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专题39 微生物的培养与利用

1．（2016江苏卷，10）定量分析是科学研究的重要方法。下列能用血细胞计数板直接计数的是（ ）
A．海拉细胞悬液 B．浓缩培养的噬菌体
C．自来水中大肠杆菌 D．蛙卵
【答案】A
2．（2016江苏卷，25）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（ ）

A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品
B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落
C．在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化
D．斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株
【答案】BC
3．（2017新课标Ⅰ卷，37）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：
（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_______________________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________________________（答出两点即可）。
（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择____________________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________。
（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________（答出两点即可）。
【答案】（1）脲酶 分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2来合成有机物 为细胞生物生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料
（2）尿素 其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用
（3）为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定
【解析】（1）细菌分解尿素是由于细菌体内合成脲酶的结果，尿素是有机物，分解尿素的细菌是分解者，而不是生产者，只能生产者才能利用CO2作为碳源合成有机物。葡萄糖通常既作为碳源，也可作为能源。
（2）筛选分解尿素的细菌，通常只能用尿素作为唯一氮源，对于“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”均含有无机氮源。
（3）KH2PO4和Na2HPO4为微生物提供P元素和无机盐离子如钾离子和钠离子，还可作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定。
4．（2017江苏卷，31）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有___________。
（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐____________。以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_____________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。
（3）下图为连续划线法示意图，在图中_____________（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1~5号比色管的苯酚浓度应分别为_____________。
管号
1
2
3
4
5
6
苯酚浓度（mg/L）
1
如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释___________（填序号：①5②10③20）倍后，再进行比色。
【答案】（1）蛋白胨、苯酚
（2）增加 稀释涂布 凝固剂
（3）③
（4） 0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③
（3）下一次划线的起始端是上次划线的末端，随着划线的进行，菌种的密度越来越小，更易形成单菌落，故③区域更易获得菌落。
（4）1号管为空白对照管，不加苯酚，6号管中苯酚浓度为1 mg/L，2~6号管苯酚浓为0~1 mg/L，可判断浓度梯度为0.2 mg/L，则2~5号管中苯酚浓度分别是0.2、0.4、0.6、0.8mg/L。废水中苯酚溶液浓度为50 mg/ L，降解后约有21%的苯酚残留，则苯酚溶液浓度为10.5 mg/L，由于制作的比色管中苯酚浓度介于0~1 mg/L间，则残留液需稀释20倍后，再进行比色。
5．（2016年新课标Ⅰ卷，39）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：
①配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;
②制作无菌平板；
③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；
④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题:
（1）该培养基中微生物所需的氮来源于_________________。若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是_________________。
（2）步骤③中，实验组的操作是_________________。
（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_________________现象。若将30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_______________（填“正确”或“不正确”）。
【答案】（1）牛肉膏、蛋白胨 琼脂
（2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间
（3）污染 不正确
（3）设置的空白对照组，在整个实验过程中没有用来收集空气中的微生物，若空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，说明培养基的配制是不成功的，在此次调查中出现了污染现象，所以若将30（即36－6）/平板作为本组菌落的平板值，该做法不正确。
6．（2016四川卷，10）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

