资源简介

解密33 克隆技术和胚胎工程
高考考点
考查内容
三年高考探源
考查频率
体内受精和早期胚胎发育
1．掌握体内受精和早期胚胎发育的过程；
2．熟知细胞培养的步骤及其注意事项；
3．掌握单克隆抗体的制备。
2017新课标III·38
2016全国卷Ⅱ·40
★★★★☆
胚胎工程的应用及前景
★★★★☆
干细胞培养及伦理问题
★★★★☆
单克隆抗体的制备
★★★★☆
考点1 体内受精和早期胚胎发育
1．精子的发生
（1）不同种动物精子的形态相似，大小略有不同，但与动物的体型大小无关。
（2）精子的发生中两次减数分裂是连续的，是在睾丸的曲细精管内进行的。卵子的发生中两次减数分裂是不连续的，减数第一次分裂在卵巢内完成，产生一个次级卵母细胞和第一极体，进入输卵管在与精子的结合过程中完成减数第二次分裂，产生一个成熟的卵子和第二极体。当原核融合时，第一极体完成分裂，形成2个第二极体。有的哺乳动物的第一极体不再分裂。
2．卵子的发生
（1）哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备，是在出生前（即胎儿时期）完成的，这是精子和卵子在发生上的重要区别。
（2）哺乳动物卵巢、卵泡和卵子的关系：卵巢是卵子形成、卵泡存在的场所，内部包含许许多多不同发育阶段的卵泡，而成熟的卵泡中可释放出卵子，其中卵子的外面有辅助结构——透明带，由卵丘细胞（卵泡细胞）形成放射冠。
3．受精过程中的“三大反应”和防止多精子入卵受精的“两道屏障”
（1）顶体反应：精子释放的顶体酶可直接溶解卵丘细胞间的物质，形成精子穿越放射冠的通路。
（2）透明带反应：在精子触及卵细胞膜的瞬间，会产生阻止后来的精子进入透明带的生理反应，它是防止多精子入卵受精的第一道屏障。
（3）卵细胞膜反应：精子入卵后，卵细胞膜拒绝其他精子再进入卵内，这是防止多精子入卵受精的第二道屏障。
4．胚胎发育过程
（1）起点是受精卵分裂，在输卵管内完成受精作用时即已开始，直至发育成为成熟的胎儿。
（2）卵裂期的特点：细胞有丝分裂使细胞数目增加，但胚胎总体积并不增加或略缩小，因此每个细胞的体积会随分裂的进行不断缩小，但核内遗传物质并未减少。
（3）桑椹胚以前的细胞均未分化，细胞全能性最高，是胚胎分割的最佳时期。
（4）桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。
【易错警示】
受体及胚胎发育的2个易错点
（1）受精过程的三个易混点
①精子获能是指精子获得受精“能力”，而不是获得能量。
②排卵是指卵子从卵泡中排出，而不是卵泡从卵巢中排出。
③受精的标志≠受精完成的标志：受精的标志是在透明带和卵细胞膜之间观察到两个极体；而受精过程完成的标志是雌、雄原核的融合。
（2）卵裂期胚胎发育过程中物质和体积变化的规律
①有机物：胚胎没有和母体建立联系，没有从母体获取有机物，而一直呼吸消耗，有机物总量减少。
②细胞体积：胚胎总体积不变或略有减小，但细胞数目增多，所以每个细胞体积减小。
③细胞中DNA含量：伴随细胞分裂，细胞数目增多，总DNA含量增多，但每个细胞中核DNA含量保持相对稳定。
调研1 如图为经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程，请回答下列问题：
（1）A细胞是________，在进行体外受精前要对精子进行________处理。
（2）进行胚胎分割时，应选择发育到________时期的胚胎进行操作。
（3）②指的是________。
（4）通过胚胎分割产生的两个或多个个体具有相同遗传性状的根本原因是____________________。
（5）在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意____________________________。
（6）受体母牛必须和供体牛属于________。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是_________________________________________________________________________________。
【答案】（1）次级卵母细胞 获能
（2）桑椹胚或囊胚
（3）囊胚腔
（4）来源于同一个受精卵，具有相同的遗传物质
（5）将内细胞团均等分割，以免影响分割后胚胎的恢复和进一步发育
（6）同一物种 受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应
考点2 胚胎工程的应用及前景
1．胚胎工程的操作流程分析
（1）胚胎移植的生理学基础
①哺乳动物排卵后，同种动物供、受体生殖器官的生理变化是相同的，这是胚胎能够移入受体的生理基础。
②早期胚胎形成后，未与母体子宫建立联系，而是处于游离状态，这是胚胎收集的生理基础。
