资源简介

（满分60分，40分钟完成）
班级 姓名 总分
一、单选题（30分，每题3分）
1. 下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是（ ）
A. 在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落
B. 在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒
C. 土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌
D. 在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液
【答案】A

2. 分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（ ）
①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖
⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐
A. ①③⑤⑦ B. ①③⑤⑧
C. ②④⑥⑧ D. ①④⑥⑦
【答案】B
【解析】要分离分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，①正确、②错误；分离土壤中分解尿素的细菌用固体培养基需加入琼脂，③正确，④错误；培养基中需要加碳源即葡萄糖，⑤正确，⑥错误；不需要氮源，故不加硝酸盐，⑦错误，⑧正确，因此B正确。
3.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )
A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂
B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂
C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂
D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
【答案】A
【解析】酚红指示剂只能用来检测尿素分解菌，故A正确；二苯胺试剂常用来进行DNA的鉴定，故B错误；苏丹Ⅲ试剂可以用来检测脂肪，故C错误；双缩脲试剂可以用来检测蛋白质，故D错误。
4.下列就“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的有关叙述，不正确的是（ ）
A.经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置
B.同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数
C.在稀释度足够高时，所形成的单个菌落中所有细胞的遗传信息必定相同
D.在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长说明培养基没有被杂菌污染
【答案】C

5.在以尿素作为唯一氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出( )
A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
B．分解尿素的细菌、大肠杆菌、放线菌
C．分解尿素的细菌、霉菌、放线菌
D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
【答案】C
【解析】乳酸菌属于异养厌氧微生物，不能在缺氮培养基上生存；金黄色葡萄球菌属于细菌，不能在添加青霉素的选择培养基上生存，A错误；在缺乏氮源的选择培养基上可以筛选分离固氮微生物，大肠杆菌不能在添加青霉素的选择培养基上生存，B错误；在缺乏氮源的选择培养基上可以筛选分离固氮微生物，在添加青霉素的选择培养基上可以筛选分离真菌（如霉菌），加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长可以筛选分离放线菌，C正确；在缺乏氮源的选择培养基上可以筛选分离固氮微生物，金黄色葡萄球菌属于细菌，不能在添加青霉素的选择培养基上生存，D错误。
6.欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（ ）
A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释
B．用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌
C．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板
D．可将未接种的培养基在相同条件下培养作为空白对照
【答案】B
【解析】要土壤中分离出能分解尿素的细菌，可先将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解纤维素的细菌，用加入酚红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌，B错误；同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，计数时取其平均值，C正确；可将未接种的培养基在相同条件下培养作为空白对照，D正确。
7. 关于统计微生物数目，说法错误的是（ ）
A. 因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离
B. 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释度范围不同
C. 只有得到了3个或3个以上菌落数目在30?300的平板，才说明系列稀释操作成功
D. 每次统计菌落数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果
【答案】C

8.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。产生A同学结果的原因可能有（ ）
①土样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照
A.①②③ B.②③④ C.①③④ D.①②③④
【答案】A
【解析】A同学获得的菌落远大于其他同学，可能是由于所取的土样不同，也可能操作过程被污染（培养基灭菌不彻底或操作过程没有保证无菌操作都会导致菌落数偏多），还可能是操作失误，比如培养基的稀释倍数搞错了，或培养基中混入了其他含氮物质等，但与是否设置对照无关，故A项正确，B、C、D项错误。
9.下列关于微生物的分离和培养的叙述中，正确的是( )
A.进行微生物培养前，需对培养瓶进行消毒处理
B.对细菌的分离和计数可用平板划线法和稀释涂布平板法
C.获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染
D.用含刚果红的尿素培养基筛选鉴别出能分解尿素的菌株
【答案】C
【解析】选项A，应对培养瓶进行灭菌处理。选项B，对细菌进行计数时不能用平板划线法。选项D，用含酚红的尿素培养基筛选和鉴别出分解尿素的菌株。
10. 下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是（ ）