（1）图中选择培养基应以＿＿＿＿＿＿＿＿为唯一氮源；鉴别培养基还需添加＿＿＿＿＿作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成＿＿＿＿＿色。
（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0．1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。
该过程采取的接种方法是＿＿＿＿＿，每克土壤样品中的细菌数量为＿＿＿＿＿×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较＿＿＿＿＿。
（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。突变基因转录的mRNA中，终止密码为＿＿＿＿＿，突变基因表达的蛋白质含＿＿＿＿＿个氨基酸。
【答案】（1）尿素 酚红 红
（2）稀释涂布平板法 1.75 少
（3）UGA 115
（3）突变基因转录的mRNA中，终止密码为UGA，由于增加70个碱基，mRNA中碱基总数（由于终止密码子不编码氨基酸，故除去终止密码子的3个碱基）＝271＋2＋72＝345，由于mRNA上一个密码子含有的3个碱基决定一个氨基酸，故突变基因表达的蛋白质含345/3＝115个氨基酸。
7．（2018全国Ⅲ卷，37）回答下列与酵母菌有关的问题：
（1）分离培养酵母菌通常使用____________（填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，该培养基应采用________灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落的含义是_______________。
（2）酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进______________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）；若进行厌氧培养，可促进_________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）。
（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是
______________________。
【答案】（1）麦芽汁琼脂 高压蒸汽 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体
（2）菌体快速增殖 乙醇产生
（3）酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软
（3）制作面包时，在面粉中添加一定量的酵母菌，因酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，产生二氧化碳，二氧化碳是气体，遇热膨胀而形成小孔，使得面包松软多孔。
8．（2018全国Ⅱ卷，37）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是________。
（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________，在照射前，适量喷洒_________，可强化消毒效果。
（4）水厂供应的自来水通常是经过________（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是__________________________。
【答案】（1）可以
（2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少
（3）破坏DNA结构 消毒液
（4）氯气
（5）未将锅内冷空气排尽
（3）因紫外线能破坏DNA结构，所以密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒。在照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。
（4）通常乙醇消毒是75%的酒精，有气味，影响水质，不适宜消毒自来水；高锰酸钾本身有颜色，消毒后溶液呈紫红色，无法使用；因此水厂供应的自来水通常是经过氯气消毒的。
（5）采用高压蒸汽灭菌时，锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后才能将锅密闭。如果未将锅内冷空气排尽，则会出现压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度的现象。
9．（2018全国Ⅰ卷，37）将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。
回答下列问题：
（1）M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_______的生长，加入了链霉素的培养基属于____________培养基。
（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有
__________（答出两点即可）。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有______（答出两点即可）。
（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是____________，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_____________。
（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板，统计的偏落数分别是110、140和149，取平均值133；
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。
有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是____________。
【答案】（1）细菌 选择
（2）碳源、无机盐 蛋白质、核酸
（3）碘液 淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈
（4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差
（3）淀粉与碘液会变成蓝色，筛选产淀粉酶的微生物，依据淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，再根据透明圈，来筛选产淀粉酶的微生物。
（4）乙同学结果不合理，因为1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差，不能简单的用其平均数作为最终结果。
10．（2018江苏卷，31）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的＿＿＿＿＿，及时对培养基进行分装，并进行＿＿＿灭菌。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约＿＿＿（在25 ℃、50 ℃或80 ℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有＿＿＿＿＿＿。
a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
（4）步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和＿＿＿＿＿＿供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上＿＿＿色细胞的个数应不少于＿＿＿＿＿＿，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。
【答案】（1）pH 高压蒸汽（湿热）
（2）50 ℃
（3）a、b、d
（4）氧气 无 30
（3）在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a正确；划线时应避免划破培养基表面，否则将不能形成正常菌落，b正确；该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量，c错误；培养基中的甲醇浓度越高，此种培养基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越强，因此可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株，d正确。
（4）酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和氧气供应；台盼蓝是大分子物质，不能将活细胞染色，再根据25×16型的血球计数板：1毫升悬液中待测标本（菌体）总数=80小方格内菌体数/80×400×104×稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加入，因此要达到每毫升3×109个活细胞的预期密度，理论上无色细胞数应该不少于（3×109）÷（1000×2×104×400÷80）=30个。

【考点定位】
考纲内容
考纲解读
1．微生物的培养、分离与应用。
1．了解微生物的培养、分离与应用。
【命题预测】
纵观近三年高考题，本专题主要考查微生物的培养、分离与应用等，预测2019年高考仍将主要以非选择题形式考查以上知识点。
【基础梳理】
一、微生物的培养
1．培养基
（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。
（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。
2．无菌技术
（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
（2）关键：防止外来杂菌的入侵。
（3）不同对象的无菌操作方法

3．大肠杆菌的纯化培养
（1）制备固体培养基：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
（2）纯化大肠杆菌
①平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
4．菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
二、微生物的利用
1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
（3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
2．分解纤维素的微生物的分离
（1）纤维素酶
①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。
②作用

（2）纤维素分解菌的筛选
①原理

②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。
④实验流程
土壤取样（富含纤维素的环境）→选择培养（用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度）→梯度稀释（制备系列稀释液）→涂布平板（将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上）→挑选产生透明圈的菌落。
【要点解读】
1．培养基的配制原则
（1）目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。
（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。
（3）pH要适宜：细菌为6．5～7．5，放线菌为7．5～8．5，真菌为5．0～6．0，培养不同微生物所需的pH不同。
2．微生物对主要营养物质的需求特点
（1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。
（2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。
3．选择培养基的制作方法
（1）在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。
（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。
（3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。
（4）通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。

