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动物细胞融合与单克隆抗体 总第十三课时
【学习目标】
1.比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异2.能说出动物细胞融合的原理、过程和意义。
3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用
【学习重/难点】
1.动物细胞融合的原理、过程和意义。2.单克隆抗体制备的过程的步骤和应用
【学习过程】
（一）动物细胞融合（又叫：细胞杂交）：
1.概念：指 或 动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。
2.结果：融合形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为 细胞。
3.原理：细胞膜的 。
4.诱导融合方法：物理方法（ ）、化学方法（ ）、生物方法（ ）。
5.意义：细胞融合突破了有性杂交方法的局限，使 成为可能。这一技术成为研究 、 、肿瘤和生物 培育的重要手段。
（二）植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较：
比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用途 培养基区别
植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合 离心、电刺激、振动、聚乙二醇（PEG）诱导 克服远源杂交不亲和，获得杂种植株 蔗糖是离体组织赖以生长的成分
动物细胞融合 细胞膜的流动性 用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合 除应用植物细胞杂交手段外，还有用灭活病毒诱导 制备单克隆抗体 动物血清不可缺少
（三）单克隆抗体
1.抗体：淋巴细胞（浆细胞）产生的，化学本质为 ，具有特异性。从血清中分离出的抗体 、纯度低、特异性差。
2.哺乳动物感染病原体（如病毒、细菌等）后，体内会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌 ，凝集或杀死这些病原体。但是每一个B淋巴细胞只分泌 。因此，要想获得大量的 ，必须克隆 ，形成 。
3、单克隆抗体的制备
第一步：将 注射到小鼠体内进行免疫；
第二步：从该小鼠脾脏中获得能够产生抗体的 细胞，与小鼠的 细胞用 或聚乙二醇的诱导下融合；
思考：①为什么选用小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？（细胞的同源性越接近，融合形成的杂种细胞越易成活）
②此时，培养液中会有哪几种细胞？（5种，单个的B淋巴细胞、单个的骨髓瘤细胞、融合的B淋巴细胞、融合的骨髓瘤细胞、融合的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞）
第三步：在特定的 培养基中，筛选出 细胞；
原因：在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有 　 才能生长
第四步：培养杂交瘤细胞，从中挑选出 的细胞群，继续培养；
第五步：将该杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠 内增殖，然后再分离纯化单克隆抗体；（2）杂交瘤细胞的特点：既能大量 ，又能产生 。
（四）.单克隆抗体的应用
（1）单克隆抗体的优点： 强、 高，并可能 。
（2）作为诊断试剂：准确识别各种 物质，并跟 地结合，有 、 、 、 的优点。
（3）用于治疗疾病和运载药物：①主要用于 治疗，把 细胞的单克隆抗体跟放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合，制成“ ”，注入体内，借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。
②优点：疗效高，毒副作用小。
【课堂检测】
1.下列关于单克隆抗体的说法，正确的是( )
①免疫过的淋巴细胞 ②单克隆抗体制备过程中至少要经过两次筛选
③由于B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞不能产生抗体，所以它们融合后产生的抗体叫单克隆抗体，不叫多克隆抗体 ④单一的抗原进入动物体内后，从动物体内提取的抗体
⑤化学性质单一，特异性强，灵敏度高，可用于防病等。
A.②⑤ B.②④ C.③⑤ D.①③④
2.生物导弹是指 ( )
A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞
C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接上抗癌药物
3.下列对于动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是( )
A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段完全相同
C.所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞
4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是( )
A.PEG　　 B.灭活的病毒　 C.电刺激 D.离心
5.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是： （ ）
A.经过兔疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞
C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过兔疫的Ｂ淋巴细胞
6.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的： （ ）
