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（满分60分，40分钟完成）
班级 姓名 总分
一、单选题（30分，每题3分）
1. 以下有关生物技术实践的叙述中，不正确的是（ ）
A. 除活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法
B. 在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合生物与环境相适应的生物学观点
C. 在酿酒生产上，常向发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌合成蛋白质和核酸
D. 不能用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目
【答案】D
2. 某校生物兴趣小组研究发现，秸秆还田的过程中施加外源纤维素酶能起到较好的效果。下列有关叙述错误的是：（ ）
A. 纤维素酶是一种复合酶，其中纤维二糖酶能够将纤维素分解为纤维二糖
B. 纤维素分解菌主要分布于富含纤维素的环境中，纤维素分解菌常用刚果红染液进行鉴定
C. 菌落周围的透明圈大小可以反应纤维素分解菌产生的酶的多少
D. 为了确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产生纤维素酶的实验
【答案】A
【解析】纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三种，其中能够将纤维二糖分解为葡萄糖的是葡萄糖苷酶，A错误；纤维素分解菌主要分布于富含纤维素的环境中，刚果红染色体可用于鉴定纤维素分解菌，B正确；菌落周围的透明圈大小可以反应纤维素分解菌产生的酶的多少，纤维素酶含量越多，透明圈越大，C正确；纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定，D正确。
3.下列关于纤维素分解菌分离实验的说法不正确的是（ ）
A．通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌
B．当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后，培养基中会出现透明圈
C．该实验用的培养基为选择培养基
D．在用刚果红染色时只能先培养微生物再加入刚果红，不能在倒平板时加入
【答案】D
4.分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是（ ）
A．经选择培养后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
B．选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少
C．经稀释培养后，用刚果红染色
D．此实验中需设置对照组
【答案】A
【解析】经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上， A错；选择培养可省略，B正确；经稀释培养后，用刚果红染色，C正确；设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物，D正确。
5.为了解土壤微生物是否能分解农药，并尽快得出实验结论，有人用“敌草隆”（一种除草剂）进行了实验，取等量砂土分装于相同的两容器中，a组高压灭菌，b组不灭菌，下列有关事项肯定错误的是（ ）
A.a组为实验组，b组为对照组
B.向a、b中喷入等量敌草隆，再置于同一温箱中培养相同时间
C.检测敌草隆消失的情况，预计a组敌草隆含量不变，b组敌草隆全部分解
D.只用砂土，实验效果不如几种典型土壤混合后的好
【答案】C
【解析】A、由题意可知，a组高压灭菌，没有微生物，b组不灭菌，存在土壤微生物，所以a组为实验组，b组为对照组，A正确；
B、由题意可知，实验的自变量的有无土壤微生物，敌草隆的使用量、培养条件是无关变量，应保持一致且适宜，所以向a、b中喷入等量敌草隆，再置于同一温箱中培养相同时间，B正确；
C、b组的敌草隆不可能全部分解，C错误；
D、不同的土壤微生物的种类不同，只用砂土，实验效果不如几种典型土壤混合后的好，D正确．
6.欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（ ）
A.将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释
B.同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板
C.可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照
D.用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌
【答案】D
【解析】A、为防止土壤浸出液浓度过高，不能获得单菌落，要将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；
B、同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，B正确；
C、可以将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以判断培养基灭菌是否彻底，C正确；
D、可筛选出分解尿素的细菌的培养基是以尿素为唯一氮源的选择培养基，D错误．
7.下列关于纤维素分解菌分离实验的说法不正确的是(　　)
A．通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌
B．从土壤中分离含量较多的微生物时，选择培养可以省略
C．该实验用到选择和鉴别培养基
D．在用刚果红染色法中，若将微生物培养在事先加入刚果红的培养基上，出现透明圈的菌落即所需菌种
【答案】D
8.利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇，从而减少了对石油资源的依赖，下图为生产燃料乙醇的简要流程，据图分析错误的一项是 (　　)
A．要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样
B．图中②过程常用的微生物B是酵母菌
C．微生物A和微生物B可利用的碳源相同