1．（上海市虹口区2018届高三二模生物试题）在分离和纯化土壤中自生固氮菌的实验中，不合理的操作是（ ）
A．取土表3-5cm以下土层的土壤
B．用无菌水稀释土壤样品
C．使用牛肉膏蛋白胨培养基
D．用接种环进行划线接种
【答案】C
2．（北京市通州区2017-2018高三一模理综生物试题）下列有关微生物培养的叙述正确的是（ ）
A．通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落
B．若培养基需要调节pH，应该在灭菌后进行
C．用显微镜直接计数固体培养基中微生物数量
D．倒置平板可防止培养基被滴落的冷凝水污染
【答案】D
【解析】常用固体或半固体培养基分离获得细菌单菌落，液体培养基无法分离，A错误；若培养基需要调节pH，应该在灭菌前进行，B错误；显微镜直接计数法是测定培养液中微生物数量的方法，固体培养基上用稀释涂布法直接计数单个菌落数，C错误；平板倒置是避免冷凝的液体掉到培养基上，污染培养基，D正确。
3．（四川省乐山四校2017-2018学年高三第一学期半期联考生物试题）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此试验相关问题的叙述中，正确的是（）
A．实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉
B．利用平板划线法对细菌进行分离纯化并计数
C．观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照试验
D．培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分別为细菌培养提供氮源和碳源
【答案】D
4．（新疆兵团第二师华山中学2017-2018学年高三上学期期中考试生物试题）鉴定纤维素分解菌时，可以使用刚果红对其染色，常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。两种染色法的结果是（ ）
A．均会出现透明圈
B．均不会出现透明圈
C．方法一出现，方法二不出现
D．方法一不出现，方法二出现
【答案】A
【解析】刚果红染色法第一种先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，在长出菌落的培养基上，覆盖质量浓度为1mg/mI的CR溶液，10到15min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为1mol/l的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈；第二种方法是在倒平板时就加入刚果红；由于纤维素分解菌的存在，纤维素被分解，不能与刚果红形成红色复合物，所以会产生透明圈；无论哪一种方法都不影响纤维素分解菌的存在，所以这两种方法都能产生透明圈，A正确，BCD选项均错误。
5．（上海市青浦区2018届高三二模生物试题）如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345，下列说法中正确的是（ ）

A．操作前要将接种环用酒精消毒
B．划线操作须在火焰上方进行
C．只有在5区才可以得到所需菌落
D．在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌
【答案】D
6．（内蒙古阿拉善左旗高级中学2017-2018学年高三上学期期中考试生物试题）关于灭菌和消毒不正确的理解是（ ）
A．灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽胞和孢子
B．消毒和灭菌实质是相同的
C．接种环用灼烧法灭菌
D．常用的消毒方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法
【答案】B
【解析】灭菌是指采用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，A正确；消毒是指消除或杀灭外环境中的病原体，使其无害化，灭菌则是要将所有的微生物和病毒全部杀灭，以达到无菌的目的，灭菌一定可以达到消毒的目的，但消毒不一定能达到灭菌的效果，B错误；接种工具常用灼烧法灭菌，C正确；常用的消毒方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法，D正确。
7．（江苏省徐州市第一中学2017-2018学年高三上学期期中考试生物试题）如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是（ ）

A．①步骤使用的培养基已经灭菌并调节过pH
B．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
C．④在恒温培养箱中培养时需要将平板倒置
D．④操作过程中，需灼烧接种环5次
【答案】D
8．（江苏省徐州市第一中学2017-2018学年高三上学期期中考试生物试题）有关纯化大肠杆菌实验操作的叙述，错误的是（ ）
A．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
B．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
C．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种
D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
【答案】A
【解析】在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于第一区域的划线末端，A错误；为避免杂菌的污染，第一步操作时需要灼烧接种环，B正确；每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，C正确；为避免细菌污染环境和感染操作者，划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，D正确。
9．（四川省雅安中学2017-2018学年高三上学期期中考试生物试题）关于微生物的实验室培养下列说法不正确的是（ ）
A．若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的稀释度
B．在微生物的培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件
C．消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害
D．从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养
【答案】D
10．（河南省天一联考2018届高三第三次联考生物试题）南洋东华公司研发了两种石油降解产品BDB-n生物降解菌（厌氧型）和BDB-a生物降解菌（好氧型），降解菌是通过产生酶对石油进行分解的。如图为不同条件下，某种降解菌对某湖泊污泥中石油分解能力的测定结果。下列有关分析错误的是（ ）