A.淋巴细胞 　 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D.杂交瘤细胞
7.关于单克隆抗体的不正确叙述是： （ ）
A.化学性质单一 B.用有性繁殖获得 C.特异性强 　 D.可用于治病、防病
8.关于杂交瘤细胞的不正确叙述是： （ ）
A.有双亲细胞的遗传物质 B.不能无限增殖
C.可分泌特异性抗体 D.体外培养条件下可大量增殖
9.多核细胞的产生最可能的原因 （ ）
A.细胞核移植 B.细胞核融合 C.细胞核增殖 D.细胞融合
10.动物细胞融合的目的中最重要的是
A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体
C.培育新物种 D.生产杂种细胞
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2.2.1动物细胞培养和核移植技术 （第一课时）总第十一课时
[学习目标]
1.了解动物细胞培养的过程
2.比较动物细胞培养与植物组织培养区别
【学习重难点】
动物细胞培养的过程。
[学习过程]
（一）动物细胞工程：
常用的技术手段有________、____________、_______、_______等。其中，________ 是其他动物细胞工程技术的基础。
（二）动物细胞培养
1.概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关 ，将它分散成 ，然后放在适宜的 中，让这些细胞生长和增殖。
2.过程：取健康动物组织→分散组织细胞（剪碎和用 或 处理一段时间）→配置细胞悬液→原代培养（具有 生长和 抑制的特点）→传代培养（①先用 等处理贴满瓶壁的细胞再分瓶继续培养；②10代以内的细胞保持正常的 ；③细胞传到10-50代左右时，增殖会逐渐 以至于完全停止，但少数细胞的 可能发生改变，克服细胞寿命的自然极限，获得不死性）
3.动物细胞培养的条件
⑴ 无菌、无毒的环境 ：对 和 进行无菌处理，还可在培养液中添加一定量的 。此外，应定期 ，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。
⑵营养：合成培养基中有 、 、 、 、 等，通常需加入 和 。
⑶温度和PH：适宜温度为 ，适宜pH为 。
⑷ 气体环境：主要是 和 。
4.动物细胞培养技术的应用：可应用于生产病毒疫苗、 、 等；基因工程也离不开动物细胞培养；还可以用于检测 ，判断某种物质的毒性。科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究（如用于 等）。
（三）植物组织培养和动物细胞培养的比较
项目 主要原理 培养基 结果 培养目的
植物组织培养 细胞全能性 固体：营养物质、激素 培育成植株 快速繁殖培育无病毒植株
动物细胞培养 细胞增殖 液体：营养物质、动物血清 培育成细胞株或细胞系 获得细胞或细胞产品等
【课堂检测】
1.下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的是（ ）
A.用于培养的细胞多取自动物胚胎或幼龄动物
B.培养过程中需要使用胰蛋白酶等，获得离散的细胞
C.动物细胞培养液与植物组织培养液的组成成分相同
D.动物细胞培养不经过脱分化
2.动物细胞培养过程的顺序是（ ）
①原代培养 ②传代培养 ③胰蛋白酶处理组织，形成分散的悬浮液
A.①②③ B.①③② C.②①③ D.③①②
3.动物细胞培养技术的用途有（ ）
①生产有价值的生物制品,如病毒疫苗，干扰素等 ②生产基因工程技术中所用的受体细胞
③可以用于检测有毒物质
④培养的各种细胞可直接用于生理、病理和药理等方面的研究
A.①② B.①②③ C.②③④ D.①②③④
4.为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理 （ ）
A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.盐酸 D.胰脂肪酶
5.下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是
A.培养基成分不同 B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能
D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株
6.在克隆多利羊的过程中，下列哪项技术没有运用到
A.细胞培养技术 B.细胞核移植 C.胚胎移植技术 D.基因工程技术
7．下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 （ ）
A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清
B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞
C．动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质发生了改变
D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞
8．生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是 （ ）
A．将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体
B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体
C．取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体
D．将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
9．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能（ ）