③受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，这是胚胎在受体内能够存活的生理基础。
④供体胚胎可与受体子宫建立联系，且不影响供体胚胎的遗传特性，这是供体胚胎正常发育的生理基础。
（2）实质：是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转换，而胚胎本身的遗传物质并不发生改变，因此各种性状能保持其原来的优良特性。
（3）优势：充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，从而大大缩短了供体本身的繁殖周期，大大推动了畜牧业的发展。
（4）胚胎移植过程中两次使用激素：第一次常用孕激素对受、供体进行同期发情处理；第二次用促性腺激素处理供体使其超数排卵。
（5）胚胎移植过程中有两次检查：第一次对收集的胚胎进行检查；第二次对受体母畜是否妊娠进行检查。
（6）胚胎移植的意义：①加速育种工作和品种改良；②大量节省购买种畜的费用；③一胎多产；④保存品种资源和濒危物种；⑤可充分发挥优良个体的繁殖潜能，缩短繁殖周期，增加一生繁殖的后代数量。
【特别提醒】
胚胎移植是有性生殖还是无性生殖，取决于胚胎是由受精卵形成的，还是由核移植技术形成重组细胞发育而成或胚胎分割形成的。
2．胚胎分割
（1）概念：采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
（2）理论基础：细胞的全能性。
（3）使用的主要仪器：实体显微镜和显微操作仪。
（4）材料选择：发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚。
（5）囊胚期分割要求：内细胞团均等分割，以免影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
（6）意义：加快繁殖速度，是动物无性繁殖或克隆的方法之一，其他克隆方法还有核移植。
（7）特点：后代具有相同的遗传物质。
3．试管动物与克隆动物的比较
比较项目
试管动物
克隆动物
技术基础
体外受精、胚胎移植
核移植技术、细胞培养、胚胎（分割）移植
实例
试管牛
多利羊
过程
生殖方式
有性生殖
无性生殖
遗传物质
遗传物质来自两个个体
遗传物质大部分来自供核生物体
意义
充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，缩短供体本身的繁殖周期
加速家畜遗传改良进程、挽救濒危物种等
【特别提醒】
胚胎移植中供体与受体的确定：提供胚胎的个体称为供体，接受胚胎移植的个体称为受体；供体为优良品种，作为受体的雌性动物一般为常见的或现存量大的同种健康品种。
调研1 我国已实现部分“胚胎工程产业化”，如肉牛、奶牛胚胎工程产业化。以下是科学家采用不同方法产业化培育良种牛的过程，a～h表示操作过程，请回答：
（1）培育“试管牛C”技术的操作流程是_______（填字母），d操作的名称是________，h操作的核心是________，受精时受体的卵母细胞处于________期。
（2）图中数字标号代表的结构名称是①______________________________________，②__________，③__________。若要获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到______________阶段的早期胚胎进行分割处理，在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意_____________________。
（3）图中用到的激素是________，移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是
________________________________________________________________________。
【答案】（1）a→b→f→g 胚胎移植 基因表达载体的构建 MⅡ中
（2）滋养层 囊胚腔 内细胞团 桑椹胚或囊胚 将内细胞团均等分割
（3）促性腺激素 受体子宫对外来胚胎不发生免疫排斥反应
考点3 干细胞培养及伦理问题
一、干细胞培养及应用
1．干细胞的种类
名称
全能干细胞
多能干细胞
专能干细胞
特点
具有形成机体的组织或器官，甚至形成完整个体的潜能
具有分化成多种细胞或组织的潜能，但不能发育成完整的个体
只能分化成特定器官或具有特定功能的一类干细胞
举例
受精卵、胚胎干细胞
造血干细胞
神经干细胞
应用
用于发生病变的器官移植等
造血干细胞移植是治疗血液系统疾病、遗传性血液病等的有效手段
通过神经干细胞移植治疗脑瘫、头颅外伤等病症
2．胚胎干细胞的来源和特点