A．该实验的自变量为pH和污泥含水量
B．该实验的检测指标是2天后污泥中的石油含量
C．该实验中使用的降解菌最可能是BDB-a生物降解菌
D．在不同污泥含水量条件下，降解菌体内酶的最适pH相同
【答案】C
【解析】分析图解可知，该实验的自变量是pH和污泥含水量，因变量是2天后石油含量，AB正确；根据图中的实验数据分析可知，当污泥含水量6080%、pH=7时，石油含量最少，说明石油降解酶分解能力最强的条件为污泥含水量6080%、pH=7，则该实验用的应该是厌氧菌，即BDB-n生物降解菌，C错误；根据三条曲线的最低点可以判断，在不同污泥含水量条件下，降解菌体内酶的最适pH相同，D正确。
11．（河北省衡水中学2017-2018学年高三下学期三调考试生物试题）下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是（ ）
A．分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气
B．用选择培养基选择出分解尿素的细菌，杀死其他微生物
C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在300以上的平板进行计数
D．用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红
【答案】D
12．（四川省乐山四校2017-2018学年高三半期联考生物试题）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此试验相关问题的叙述中，正确的是（ ）
A．实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉
B．利用平板划线法对细菌进行分离纯化并计数
C．观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照试验
D．培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分別为细菌培养提供氮源和碳源
【答案】D
【解析】实验用的带菌培养基要高压蒸汽灭菌后才能倒掉，以免污染环境，A项错误；应利用稀释涂布平板法对细菌进行分离纯化并计数，B项错误；要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，C项错误；培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和碳源，D项正确。
13．（山东、湖北部分重点中学2018年高考冲刺模拟试卷（五）理科综合生物试题）从土壤中分离尿素分解菌和纤维素分解菌，具有下列类似的操作过程：

（1）在过程④的选择培养基是_________培养基，过程⑧的选择培养基是__________培养基（填“固体”或“液体”）。④的具体措施是___________________；⑧的选择措施是___________________。
（2）在过程③样品梯度稀释后，一般只将稀释度为104～106倍的菌液分别接种到3个平板培养基上。接种的常用方法为_______________。
（3）过程⑩采用_______________________的鉴别方法较简单。周围出现透明圈但不能100%确定为纤维素分解菌的菌落，原因是：_________________________________。
【答案】（1）固体 液体 以尿素为唯一氮源 以纤维素为唯一碳源
（2）稀释涂布平板（或平板划线）
（3）倒平板时加入刚果红染液 不分解纤维素（或分解刚果红或淀粉）的微生物菌落也可能出现透明圈
（3）刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应。当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红—纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。可见，过程⑩采用倒平板时加入刚果红染液的鉴别方法较简单。由于不分解纤维素（或分解刚果红或淀粉）的微生物菌落也可能出现透明圈，所以周围出现透明圈的菌落，不能100%确定为纤维素分解菌。
14．（安徽省合肥市2018届高三第三次教学质量检测理综生物试题）依据所学生物技术知识，分析回答下列问题：
（1）日常生活中烹饪产生的油烟冷却后形成液态的油脂，工业生产中提取玫瑰精油的原理与之相同，该提取方法的名称是____________。
（2）为解决生活污水中油脂对环境造成的污染。科研人员要从污水中筛选出分解油脂能力最强的微生物。请分析回答：

①图甲和图乙所代表的方法中能对微生物进行分离和计数的是____________法。用该方法统计样本菌落数时____________（“需要”或“不需要”）设置空白对照组，原因是________。
②图乙中涂布前需对涂布器进行的操作是____________。
③对分离油脂分解菌的选择培养基成分的特别要求是____________。
④接种后，需要将培养细菌的固体培养基倒置培养的原因是____________。
【答案】（1）水蒸汽蒸馏法
（2）稀释涂布平板 需要 因为需要判断培养基是否被污染 用酒精浸泡，在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8?10秒 以油脂为唯一碳源 避免培养皿盖上的水珠滴入培养基，造成污染
③油脂分解菌具有分解油脂的能力，而其他微生物没有，因此在培养基中加入油脂作为唯一碳源可以将油脂分解菌分离出来。
④接种后将培养细菌的固体培养基倒置培养，可以避免培养皿盖上的水珠滴入培养基，造成污染。
15．（重庆市2018届高三第二次诊断考试理科综合生物试题）北方每年在小麦丰收的季节，焚烧秸秆火焰四起，烟雾弥漫，不但导致严重的雾霾而且造成资源的浪费。科学家为了解决这个问题，努力寻找分解秸秆中纤维素的微生物，他们做了如下实验，据图回答：