A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体
C．用于保存物种 D．改变动物的基因型
10．有关全能性的叙述，不正确的是 （ ）
A．受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完整个体，因此全能性最高
B．生物体内细胞由于分化全能性不能表达
C．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高
D．植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性
11.离题的植物组织或细胞在适当培养条件下发育成完整的植株，离体动物体细胞却没有发育成动物的成熟个体，原因是（ ）
A.动物细胞内没有成套的遗传物质
B.动物细胞的全能性随分化程度提高而受到限制，分化潜能变弱
C.动物细胞的细胞核太小 D.动物细胞的全能性低于植物细胞
2.2.1动物细胞培养和核移植技术 （第二课时）总第十二课时
[学习目标]
1.记住动物核移植的概念
2.能说出体细胞核移植的过程
3.理解动物体细胞核移植技术的应用前景
【学习重/难点】
动物细胞核移植技术的过程。
【学习过程】
（一）动物核移植
1.理论基础：动物细胞核具有 。
2.概念：将动物的一个细胞的 ，移入一个已经 的卵母细胞中，使其 并发育成一个 ，这个胚胎最终发育成动物个体。可分为 和 。 较易成功。
（二）体细胞核移植的过程
1.克隆的条件：⑴具有包含物种 的活细胞；⑵能有效调控细胞核发育的 ；⑶完成 的必要的环境条件。
2.体细胞核移植的过程：
①、供体体细胞经细胞培养后，提取细胞核；
②、提取卵巢卵母细胞，在其减数分裂第二次分裂中期除去细胞核，制成无核细胞质；
③、将供体核与无核卵母细胞质融合，并培养成早期胚胎；
④、将早期胚胎移植到代孕母体子宫内，发育成新个体
（三）体细胞核移植技术的应用前景
可用于加速家畜 进程，促进 繁育；保护 ；生产 ；转基因克隆动物细胞、组织和器官可以作为异种移的 ；用于组织器官的 ；研究胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的 和 。
（四）体细胞核移植技术存在的问题
克隆动物存在成功率 、 、 等问题。
【课堂检测】
1.下列关于体细胞克隆的叙述中，错误的是（ ）
A.供体为体细胞的细胞核 B.受体为去核卵母细胞的细胞质
C.细胞核移植是体细胞克隆的关键步骤
D.克隆出的后代与供体的遗传物质和表现型完全一致
2.“多利”羊是（ ）
A.体细胞克隆成功的产物 B.性细胞克隆成功的产物
C.转基因动物成功的产物 D.动物细胞培养成功的产物
3.离题的植物组织或细胞在适当培养条件下发育成完整的植株，离体动物体细胞却没有发育成动物的成熟个体，原因是（ ）
A.动物细胞内没有成套的遗传物质
B.动物细胞的全能性随分化程度提高而受到限制，分化潜能变弱
C.动物细胞的细胞核太小
D.动物细胞的全能性低于植物细胞
4.动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于（ ）
A.培养基不同 B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能
D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株
5．生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是 （ ）
A．将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体
B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体
C．取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体
D．将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
6．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能（ ）
A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体
C．用于保存物种 D．改变动物的基因型
7．下列哪—项属于克隆 （ ）
A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中
B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
C．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
D．将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
8．下列属于组织培养但不是克隆的是 （ ）
A．将花粉离体培养成单倍体植株 B．芽发育成枝条
C．根尖分生区发育成成熟区 D．上皮细胞无性繁殖产生的细胞群
9．动物细胞培养液和植物组织培养液的共有成分是 （ ）
A．葡萄糖 B．蔗糖 C．动物血清 D．维生素
10．动物细胞培养的细胞来自于 （ ）
A．任何个体的细胞 B．只能取自动物胚胎细胞
C．只能取自幼龄动物的组织细胞 D．胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞
11．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是 （　）
　　A.动物细胞培养　B．动物细胞融合 C．单克隆抗体 D．胚胎、核移植
12．细胞株的特点是 （　）
　　A．遗传物质没有改变，可以无限传代B．遗传物质发生改变，不可无限传代
　　C．遗传物质没有改变，不可无限传代
D．遗传物质发生改变，且有癌变特点，可以无限传代
13．关于杂交瘤细胞的不正确叙述是 （　）
　　A．有双亲细胞的遗传物质　　B．不能无限增殖
　　C.可分泌特异性抗体　　　　 D．体外培养条件下可大量增殖