A. 3号试管的稀释倍数为103倍
B. 4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号试管的10倍
C. 5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1．7×109个
D. 该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高
【答案】B

二、非选择题（30分）
11.（14分）在肉牛产业中，常在饲料中加入一定量的尿素，因其有瘤胃，在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物以尿素作为唯一氮源。某同学设计了如下实验，对能分解尿素的细菌进行分离和计数。

(1)图中弧线箭头上“?”的具体操作是_______________________________________。
(2)进行培养基配制和灭菌时,灭菌与调节pH的先后顺序是___________________；纯化菌种时为了得到单一菌落,常采用的接种方法是_______________________________。
(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_______________。培养后,若出现_________色,说明其中含有能够分解尿素的细菌。
(4)在实验中,当菌落数目稳定时，应选取____________方法计数；研究者每隔24小时统计一次菌落数目,并选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止___________。
【答案】(1) 挑出菌落 (2)先调节pH,后灭菌 平板划线法、稀释涂布平板法(3) 酚红指示剂 红 (4) 平板计数 因培养时间不足导致遗漏细菌菌落数目

12.（16分）下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，回答有关问题：

（1）图中选择培养基应以尿素为唯一____________；鉴别培养基还需添加____________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，由于尿素被分解成的____________使培养基的碱性增强，pH升高，其菌落周围的指示剂将变成____________色。
（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是 ____________，每克土壤样品中的细菌数量为____________×108个。
（3）与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_________，其原因是________________。
【答案】 （1） 氮源 酚红 氨 红 （2）稀释涂布平板法 1.75 （3） 低 由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏低




1. 下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是（ ）
A. 微生物培养前，需对培养基进行消毒
B. 分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度
C. 测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法
D. 分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源
【答案】A

2. 要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种在（ ）
A. 加入氮源和杀菌剂的培养基上
B. 不含氮源和杀菌剂的培养基上
C. 加入氮源，不加杀菌剂的培养基上
D. 不加入氮源和不加杀菌剂的培养基上
【答案】B
【解析】自身固氮菌可以利用空气中的氮，培养基中不需要加入氮源，也不能加入杀菌剂。
3.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( )
①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑦ B．①③⑤⑧ C．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦
【答案】B
【解析】要分离分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，故1需要2错误，故C错误。需要用固体培养基必须加入琼脂，故3正确，4错误，D错误。需要加碳源即葡萄糖，故5正确，6错误。不需要氮源，故不需要甲硝酸眼，故7错误，8正确，因此A错误，B正确。
4.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的（ ）
A.将土壤用无菌水稀释，制备10﹣3～1O﹣5土壤稀释液
B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上
C.用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌
D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株
【答案】C
【解析】A、将土壤用无菌水稀释，然后经过系列稀释，制备10﹣3～1O﹣5土壤稀释液；A正确．
B、将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上；B正确．
C、用加入酚红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌，刚果红指示剂是用于分离分解纤维素的菌；C错误．
D、分解尿素的菌在分解尿素时产生氨气，氨气能使酚红指示剂显红色，从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株；D正确．
5.下图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该实验相关内容的叙述中不正确的是（ ）

A．实验中所用的培养基①②③④均属于选择培养基
B．通过图中I、Ⅱ过程目的是增加目标微生物的数量
C．统计⑤处培养基中的菌落数并不一定代表接种到④上的活菌数
D．在⑤处培养基上能生长的一定是能降解对羟基苯甲酸的微生物
【答案】D

6.下列叙述不正确的是 ( )
A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离
B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同
C．如果得到了多个菌落数目在30—300的平板，则说明稀释操作比较成功
D．牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显少于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落
【答案】D
【解析】牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落，D错误 。
7.选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为( )
A.伊红美蓝培养基、含青霉素培养基
B.含青霉素培养基、含氨的无机培养基
C.含氨的无机培养基、含青霉素培养基
D.含青霉素培养基、伊红美蓝培养基
【答案】B