（1）根据甲图，选择培养纤维素分解菌要用_______________。为了鉴别纤维素分解菌，常在培养基中加入___________。为了统计样品中活菌的数目，常用方法除稀释涂布平板法外，还有____________的方法。
（2）乙图是培养出的单菌落示意图，最适合分解秸秆的两个菌落是_____________（填数字），纤维素分解菌将纤维素最终分解为__________________。从图中可以看出培养基上菌落数较少，推测可能的原因是___________________________________。
（3）为了长期保存该微生物，可以采用__________________的方法。
【答案】（1）选择培养基 刚果红（CR） 显微镜直接计数
（2）1和4 葡萄糖 土壤中纤维素分解菌较少，稀释的倍数太大
（3）甘油管藏的方法
（2）透明圈的大小反映了细菌分解纤维素能力大小，培养基中大的透明圈就是分解纤维素多的地方，所以乙图中最适合分解秸秆的两个菌落是1和4；纤维素是多糖，最终被分解菌分解成葡萄糖；从图中可以看出培养基上菌落数较少，推测可能是土壤中纤维素分解菌较少，稀释的倍数太大所致。
（3）长期保留菌种可用甘油管藏的方法。

1．人们将蔗糖、奶粉和经蛋白酶水解后的玉米胚芽液按适当比例混合后，经乳酸菌发酵可生产新型酸奶。下列相关叙述错误的是（ ）
A．蔗糖消耗量与乳酸生成量呈正相关
B．乳酸菌是一种异养厌氧型的细菌
C．酸奶出现明显气泡说明有杂菌污染
D．只有奶粉为乳酸菌发酵提供氮源
【答案】D
【解析】蔗糖作为乳酸菌的碳源被乳酸菌利用产生乳酸，蔗糖消耗量多，乳酸生成量多，A正确；乳酸菌以有机物作为碳源，无氧呼吸产生乳酸，属于异养厌氧菌，B正确；乳酸菌是厌氧菌，呼吸作用不产生二氧化碳，若酸奶出现气泡，说明有需氧菌存在，即有杂菌污染，C正确；经蛋白酶水解后的玉米胚芽液也可以为乳酸菌提供氮源，D错误。
2．如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是（ ）

A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行火菌处理
B．步骤①倒平板操作时．倒好后应立即将其倒过来放罝
C．步骤③应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤④划线结束后在皿盖上做好标注
【答案】C
3．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此试验相关问题的叙述中，正确的是（ ）
A．实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉
B．利用平板划线法对细菌进行分离纯化并计数
C．观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照试验
D．培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分別为细菌培养提供氮源和碳源
【答案】D
【解析】实验用的带菌培养基要高压蒸汽灭菌后才能倒掉，以免污染环境，A项错误；应利用稀释涂布平板法对细菌进行分离纯化并计数，B项错误；要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，C项错误；培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和碳源，D项正确。
4．下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是（ ）
A．分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气
B．用选择培养基选择出分解尿素的细菌，杀死其他微生物
C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在300以上的平板进行计数
D．用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红
【答案】D
5．科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株Q，步骤如下图所示，下列相关的叙述中，错误的是（ ）