D．可用纤维素酶制剂代替微生物A起作用
【答案】C
9.通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是(　　)
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105倍的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上
C．将培养皿倒置，37℃恒温培养24～48小时
D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数
【答案】D
【解析】检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行计数。
10. 下图甲为纤维单胞菌（能产生纤维素酶）的获取过程。下列有关叙述错误的是（ ）
A. ①②③④培养基都应以纤维素为唯一碳源
B. 图中所用培养基矢菌常用的方法是高压蒸汽灭菌
C. ④所用的接种方法可对培养的微生物进行计数
D. 可用刚果红染料鉴定，看菌落周围是否出现透明圈
【答案】C
【解析】培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用该物质的微生物才能生长繁殖，A项正确；对培养基的灭菌利用的是高压蒸汽灭菌法，对接种环采用火焰灼烧法进行灭菌，B项正确；④的接种方法是平板划线法，利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、分离，但是不能对微生物进行计数，计数一般采用稀释涂布平板法，C项错误；当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌，D项正确。
二、非选择题（30分，每格2分）
11.（14分）我国现己成为世界上第三大生物乙醇生产国和应用国。根据原料不同，生物乙醇可分为以淀粉类物质为原料的第1代生物乙醇和以秸秆等纤维素为原料的第2代生物乙醇。两者的生产过程都需要多种微生物参与，且在较高温度下反应能提高产率。
（1）生产第1代生物乙醇时，首先利用微生物或酶将淀粉材料彻底水解为 ，才能利用。酵母菌在 条件下将其转化为乙醇。
（2）生产第2代生物乙醇时需要纤维素分解菌，为此，小明同学设计了两种培养基。甲培养基含纤维素粉5g、酵母膏0．5g、水解酪素0．5g、无机盐适量；乙培养基含CMC-NalOg、 酵母膏1g、琼脂15g、土豆汁]00mL、无机盐适量。
①在上述 （填“甲”或“乙”）种培养基上能够筛选出纤维素分解菌的单菌落，另外一种培养基的作用是 。
②为防止杂菌污染，除要对培养基进行 灭菌，还需要对操作者的双手进行清洁和 。
③筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供 条件。
【答案】（1）葡萄糖 无氧（2）①乙 增加纤维素分解菌的浓度 ②高压蒸汽 消毒 ③高温
12.（16分）利用木纤维转化为新能源——乙醇的原理是微生物能产生分解纤维素的酶。下图是工业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工作流程，回答相关问题。
(1)图中①所需的微生物若来自土壤，要统计该活菌数目，宜采用_________________ 法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积统计平板上的________________，就能推测出样品中的活菌数。
(2)分解木纤维的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种成分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶的作用是将______________________ 分解成___________________。
(3)④接种的微生物是________________ ，为降低乙醇生产成本，可利用_____________技术使酶能够重复使用。
(4)在微生物的实验室培养过程中，对培养基灭菌常用的方法是__________ 。为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿______________培养。
【答案】 (1) 稀释涂布平板 菌落数 (2) 纤维二糖 葡萄糖 (3) 酵母菌 固定化酶（或固定化细胞） (4)高压蒸汽灭菌 倒置


1. 利用农作物秸秆为原料可生产乙醇，生产过程中可采用微生物将秸秆水解或用酶水解，其主要技术流程如下图所示，下列相关说法错误的是( )
A. 酒精发酵前需对培养基进行高压蒸汽灭菌
B. 过程①加入的是葡萄糖苷酶
C. 酒精发酵接种的酵母菌需在无氧条件下发酵
D. 可用刚果红染色法筛选过程①所需的纤维素分解菌
【答案】B
2. 下列关于刚果红染色法的说法中，正确的是（ ）
A. 先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，不需用氯化钠溶液洗去浮色
B. 倒平板时就加入刚果红，可在培养皿中先加入1mlCR溶液后加入100ml培养基
C. 纤维素分解菌菌落周围出现刚果红
D. 倒平板时就加入刚果红，长期培养刚果红有可能被其他微生物分解形成透明圈
【答案】D
【解析】刚果红可以在菌落形成后加入，需要洗去浮色，A错误；可以将刚果红与培养基分别灭菌，按一定的比例将刚果红加入到培养基中，然后倒平板，B错误；刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，C错误；到平板时就加入刚果红，长期培养刚果红有可能被其他微生物分解形成透明圈，D正确。
3.筛选出纤维素分解菌后还需要用下列哪一实验来确定（ ）
A．发酵产纤维素
B．发酵产纤维素酶
C．纤维素酶 分解滤纸
D．纤维素分解产生葡萄糖
【答案】B
【解析】筛选出纤维素分解菌后还需要用发酵产纤维素酶来确定，通过测定酶的产生来确定筛选是否成功，B项正确。
4.下列说法正确的是（ ）
A.从落叶丰富的土壤中筛选能分解纤维索的细菌
B.家庭利用酵母菌制作腐乳
C.用红色西瓜汁作还原糖鉴定的替代材料
D.观察线粒体时，利用甲甚绿染液将线粒体染成绿色，再用显微镜观察
【答案】A
5.下面从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是(　　)
①土壤取样