8. 在农田土壤的表层自生固氮菌较多．用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是（ ）
①加抗生素 ②不加抗生素 ③加氮素 ④不加氮素 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦37℃恒温箱中培养 ⑧28～30℃恒温箱中培养．
A. ①③⑤⑦ B. ②④⑥⑧ C. ②④⑤⑧ D. ②④⑥⑦
【答案】C
【解析】自生固氮菌是异养菌，生长繁殖需要有机碳源；自生固氮菌能利用空气中的氮气，培养基中不加氮源，固氮菌能生长繁殖，不能固氮的菌不能生长繁殖，；自生固氮菌的生长繁殖的最适宜温度是28～30℃；自生固氮菌对青霉素敏感，培养基中不能加青霉素．所以如果从土壤浸出液中分离出自生固氮菌对培养基的要求是②不加抗生素、④不加氮素、⑤加葡萄糖、⑧28～30℃恒温箱中培养．
9.下面从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是( )
①土壤取样
②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1 mL进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度
A.①→②→③→④ B.①→③→②→④
C.①→②→④→③ D.①→④→②→③
【答案】C
【解析】在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。
10. 测定土壤中细菌的数量一般选104、105和106倍的稀释液进行平板培养；而真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是（ ）
A．细菌个体小，真菌个体大
B．细菌易稀释，真菌不易稀释
C．细菌在土壤中的含量比真菌高
D．随机的，没有原因
【答案】C

11. 生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，为从土壤中微生物筛选到能分解尿素的细菌。培养基成分如下表所示，实验步骤如图1所示。回答下列问题
KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
葡萄糖
尿素
琼脂
1.4 g
2.1 g
0.2 g
10 g
1 g
15 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL，调pH为7.2
（1）分解尿素的细菌能分泌________酶，能将尿素分解成__________。
（2）培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自________和_________。为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，在培养时应采用的操作方法是_______________________。

（3）图中将细菌转到固体培养基上时，应采用________法接种以获得单个菌落。初步筛选出来的菌种还需要用生化的方法作进一步的鉴定，鉴定方法是检测初步筛选目的菌种培养基的pH，若pH_______（降低/不变/升高），说明该菌种能够分解尿素。
（4）A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。有同学认为造成A同学实验结果的原因是培养基被杂菌污染。为了证实该说法，则进一步实验的操作思路是________________ 。
【答案】(1) 脲 氨 （2）尿素 葡萄糖 振荡培养 （3）稀释涂布 升高 （4）将A同学的培养基在不加土样的情况下，设置空白对照

12. 牛等牲畜的瘤胃中生活着许多以尿素作唯一氮源的微生物。某同学从刚宰杀的牛的瘤胃中取样,获得菌液,并对能分解尿素的细菌进行分离、计数和鉴定。回答下列问题：
（1）为从混杂的菌液中分离菌种，常用 和 方法，在固体培养基上接种，使细菌在固体培养基上形成单个 ，从而获得纯菌株。
（2）为了测定细菌含量，将稀释度为103与104的菌液均按O．lmL的用量，各接种3个平板,在无氧条件培养一段时间后，103的稀释度下平板上长出的菌落数分别为45、56、37，而104的稀释度下平板上长出的菌落数分别为26、14、17，则每升菌液的活菌数约为 。与活菌的实际数目相比，该方法测得的结果往往偏低，主要原因是 。
（3）为了鉴定该菌种,在以尿素为唯一氮源的培养基需添加 作指示剂，目的菌在生长过程中会产生 酶，催化尿素分解并产生NH3,使pH升高,指示剂变红。
【答案】（1）平板划线法 稀释涂布平板法 菌落（2）4．6×108个 两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（3）酚红 腺