胚胎干细胞是从早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，包括人类囊胚的内细胞团，具有胚胎细胞的特性。它能长期维持未分化状态，又有全能分化的潜能，在体外培养时仍能维持正常和稳定的染色体组型，在特定的环境诱导下，能分化成各类细胞。因此，它是细胞的源头，是全能细胞，并能够制造机体需要的全部细胞。
3．胚胎干细胞的培育过程
4．胚胎干细胞的主要用途
（1）将胚胎干细胞核移植到去核的卵细胞中，经过胚激活、胚胎培养、胚胎移植后直接由受体完成克隆动物。
（2）培育出人造组织器官，用于器官移植。
（3）改良创造动物新品种。
二、生物技术的伦理问题
1．试管婴儿与克隆人
（1）试管婴儿的培育过程
精子卵细胞受精卵婴儿
（2）克隆人的培育过程
2．治疗性克隆和生殖性克隆的比较
类型
项目
治疗性克隆
生殖性克隆
区别
目的
治疗人类疾病
用于生育，产生新个体
水平
细胞水平
个体水平
联系
都属于无性繁殖；产生的新个体、新组织遗传信息相同
3．试管婴儿和设计试管婴儿的比较
（1）不同点
①所用技术手段：设计试管婴儿胚胎移植前需进行遗传学诊断或基因诊断，试管婴儿不需进行遗传学诊断或基因诊断。图中①②③是试管婴儿的培育过程，①②④⑤是设计试管婴儿的培育过程。
②应用：试管婴儿主要是解决不孕夫妇的生育问题，设计试管婴儿主要用于白血病、贫血症的治疗。
（2）相同点：都是体外受精，并进行体外早期胚胎培养，都要经过胚胎移植，都是有性生殖。
调研1 “试管婴儿”技术是将不孕夫妇的精子和卵细胞取出，在体外完成受精，并在体外培养，使其发育到如图所示的时期，再将胚胎移入女性子宫内发育成胎儿。它不仅使一部分不能生育的男女重新获得了生育的机会，也为人类的优生开辟了新的途径。据此回答：
（1）“试管婴儿”技术在生物学上所依据的原理是________。
A．有性生殖 B．组织培养
C．克隆技术 D．基因工程
（2）人的受精卵通过卵裂，逐渐形成大量形态、功能不同的细胞、组织，进而形成器官和系统。从细胞水平看，卵裂的分裂方式是________________。
（3）图示时期是胚胎发育的________期。
（4）在该图下一时期，b细胞最可能成为________胚层的一部分。
（5）要得到“同卵双胞胎”，采用的技术是__________。双胞胎的性别是否相同？______________。
（6）现在大多数人反对设计婴儿性别，其原因是什么？______________________________。
【答案】（1）A
（2）有丝分裂
（3）囊胚
（4）内
（5）胚胎分割移植 相同
（6）破坏了人类正常的性别比例，违反了伦理道德
考点4 单克隆抗体的制备
1．单克隆抗体的制备
（1）血清抗体与单克隆抗体
名称
产生
特点
血清抗体
由浆细胞分泌
一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差
单克隆抗体
由杂交瘤细胞分泌
特异性强，灵敏度高，能大量制备
（2）单克隆抗体的制备
（3）制备单克隆抗体过程中的两次筛选
筛选的对象
方法
第一次筛选
杂交瘤细胞
利用特定的选择培养基：在该培养基中只有杂交瘤细胞存活，其他细胞（未融合的B细胞和瘤细胞、融合后的B—B细胞和瘤—瘤细胞）均不能成活
第二次筛选
能产生特异性抗体的杂交瘤细胞
利用特定抗原通过抗原—抗体杂交技术确认抗体性质
【特别提醒】
（1）相比植物体细胞杂交，动物细胞融合特有的诱导方式是用灭活的病毒处理，其他物理化学诱导融合的手段与植物体细胞杂交过程中原生质体诱导融合方法相同。
（2）获取单克隆抗体的场所
①若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从培养液中提取。
②若在小鼠或其他动物腹腔中培养，则从腹水中提取。
调研1 如图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计生产破伤风杆菌抗体的实验方案。请据图回答问题：
（1）该方案能达到预期效果吗？________。原因是_________________________。
（2）图中②为________过程，常用________作为诱导剂。该细胞继承了________，因此，不仅能
________，还有________的本领。
（3）图中③进行细胞培养的目的是__________________________。
（4）在制备破伤风杆菌抗体的过程中，进行了两次筛选，其目的不同，②是通过筛选获得
________________________________________________________________________，④是通过筛选获得
_______________________________。
（5）图中⑤的培养能获得________细胞，便于大规模培养。
（6）破伤风杆菌的抗体最终可从________________和________________中提取。