A．步骤①—③中，培养液中需加入多环芳烃菲作为唯一碳源
B．步骤①—③中，将锥形瓶放在摇床上充分振荡，使菌株与培养液充分接触
C．步骤④是利用平板划线法纯化菌株Q，图中所示接种环最少灼烧5次
D．步骤④中每一区域可重复画几次，但1区和5区不能出现交叉
【答案】C
【解析】要想分离出能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株Q，所用培养液中需加入多环芳烃菲作为唯一碳源，A正确；培养过程中，将锥形瓶充分振荡，目的是使菌株与培养液充分接触，B正确；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤④中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，完成步骤④共需灼烧接种环6次，C错误；纯化菌株Q过程中，由于线条末端细菌的数目比线条起始处要少，所以在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，1区和5区不能交叉，D正确。
6．下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是（ ）
A．天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基
B．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理
C．大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段
D．分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源
【答案】C
【解析】天然培养基是指用天然物质制成的培养基，但也需要加工；实验操作者的双手应消毒，不能灭菌；分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有机物（如葡萄糖）作为碳源。
7．生物乙醇是化石汽油的良好替代品，美国主要以玉米为原料生产燃料乙醇。我国则坚持“不与人争粮，不与粮争地”原则，利用农作物废弃物——秸秆代替粮食作为原料，其主要技术流程为：酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。下列分析不正确的是（ ）
A．使用秸秆作为原料使能量得到了更有效的利用
B．对秸秆进行“酶解”主要用的是纤维素酶
C．乳酸菌可以代替酵母菌用于生物乙醇的生产
D．“酵母发酵”环节需要严格控制发酵罐中的氧气供应
【答案】C
8．下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，据图分析不正确的是（ ）

A．获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法
B．获得图B效果的接种方法是平板划线法
C．若在纯化土壤细菌时菌液浓度过高，培养基上的菌落可能会连成一片
D．在接种前要对培养基进行消毒处理
【答案】D
【解析】图A中的菌落分布均匀，接种方法是稀释涂布平板法，A正确；图B中菌落明显分区分布，且有划痕，所以应该属于平板划线法接种，B正确；菌液浓度过高或培养过程中被杂菌污染，容易造成培养基上的菌落连成一片，C正确；接种前要对培养基进行灭菌处理，D错误。
9．缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出（ ）
A．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
B．固氮细菌、大肠杆菌、放线菌
C．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
D．固氮细菌、霉菌、放线菌
【答案】D
10．回答有关微生物的培养与应用的问题：
（1）在配制从土壤中筛选纤维素分解菌的培养基时，需加入5g____粉作为碳源，培养基应用_______法灭菌，待培养基冷却到50℃左右时，在_________附近倒平板。
（2）培养分解纤维素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是___________________________。
（3）若要统计土壤样品中纤维素分解菌的数目，宜采用_________法接种。一同学在稀释倍数为104的培养液中测得平板上菌落数的平均值为24．6，则每毫升样品中的活菌数是（所用稀释液的体积为0．2mL）__________________。
（4）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过_________处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。
【答案】（1）纤维素 高压蒸汽灭菌 酒精灯火焰
（2）将未接种的培养基在适宜条件下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
（3）稀释涂布平板 1．23×106
（4）灭菌
【解析】（1）筛选纤维素分解菌的培养基只允许能分解纤维素的微生物生长，所以培养基中以纤维素为唯一碳源；培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
（2）检测培养基是否被污染，可将未接种的培养基在适宜条件下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。
（3）常用的接种方法中稀释涂布平板法一般多用于筛选菌株，对菌种计数；据题干，每毫升样品中的活菌数＝平板上菌落数的平均值×稀释倍数÷稀释液的体积＝24．6×104÷0．2＝1．23×106/ml；
（4）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。
11．富集培养是微生物学中的最强有力的技术手段之一。主要是利用不同微生物生命活动特点的不同，制定环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其数量大大增加。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答下列问题。

