骨髓瘤细胞进行诱导融合，并在特定的选择培养基上初筛得到杂交瘤细胞，该细胞的特点是________；再经克隆化培养和抗体检测，将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞注射到小鼠________或在体外大规模培养。
(3)将该单克隆抗体与抗癌药物DM1结合构建抗体-药物偶联物（CLDN6-DM1）。用不同浓度的游离DM1、CLDN6-DM1、IgG-DM1（无关抗体-DM1）分别处理高表达CLDN6细胞和低表达CLDN6细胞，检测细胞活力，结果如图。
①由图可知，CLDN6-DM1能特异性杀伤高表达CLDN6细胞，依据是________。
②下图表示抗体-药物偶联物（CLDN6-DM1）的作用机制。
由图分析，CLDN6-DM1能特异性杀伤高表达CLDN6细胞的原因是________，再通过溶酶体裂解，将DM1释放出来发挥作用。
19．根据科学研究发现，乳酸链球菌通过细胞壁上的蛋白酶将牛奶蛋白（如酪蛋白）降解为寡肽，这些寡肽随后被细胞通过特定的寡肽渗透酶（OppA）系统内化，用于细胞生长。为增加OppA基因表达量，研究人员利用质粒和外源片段、强启动子构建了可以高表达OppA的乳酸链球菌菌株。质粒、限制酶识别序列及酶切位点、OppA基因如图所示。请回答下列问题：
(1)结合图示分析，构建OppA基因高表达载体时，应该选择______酶对质粒进行切割，理由是______。
(2)用PCR技术扩增OppA目的基因时，应选用引物______（填序号）。本研究载体使用了乳酸链球菌的复制原点，其目的是______。
(3)已知OppA基因的甲链为编码链（与转录模板链互补的DNA链），甲链的碱基序列为5′-TTACAGCGCTCC-3′，强启动子的碱基序列为5′-CATGC-3′。为便于与质粒连接，请写出OppA基因上游引物的15个碱基序列：5′-______-3′。OppA基因的转录方向是______（填“从左往右”或“从右往左”）。
(4)为了筛选出正确串联了强启动子、OppA基因的重组质粒菌落，研究人员用下表所示含有不同抗生素的平板进行筛选，表中平板类型d加入的抗生素应该是______，得到的M、N、O三类菌落，其生长状况如表中所示（“+”表示生长，“-”表示不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是______。
菌落类型平板类型 M N O
a.无抗生素 + + +
b.卡那霉素 + +
c.氨苄青霉素 +
d +
20．乳酸菌无氧呼吸过程中第一阶段产生的丙酮酸会在乳酸脱氢酶（LDH）的催化下产生乳酸，科学家通过改造LDH能够高效地生产高纯度的苯乳酸。
(1)科学家拟改造LDH基因成为mLDH基因，需将LDH第52位的酪氨酸替换为亮氨酸，使得活性中心增大，可用于生产苯乳酸。
①先将LDH基因片段连入载体中形成环状质粒，如图。
将突变后的序列设计在引物1中，以环状质粒为PCR的________，再向体系中加入四种脱氧核苷酸（dNTP）、________、________以及碱基替换后的引物进行扩增LDH基因，PCR产物的序列便引入了预期的突变。下列引物序列中符合引物1要求的有________。
A．5'—TGACTGACTAACACTCGGAC—3'
B．5'—TGACTGACAACCACTCGGAC—3'
C．5'—TGACTGACGATCACTCGGAC—3'
D．5'—TGACTGACGAGCACTCGGAC—3'
②上述PCR产物为线性DNA分子，从DNA聚合酶作用角度分析，原因是________；所以改造后的mLDH基因序列位于PCR产物的两侧，需要用________酶将产物两端连接起来，获得含有mLDH基因的质粒。
(2)产生苯乳酸的过程还需FDH酶参与，现需要构建同时含有mLDH、FDH的基因表达载体。根据如图信息，先用限制酶________切割质粒2和空载体，将两种酶切产物连接获得连接产物，再用限制酶________切割质粒1和上一步中的连接产物，连接获得基因表达载体。
(3)上述科学实践属于生物工程中的________工程。
《四川省南充市高坪中学2025-2026学年高二下学期第二次月考生物试题》参考答案
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
答案 B B B D D B D B A B
题号 11 12 13 14 15
答案 B A C D B
1．B
2．B
3．B
4．D
5．D
6．B
7．D
8．B
9．A
10．B
11．B
12．A
13．C
14．D
15．B
16．(1) 老浆 绿豆乳中的糖类
(2) 稀释涂布平板法 偏低 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
(3)菌落周围有透明圈且菌落直径与透明圈直径比值较小（或菌落周围有透明圈且透明圈直径与菌落直径比值较大）
(4) B 菌株B絮凝率最高，发酵液酸味柔和且豆汁有清香味
17．(1) 纤维素酶和果胶 电融合法、离心法、高Ca2+—高pH融合法（任选2点） 杂种细胞再生出细胞壁
(2) 过程④、⑤所需培养基中的植物激素（生长素、细胞分裂素）比例不同 光能诱导叶绿素的产生，并为植物光合作用提供光能
(3)在PEG浓度为30%～40%范围内设置一系列较小的浓度梯度，检测并比较不同PEG浓度下的异源融合率
18．(1)胞外
(2) 刺激小鼠机体产生更多的能分泌特异性抗体的B淋巴细胞，从而提高免疫效果 既能无限增殖，又能产生特异性抗体的特点 腹腔内
(3) 与低表达CLDN6细胞相比，随CLDN6-DM1处理浓度的升高，高表达CLDN6细胞活力下降幅度大 CLDN6-DM1与高表达CLDN6细胞上的CLDN6蛋白特异性结合得多，进入细胞中
19．(1) BamHⅠ、SalⅠ 用这些酶不会破坏全部标记基因（或不会破坏卡那霉素抗性基因）
(2) ②③ 保证载体能在乳酸链球菌细胞中正常复制
(3) GGATCCCATGCTTAC 从左往右
(4) 卡那霉素和氨苄青霉素 O
20．(1) 模板 耐高温的DNA聚合酶（Taq酶） 适宜的缓冲液 AD DNA聚合酶只能从引物的3'端开始延伸DNA链，无法催化子链DNA的3'端和5'端之间形成磷酸二酯键 DNA连接
(2) NdeI和XhoⅠ NcoⅠ和BamHI
(3)
蛋白质

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