（7）该方案的目的是_______________________________________。
【答案】（1）不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞
（2）细胞融合和筛选 灭活的病毒 双亲细胞的遗传物质 无限增殖 产生特异性抗体
（3）在体外条件下使杂交瘤细胞大量增殖
（4）杂交瘤细胞 产生破伤风杆菌抗体的杂交瘤细胞
（5）足够量杂交瘤
（6）细胞培养液 小鼠腹水
（7）制备单克隆抗体
1．奥地利科学家已经使用干细胞在实验室中培育出微型人脑。部分培育过程为科研人员选取人类胚胎干细胞或成人皮肤细胞，将其培育成神经外胚层，再放入特制的凝胶中，引导组织进一步生长。请回答下列有关胚胎工程的问题：
（1）哺乳动物的胚胎干细胞又叫ES或EK细胞，是从________或________中分离出来的一类细胞。这种细胞在形态上表现为体积小、________大、核仁明显；在功能上，具有________，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。
（2）利用胚胎干细胞可治疗肝衰竭，实现此过程的最重要的原因是________________（填“细胞分裂”或“细胞分化”）。
（3）胚胎工程的应用除上述的胚胎干细胞之外，还包括________和胚胎分割。其中胚胎分割要选取发育良好，形态正常的________；对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要将________，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
（4）在胚胎分割过程中，做DNA分析性别鉴定时，一般要选取________细胞。通过胚胎分割产生的后代的性别________（填“相同”或“不同”）。
【答案】（1）早期胚胎 原始性腺 细胞核 发育的全能性
（2）细胞分化
（3）胚胎移植 桑椹胚或囊胚 内细胞团均等分割
（4）滋养层 相同
2．哺乳动物单倍体胚胎干细胞技术是遗传学研究的新手段，该项技术为研究隐性基因功能提供了理想的细胞模型。下图表示研究人员利用小鼠获取单倍体胚胎干细胞的方法。请分析回答。
（1）方法一中，研究人员需对实验小鼠注射________，使其________，从而获得更多的卵母细胞。用SrCl2溶液处理、激活卵母细胞，在体外选用特制的培养液培养至________期，从内细胞团中分离、筛选出胚胎干细胞。采用这种方法获得的单倍体胚胎干细胞称为孤雌单倍体胚胎干细胞。
（2）采用方法二可获得孤雄单倍体胚胎干细胞。受精阶段，防止多精入卵的第一道屏障是________。研究人员用特定方法去除细胞M中的________原核，再对处理后的细胞进行进一步的培养、分离和筛选。
（3）研究发现，小鼠单倍体胚胎干细胞存在自发二倍体化的现象。为此，可以通过测定并分析细胞内DNA分子的含量，或利用显微镜观察处于________（写出分裂类型及时期）细胞的染色体数目进行确定。
【答案】（1）促性腺激素 超数排卵 囊胚
（2）透明带反应 雌
（3）有丝分裂中期
【解析】（1）超数排卵利用的激素是促性腺激素。胚胎发育到囊胚阶段出现细胞分化，形成内细胞团。（2）防止多精入卵的第一道屏障是透明带反应。将受精卵中的雌原核去掉，保留雄原核，经培育可以得到孤雄单倍体胚胎干细胞。（3）观察染色体形态、计数染色体数目的最佳时期是细胞有丝分裂中期，因为此时染色体螺旋化程度最高且着丝点整齐排列在赤道板上。
3．2013年12月20日，美国《细胞》杂志发布，中国科研团队在国际上率先完成了“单个卵细胞的高精度基因组测序”，该技术或可将试管婴儿的活产成功率从30%提至60%，并检测与遗传疾病有关的DNA序列变异，降低帕金森氏综合征等疾病遗传到下一代的风险。
（1）“试管婴儿”技术与克隆人本质的区别是前者为________生殖方式。
（2）获得“试管婴儿”需要的胚胎工程技术有________________、________和胚胎移植等。胚胎移植通常要将胚胎培养到________阶段。理论上要得到“同卵双胞胎”，采用的技术是________。
（3）在医学上可用____________细胞来治疗帕金森氏综合征。该细胞是由________________中分离出来的一类细胞。
（4）现在大多数人反对设计试管婴儿，其原因是______________________________________。
【答案】（1）有性
（2）早期胚胎培养 体外受精 桑椹胚或囊胚 胚胎分割
（3）胚胎干（ES、EK） 早期胚胎或原始性腺
（4）对生命不尊重，违反伦理道德
4．电影中，“蜘蛛侠”能产生高强度的蜘蛛丝，现实中的基因工程也创造出了“蜘蛛羊”，该羊的乳汁中含有蛛丝蛋白，高强度的蛛丝蛋白可用于许多重要的特种工业领域。请回答：