（1）①→③重复培养的目的是_____________________________________________。
（2）若实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是______________；振荡培养的另一个目的是_______________________。
（3）⑤的菌落中大部分是降解_______________微生物。设置⑥的目的是________________。
（4）⑤→⑥采用单细胞挑取法，将所选菌种接种到⑥的培养基中，在此操作过程中如何防止杂菌污染（至少写出两点）。_____________________________________________________
（5）若研究“目的菌”的群体生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用____________的方法进行计数。若以血细胞计数板计数法统计“目的菌”的数量，以一个大方格（体积为0．1mm3）有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为B，菌液稀释倍数为C，那么原菌液的菌群密度为__________个/mL。
（6）实验结束时，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉，以免____________________；灭菌是指________________________________________。
【答案】（1）扩大培养（使分解对羟基苯甲酸微生物的比例增高）
（2）异养需氧型 让目的菌充分利用培养液中的营养物质
（3）对羟基苯甲酸 对照作用
（4）接种过程在火焰旁边进行，接种前灼烧接种环，打开试管后试管口在酒精灯上灼烧，培养皿打开时，在酒精灯旁打开一个缝隙等等
（5）定期取样 50000B?C
（6）污染环境或感染操作者 用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
【解析】（1）经过①→③的重复培养，目的是增大分解对羟基苯甲酸的微生物的比例。
（2）振荡培养的目的之一是增大培养液中溶解氧，对此可推测培养微生物的代谢类型是异养需氧型；目的之二是让目的菌充分利用培养液中的营养物质。
（5）若研究“目的菌”的群体生长规律，将单个菌落进行液体培养，采用定期取样的方法进行计数。根据密度=总数/体积，所以原菌液的菌群密度为（B/5）×25÷0．1×1000×C=50000BC个/mL。
（6）实验结束后，使用过的培养基应进行灭菌处理后，才能倒掉，以免污染环境或感染操作者。灭菌是指用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
12．Ag/TiO2作为一种常见的半导体光催化剂，在可见光照射下不仅可杀灭饮用水中的细菌等微生物，降解水中的有机化合物，还能循环利用，因此被广泛使用。某研究小组制备了Ag/TiO2空心微球，现欲探究不同载银量的Ag/TiO2空心微球的杀菌性能。
（1）培养大肠杆菌：制备适宜大肠杆菌生长的培养基，将培养基等置于_______中灭菌20min；在无菌环境中倒平板，待平板冷凝后，将平板倒置，是为了_________和防止培养基水分过度蒸发。将大肠杆菌制备成菌悬液，分离纯化。
（2）杀菌性能检测：挑取菌落制成菌悬液，用______（工具）接种于无菌平板表面，使其均匀生长，布满平板；用浸透了______的小滤纸片（实验组）和浸透了______的小滤纸片（空白对照），分别放在涂好菌的平板的不同位置；将平板置于恒温箱中培养一段时间，观察记录滤纸片周围的________。
（3）测定饮用水所含的大肠杆菌数目，还有一种特别的方法：将己知体积的饮用水过滤后，将_______放在加入____________的培养基上（大肠杆菌菌落呈黑色），根据黑色菌落的数目，可计算出水样中大肠杆菌的数量。
【答案】（1）高压蒸汽灭菌锅 防止皿盖上的冷凝水滴落，污染培养基 涂布器 不同载银量的Ag/TiO2 空心微球悬浊液无菌水 抑菌圈（透明圈）大小（直径）
（3）滤膜 伊红美蓝
【解析】（1）高压蒸汽灭菌法的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌，制备适宜大肠杆菌生长的培养基用的培养皿、培养基均需要用高压蒸汽灭菌锅灭菌20分钟，以避免杂菌污染培养基。在无菌环境中倒平板，待平板冷凝后，将平板倒置，是为了防止皿盖上的冷凝水滴落，污染培养基。
（3）测定饮用水所含的大肠杆菌数还可以用滤膜法。滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样，这样水样中的细菌留在滤膜上，将滤膜放在加入伊红美蓝培养基上培养，统计黑色菌落数目。这种计数方法较实际值有误差的原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此实际统计到的大肠杆菌数目偏少。
13．资料表明：培养液pH≤4．5时，酵母菌的代谢活动会逐渐受到抑制，甚至停止；耐酸性酵母菌能在pH≤3．5的环境下继续表现出较强的发酵能力，适宜作为白酒发酵的生产菌种。为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌，研究者进行了相关实验，请回答下列有关问题：
（1）河南杜康老酒制酒工艺中，在接种活菌前，清蒸稻皮的目的是___________。随着发酵的进行，酒窖中培养液的pH会逐渐下降，原因是______________________。
（2）取窖底泥，溶于10mL无菌水中，再取1mL上清液接入一定量的麦芽汁培养基中，其目的是___________。在此过程中先振荡摇匀，并通气培养的目的是______________________。
（3）用稀释涂布平板法进行纯化培养统计的细菌数量往往较实际值偏小的原因是___________。通过培养选育得到了三个耐酸性较强的酵母菌菌株，特点如下表。
菌株
甲菌株
乙菌株
丙菌株
特点
pH≤3．5时，生长代谢正常、优于其他常规菌种
pH≤3．5时，生长代谢正常，pH为4—6时生长不正常
pH为2．5—6时，生长代谢正常、优于其他常规菌种
依据菌株特点，研究者认为_____________菌株更适合作为白酒发酵菌株，理由是___________________。
【答案】（1）去除杂菌（或灭菌） 细胞呼吸产生CO2，可形成碳酸；代谢过程还产生了其他酸性物质
（2）扩大培养（或使酵母菌大量繁殖） 使酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖
（3）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 丙 丙菌株对pH的耐受范围更大（发酵初期pH近中性，丙菌株适合此环境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，丙菌株依然能正常生长）
（3）用稀释涂布平板法统计细菌数量时，由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的细菌数量往往较实际值偏小。三个耐酸性较强的酵母菌菌株中，由于丙菌株对pH的耐受范围更大（发酵初期pH近中性，丙菌株适合此环境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，丙菌株依然能正常生长），因此丙菌株更适合作为白酒发酵菌株。
14．日前微博传言手机细菌比马桶按钮多。如图，央视和北京卫视通过实验展示调查结果。回答下列相关问题：

