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课题1微生物的实验室培养
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【学习目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。
【学习重难点】 培养基的分类、成分、用途及无菌技术的操作。
【学习过程】
【自主学习】
一、培养基：
1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。
标准
培养基类型
配制特点
主要应用
物理性质
培养基
加入琼脂较多
菌种分离,鉴定,计数
培养基
加入琼脂较少
菌种保存
液体培养基
不加入
工业生产，连续培养
化学组成
合成培养基
由已知成分配制而成，培养基成分明确
菌种分类、鉴定
天然培养基
由天然成分配制而成，培养基成分不明确
工业生，产降低成本
目的用途
鉴别培养基
添加某种指示剂或化学药剂
菌种的鉴别
选择培养基
添加（或缺少）某种化学成分
菌种的分离
2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。
3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。
4.牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供 、 和 等营养物质。
碳源：如糖类等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。
氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。
二、无菌技术：
阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：[来源:学#
1．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。
2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。
3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。
(二)消毒和灭菌
消毒
灭菌
概念
用较 的物理或化学方法杀死物体 的部分微生物（不包括芽孢和孢子）
用较 的理化因素杀死物体 微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法
消毒法（ 消毒法）
消毒法、紫外线消毒法
灼烧灭菌、 灭菌、
灭菌
适用对象
操作空间、液体、双手等
接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等
〖思考〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至
时打开锅盖，其目的是防止 。
三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和
两个阶段进行。
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：
、 、 、 、 。
2.倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①在火焰旁右手拿 ，左手 ；
②使锥形瓶的瓶口 ；
③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后，将平板 。
（二）纯化大肠杆菌
微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。
1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
其操作步骤是：
①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。
③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。
④将冷却的接种环伸入到 。
⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。
⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。
⑧将平板 培养。
2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度 ，然后将
进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的 。
系列稀释操作：
①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。
③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
涂布平板操作：
⑴将 浸在盛有 的烧杯中。
⑵取少量 （不超过 ），滴加到培养基表面。
⑶将 的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却 。
⑷用涂布器将菌液 地涂布在培养基的表面。涂布时可 ，使菌液分布均匀。
四、结果分析与评价
【合作探究】
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
（二）纯化大肠杆菌
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
【当堂达标】
1．下列关于微生物营养的说法，正确的是
A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量
c．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也能提供能量
2．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌
A．接种针、手、培养基 B．高压锅、手、接种针
C．培养基、手、接种针 D．接种针、手、高压锅
3．以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯
C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
D．待平板冷却凝固约5～10 min后将平板倒过来放置
【拓展训练设计】
1．下列有关培养基的叙述正确的是
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基
C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌
2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含
A．碳源、磷酸盐和维生素 B．氮源和维生素
C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素
3．获得纯净培养物的关键是
A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
B．接种纯种细菌
C．适宜环境条件下培养
D．防止外来杂菌的入侵
4．下列常用的无菌操作中错误的是
A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源
C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭
5．有关倒平板的操作错误的是
A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰
C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置
6．有关平板划线操作正确的是
A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
c．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养
7．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面[来源:Zxxk.Com]
C．再放在适宜条件下培养
D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
8．涂布平板操作需要用到
A．接种环、滴管、酒精灯 B．接种环、移液管、酒精灯
C．涂布器、移液管、酒精灯 D．涂布器、接种环、酒精灯
9．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是
A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染
C．没必要放人未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用
10．菌种保藏应控制的条件是
（1）湿度 （2） 低温 （3） 干燥 （4） 有光 （5）隔绝空气 （6）适当有氧
A．（1）（4）（6） B．（2）（3）（6） C．（1）（5）（6） D．（2）（3）（5）
11．平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是
A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染
C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基
12．鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在 中保温1-2天看有无 ，如果没有 说明制作合格，反之则不合格。

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