（1）实验中，通常用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞在功能上具有________特征。这种细胞一般可以从哺乳动物的________或________中分离出来。
（2）在培养重组细胞时，为了维持不分化的状态，在培养液中要加入________。为防止杂菌污染，可以在细胞培养液中添加一定量的________。
（3）胚胎移植时，通常将早期胚胎移植到同种且________与供体相同的动物体内，受体对外来胚胎基本上不发生________。正常发育后产出“蜘蛛羊”，这种生殖方式为________。若需要一次产生两头转基因“蜘蛛羊”，可将________阶段的胚胎进行分割。
（4）科学家为保证乳汁中有蛛丝蛋白，应该用________技术，先检测蛛丝蛋白基因是否整合到了受体羊的染色体上。
【答案】（1）发育的全能性 原始性腺 早期胚胎
（2）抑制因子 抗生素
（3）生理状态 免疫排斥反应 无性生殖 囊胚或桑椹胚
（4）DNA分子杂交
5．下图为单克隆抗体制备流程示意图。
（1）图中①过程是________________。对动物细胞来说，②过程独有的方法是________。③过程的目的是________________。④过程的目的是获得________________。
（2）若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的________中使其增殖。
（3）单克隆抗体与传统抗体相比，其优点是________________________。
【答案】（1）向老鼠中注射特定抗原 灭活的病毒处理 筛选杂交瘤细胞 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞
（2）腹水
（3）特异性强，灵敏度高，可大量制备
【解析】（1）②过程表示诱导浆细胞与骨髓瘤细胞融合，动物细胞特有的诱导融合方法是用灭活的病毒处理。单克隆抗体制备过程中需两步筛选：③是利用选择培养基筛选杂交瘤细胞，④过程是利用克隆化培养和抗体检测筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。（2）杂交瘤细胞可在小鼠腹水中进行体内培养。
6．我国首例“第三代试管婴儿”在上海诞生，这是我国生殖辅助技术领域的一个里程碑。请回答下列问题：
（1）第一代试管婴儿针对女性输卵管堵塞患者，用穿刺针将________（填细胞名称）取出，采集的细胞需
要在体外培养成熟，才能与________受精。第二代试管婴儿则针对男性少、弱、畸形精子症患者，通过
________技术将精子注入卵母细胞内帮助受精。第三代试管婴儿要在胚胎移植前
______________________，从而帮助更多的家庭生出健康的宝宝。
（2）母体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________，这为胚胎在母体内存活提供了可能。
（3）现在我国大多数人反对设计试管婴儿性别，原因是________________________，在进行试管婴儿设计时一定不能违反________。
【答案】（1）卵母细胞 获能的精子 显微注射 对胚胎进行遗传学诊断
（2）免疫排斥反应
（3）可能破坏人类正常的性别比例 人类伦理道德
7．人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。
（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从已处死的雌鼠________中获取。
（2）图中的高血压相关基因作为________，质粒作为________，二者需用________切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有____________有关。
（3）子代大鼠如果________________和________，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是________、早期胚胎培养和胚胎移植。
【答案】（1）卵巢
（2）目的基因 载体 同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶） 限制酶切割位点
（3）检测到体内有相关蛋白 出现高血压
（4）体外受精
8．下图为利用生物技术生产单克隆抗体和经体外受精培育优质奶牛的过程。请回答下列问题：
（1）图Ⅰ所示制备单克隆抗体的过程，包括__________________和动物细胞培养两个过程，在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用________处理，使其分散成单个细胞，制备成细胞悬液。