一、筛选菌株
【知识点讲解】
1.实验室微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
2.土壤中分解尿素的细菌的分离原理
土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
①选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源
②鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素
3.选择培养基
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。加入青霉素的培养基：细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物。
【典型例题】
用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )
A.未接种的选择培养基
B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C.接种了的选择培养基
D.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基
【答案】D

【变式训练】
选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为( )
A.伊红美蓝培养基、含青霉素培养基
B.含青霉素培养基、含氨的无机培养基
C.含氨的无机培养基、含青霉素培养基
D.含青霉素培养基、伊红美蓝培养基
【答案】B 学科*网
【解析】酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量，把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。学科*网
二、统计菌落数目的方法
【知识点讲解】
（1）显微镜直接计数法：
①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
②方法：用计数板计数。
③缺点：不能区分死菌与活菌。
（2）间接计数法(活菌计数法)：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
③操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
【典型例题】
用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是 ( )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238
C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233
【答案】D

【变式训练】
某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）（ ）
A.2.34×108 B.2.34×109 C.234 D.23.4
【答案】B
【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。学科*网
三、实验设计
【知识点讲解】
1.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
2.制备培养基
牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，判断选择培养基是否起到选择作用。
3.样品稀释、取样涂布
因为土壤中各类微生物的数量是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
注意：由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。
4.微生物的培养、观察并记录结果
将涂布好的培养皿放在30℃下培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。
不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间
5.细菌的计数
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。
【典型例题】
下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是（ ）
A. 分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气
B. 将实验组和对照组平板倒置，25℃恒温培养24～48小时
C. 统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在300以上的平板进行计数
D. 用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红
【答案】D

【变式训练】
下列关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，不正确的是( )
A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高压蒸汽灭菌后倒平板
B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL涂布到不同平板上培养
C.将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时
D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数
【答案】D



【预习目标】
了解有关选择培养基的基础知识。
【知识梳理】
（一）筛选菌株
1.实验室微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
2.选择培养基
（1）概念：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
（2）作用：加入青霉素的培养基：细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。
不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物。
（二）统计菌落数目
1.显微镜直接计数
（1）原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
（2）做法：每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
（3）优缺点：
优点：能准确统计微生物的实际数目。
缺点：不能区分死菌和活菌。
2.间接计数（活菌计数法）
（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
（2）计数：
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。
计算公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
（二）实验设计
土壤中分解尿素的细菌的分离与记数步骤：1.土壤取样；2.制备培养基；
3.样品稀释、取样涂布；4.微生物的培养、观察并记录结果；5.细菌的计数。
（三）操作提示
1.无菌操作
（1）取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。
（2）应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。
（3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。
2.做好标记
注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。
3.规划时间
提高效率，在操作时更加有条不紊。
【课前热身】
1．下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是（ ）
A．在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落
B．在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒
C．土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌
D．在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液
【答案】A

2．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（ ）
①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑦ B．①③⑤⑧
C．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦
【答案】B
【解析】要分离分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，①正确、②错误；分离土壤中分解尿素的细菌用固体培养基需加入琼脂，③正确，④错误；培养基中需要加碳源即葡萄糖，⑤正确，⑥错误；不需要氮源，故不加硝酸盐，⑦错误，⑧正确，因此B正确。学科*网
3.稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌时使用的涂布器应保存在体积分数为70%的酒精中,取出后又要放在酒精灯火焰上引燃,这两步分别属于什么技术?（ ）
A．灭菌、灭菌 B．消毒、消毒
C．灭菌、消毒 D．消毒、灭菌
【答案】D
【解析】在稀释涂布平板法中，将涂布器保存在体积分数为70%的酒精中的目的是为了消毒；将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8～10s再用，目的是为了灭菌，故选D。学科*网
4.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌,下列实验操作不正确的是（ ）
A．将土壤用无菌水稀释,制备103～105稀释倍数的土壤稀释液
B．将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上
C．用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌
D．从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株
【答案】C

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