②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1 mL进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度
A.①→②→③→④ B.①→③→②→④
C.①→②→④→③ D.①→④→②→③
【答案】C
【解析】在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。C正确。
6.下列有关培养基和菌种鉴定的叙述不正确的是 (　　)
A．植物组织培养常用的是固体培养基
B．可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型
C．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌
D．在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌
【答案】D
【解析】在只含有尿素作为氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌。
7.下列有关纤维素分解菌分离实验的说法中，不正确的是（ ）
A．通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌
B．当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后，培养基中会出现透明圈
C．该实验用的培养基包括选择培养基
D．在用刚果红染色时只能先培养微生物再加入刚果红，不能在倒平板时加入
【答案】D
8.下列不属于纤维素酶组分的是（ ）
A．C1酶 B．Cx酶
C．葡萄糖苷酶 D．半乳糖苷酶
【答案】D
【解析】纤维素酶是一种复合酶，主要包括：C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶，故D错误。
9.原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃．土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈．为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验．下列有关实验的叙述，不正确的是（ ）
A．应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用
B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择性培养基
C．将土壤稀释液灭菌后接种到选择性培养基上
D．在选择性培养基上能形成分解圈的即为所需菌种
【答案】C
【解析】A、筛选能够利用多环芳烃为碳源的菌种，则在被原油污染的土壤中应该含有，所以配置来源于被原油污染的土壤稀释液，A正确；
B、配置选择性培养基，该培养基与通用培养基成分的主要区别是以原油（多环芳烃）为唯一碳源，B正确；
C、在无菌环境下，将土壤稀释液接种到选择培养上，将土壤稀释液灭菌后会杀死原有菌种，C错误；
D、题干有个信息“有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈”，所在选择性培养基上能形成分解圈的即为所需菌种，D正确．
10. 下图是从土壤中分离纤维素分解菌并测定纤维素酶活性的流程，相关叙述不正确的是（ ）
A. 步驟①的目的是对样品进行稀释
B. Ⅰ培养基中的唯一碳源是纤维素
C. 可根据Ⅱ培养基中透明圈的大小来筛选目的菌
D. 可采用纤维素酶分解滤纸所产生的葡萄糖量对其活性进行测定
【答案】A
11.下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：
成分
含量
成分
含量
NaNO3
3 g
FeSO4
0．01 g
K2HPO4
1 g
C6H12O6
30 g
琼脂
15 g
H2O
1 000ml
MgSO4·7H2O
0．5 g
青霉素
0．1万单位
（1）依用途划分，该培养基属于 培养基，能在此培养基繁殖的微生物具有的特点是 。
（2）根据培养基原料，所培养微生物的同化作用的类型是 。培养基中的碳源是 。
（3）若用该培养液培养纤维素分解菌，除了要去除一些成分外，还应加入的物质是 ，在筛选纤维素分解菌过程中常用 法。
【答案】（1）选择（培养基）；对青霉素有抗性（说明：意思相近即可）。（2）异养型。 C6H12O6（或者葡萄糖）。（3）纤维素（粉）； 刚果红染色（法）
12. 马、牛羊的食物主要是草茎类，其中还有大量的纤维素。它们胃内的微生物，在帮助消化和利用植物纤维素方面起了决定性的作用，土壤中也存在着分解纤维素的微生物。请根据所学的知识，回答下列问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，主要包括_______、_______、__________。
（2）在培养基中加入刚果红染液可以鉴别纤维素分解菌，其原因是______________。
（3）分离土壤中纤维素分解菌用到的方法是______________。
①稀释倒平板法 ②涂布平板法 ③单细胞挑取法 ④选择培养分离
A.①② B.②③④ C.②③ D.①③④
（4）在微生物的分离与培养的过程中，为了防止杂菌的污染，需要进行严格的无菌操作，如接种环和接种针需要__________，培养基需要__________等。而接种针或接种环操作时经火焰灭菌后需要在培养基上接触冷却后才能挑取菌落。
（5）下表为鉴别纤维素分解菌的培养基配方，请判断该培养基为___________培养基，酵母膏和土豆汁的作用是________________。
鉴别纤维素分解菌的培养基配方
CMC-Na
5?10g
KH2PO4
0. 25g
酵母膏
1g
琼脂
15g
土豆汁
100mL
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。
【答案】 (1) C1酶 CX酶 葡萄糖苷酶 (2) 刚果红染液可以与纤维素结合形成红色的复合物，纤维素分解菌产生的纤维素酶能够将纤维素分解为葡萄糖而使其菌落周围出现透明圈 (3) B (4) 灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌 (5)固体 提供生长因子

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