（2）A细胞的特点是____________________________，经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行__________________和抗体检测，经多次筛选就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，最后进行体内或体外培养。
（3）单克隆抗体与常规抗体相比，具有______________的特点。
（4）图Ⅱ所示过程为优质奶牛的培育过程，该过程需要进行胚胎移植，移植后的胚胎能在受体子宫中存活，其生理基础是_______________________________。
（5）若要同时获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可对图Ⅱ所示囊胚阶段的胚胎进行________，操作过程需要特别注意的问题是__________________________，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
【答案】（1）动物细胞融合 胰蛋白酶
（2）既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体 克隆化培养
（3）特异性强、灵敏度高，并可以大量制备
（4）受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应
（5）胚胎分割移植（或胚胎分割） 将内细胞团进行均等分割
9．（2017新课标III·38） [生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。
回答下列问题：
（1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列
（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是
_____________________________________。
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引
物等，还加入了序列甲作为_____________________，加入了________________作为合成DNA的原料。
（3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。
①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是__________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是__________________。
②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。
【答案】（1）编码乙的DNA序列起始端无ATG，转录出的mRNA无起始密码子
（2）模板 dNTP
（3）①进行细胞传代培养 维持培养液是的pH ②C
【考点定位】基因工程、细胞工程
【名师点睛】解题过程中，没有联想到“动物细胞具有贴壁生长以及接触抑制的特点”而误认为（3）①小题中细胞不能继续增殖的原因是缺乏营养。
10．（2016全国卷Ⅱ·40）下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物（二倍体）的流程。
回答下列问题：
（1）图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为________。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用________的方法。②代表的过程是________。
（2）经过多次传代后，供体细胞中________的稳定性会降低。因此，选材时必须关注传代次数。
（3）若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是___________________________________________________________________________。
（4）与克隆羊“多莉（利）”培育成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了____________________。
【答案】（1）XX或XY 显微操作 胚胎移植
（2）遗传物质
（3）卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响
（4）动物已分化体细胞的细胞核具有全能性

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