（1）该实验需制备培养基，培养基一般都含有水、碳源、__________________。
（2）据图，两电视台均采用________法接种，该方法需要________（多选）。
A．接种环B．酒精灯 C．移液管 D．涂布器 E．无菌水
（3）通过观察菌落的________，可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为原因是：_____________________________________。
（4）按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0．1mL稀释倍数为102的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为48、50、52，则该手机屏幕的细菌数为________个/cm2。该实验对照组该如何设置______________________。
【答案】（1）氮源和无机盐
（2）稀释涂布平板 BCDE
（3）形态、大小 手机的取样和马桶按钮的取样都不相同
（4）2×104 取培养基涂布0．1mL无菌水进行培养
（4）根据提供的数据进行计算，某手机屏幕的细菌数＝（48＋50＋52）÷3×102÷0．1×10÷（5×5）＝2×104（个/cm2）。
15．为证明青霉素在某种细菌产生抗药性过程中所起的作用是选择而非诱变，有如下实验方案。其中，平板影印指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上进行接种。请回答:

（1）图中扩大培养的过程中应选用__________培养基。利用__________分离法可获得A1培养皿上菌落。
（2）图中②过程培养基的配方如下:
成分
无机盐
蔗糖
葡萄糖
尿素
牛肉膏
水
琼脂
酚红
培养基
+
-
+
+
-
+
+
-
结合图形分析__________（“能”或“不能”）得出结论:该细菌可利用尿素作为氮源。理由是:__________。
（3）B组培养基中还添加了适宜浓度的青霉素，结果如图所示。欲证明青霉素所起的作用是选择，则应选取__________（A．a1B．a2C．b1或b2或3D．任意一个菌落）菌落继续培养在空白的A2培养皿中，待长出菌落后影印到含相同浓度青霉素的C培养皿中。
（4）预测上述A2和C培养皿中菌落的生长情况为__________（“相同”或“不同”），由此证明青霉素所起的作用是选择。
（5）下列关于微生物培养的叙述，正确的是（_____）
A．实验过程中所有器皿和培养基都必须用高压蒸汽灭菌法进行灭菌
B．实验操作过程中必须打开超净台上的紫外灯和过滤风
C．涂布分离法，单菌落更易分开，但操作更复杂
D．采用划线分离时，在每次划线前都需蘸取菌液一次
【答案】（1）液体 涂布
（2）不能 该细菌可能利用氮气作为氮源或培养基中无酚红，无法证明该细菌分解了尿素
（3）A
（4）相同
（5）C
（3）欲证明青霉素所起的作用是选择，菌种应在未添加青霉素的培养基中选择，即选择a1菌落继续培养在空白的A2培养皿中扩大培养，待长出菌落后影印到含相同浓度青霉素的C培养皿中。
（4）如果A2和C培养皿中菌落的生长情况相同，则证明变异是在接触青霉素之前就已经产生了，青霉素所起的作用是选择。
（5）培养基用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，接种环等用具可用灼烧灭菌，A项错误；紫外线对人有伤害，如果超净台的玻璃关死，也没必要开吹风，B项错误；常用接种方法中的稀释涂布平板法一般多用于筛选菌株，可以计数，可以观察菌落特征，但由于需要多次稀释，操作较复杂，C项正确；采用划线分离时，在每次划线前都要对接种环灼烧处理，目的是清除残留的菌种，如果再蘸取菌液，将达不到稀释的目的，D项错误。

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