14.动物细胞融合技术最重要的用途是 （　）
　　A.克服远源杂交不亲和　B.制各单克隆抗体　C.培育新品种　　　D.生产杂种细胞
15.在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为:
A．原代培养 B．传代培养 C．细胞株 D．细胞系
16.如果用动物的细胞进行克隆实验应该选择的细胞核不能是　　　　　　　　　　（ ）
A、乳腺细胞的 B、卵细胞的 C、胃腺细胞的 D、囊胚时期的胚胎细胞的
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2.1.2 植物细胞工程的实际应用 总第十课时
【学习目标】
1、理解微型繁殖技术的应用
2、掌握作物脱毒、人工种子的制备过程和意义
2、了解单倍体育种过程和优点
3、了解细胞产物的的生产和意义
【学习重/难点】
1、微型繁殖和植物组织培养的联系
3、单倍体育种和突变体的利用
【学习过程】
一、开辟植物繁殖的新途径：
(一)微型繁殖:
1.概念：植物的微型繁殖技术是指用于快速繁殖优良品种的 ，也叫 。
2.优点：
（1）保持 的遗传特性
（2） 地实现种苗的
(二)作物脱毒:
1.获得脱病毒的植株的方法：切去一定大小的 进行 ，获得脱毒苗。
2.优点：产量 ，品质 。
3.实例： 、草莓、甘蔗、
(三)制作人工种子：
1.定义：人工种子就是以 得到的 、 、 和 等为材料，经过 包装得到的种子。
2.人工种子制备技术的主要流程图：
诱导植物愈伤组织→体细胞胚的诱导→体细胞胚的成熟→体细胞胚的机械化包裹→贮藏或种植
3.优点：
（1）后代无
（2）在生产上不受 、 、 限制
二、作物新品种的培育：
（一）单倍体育种：
1.概念：通过 培养获得 。
2.优点：
（1）后代是纯合子，能
（2）极大地缩短了
（二）突变体的利用：
1.产生：由于培养细胞一直处于不断的 ，因此容易受到 和 的影响而产生 。
2.利用：从产生的突变体中可以 出对人体有用的突变体，进而培育成新品种。
三、细胞产物的工厂化生产：
1.细胞产物种类： 、脂肪、 、药物、
2.技术：植物 技术
3.实例：生产人参 、生产抗癌药物
【课堂检测】
1.植物的微型繁殖技术是指（ ）
A.植物体细胞杂交技术 B.嫁接 C.营养繁殖 D.植物组织培养
2.植物的微型繁殖的优点是（ ）
A.取材少 B.培养周期短 C.繁殖率高 D.以上都是
3.对人工种子正确的解释是（ ）
A.通过科学手段人工合成的种子 B.利用植物组织培养技术获得的种子
C.种皮能自我生成的种子 D.人工种子发芽率低
4.下列哪一项不是单倍体育种的优点（ ）
A.缩短育种年限 B.变异率高
C.得到稳定遗传的优良品种 D.节约人力、物力
5.人参皂苷干粉可以通过下列何种技术获得（ ）
A.杂交育种 B.植物细胞培养 C.多倍体育种 D.单倍体育种
6.运用植物组织培养技术，可以培育或生产出（ ）
A.细胞产物——生物碱 B.无病毒植物 C.人工种子 D.以上都是
7.甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的（ ）
A.有丝分裂 B.分化 C.减数分裂 D.全能性
8.科学工作者把胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放入培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的特点是（　）
A.彼此性状相似 B.变异频率较高 C.单倍体 D.都是纯合子
9.下列四个选项中没有采取植物组织培养技术的是（ ）
A.花药离体培养得到单倍体植株 B.秋水仙素处理幼苗获得多倍体植株
C.人工种子的培育 D.“番茄——马铃薯”杂种植株的培育过程
10.马铃薯利用它的块茎进行无性繁殖，种植的世代多了以后往往会感染病毒而减产，为此农户都希望得到无病毒的幼苗进行种植。获得无病毒幼苗的最佳办法是（　）
A.选择优良品种进行杂交 B.进行远缘植物体细胞杂交
C.利有芽尖进行组织培养 D.人工诱导基因突变
11.下列叙述中，与植物体细胞杂交密切相关的是( )
A.利用离心、振动、电刺激等诱导 B.利用聚乙二醇（PEG）等试剂诱导
C.克服远缘杂交不亲和的障碍 D.快速繁殖、培育无病毒植物
12.甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的 （ ）
A.有丝分裂 B.分化 C.减数分裂 D.全能性
13．下列哪一项不是单倍体育种的优点 （ ）
A．缩短育种年限 B．变异率高 C．得到稳定遗传的优良品种 D．节约人力、物力
14．胚状体是在植物组织培养的哪一阶段上获得的 （ ）
A．愈伤组织 B．再分化 C．形成完整蜘蛛 D．取离体组织
15．人参皂苷干粉可以通过下列何种技术获得 （ ）
A．杂交育种 B．植物细胞培养 C．多倍体育种 D．单倍体育种
16．运用植物组织培养技术，可以培育或生产出 （ ）
A．细胞产物——生物碱 B．无病毒植物 C．人工种子 D．以上都是
17．下列四个选项中没有采取植物组织培养技术的是 （ ）
A．花药离体培养得到单倍体植株 B．秋水仙素处理幼苗获得多倍体植株
C．人工种子的培育 D．“番茄——马铃薯”杂种植株的培育过程
18．植物的微型繁殖的优点是 （ ）
A．取材少 B．培养周期短 C．繁殖率高 D．以上都是
19．两个亲本的基因型分别为AAbb和aaBB，这两对基因按自由组合定律遗传,要培育出基因型为aabb的新品种，最简捷的方法是 （ ）
A．单倍体育种 B．杂交育种 c．人工诱变育种 D．细胞工程育种
20．下列叙述中，与植物体细胞杂交密切相关的是 （ ）
A利用离心、振动、电刺激等诱导 B 利用聚乙二醇（PEG）等试剂诱导
C 克服远缘杂交不亲和的障碍 D 快速繁殖、培育无病毒植物
21．科学工作者把胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放入培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的特点是（　 ）
A．彼此性状相似 B．变异频率较高 C．单倍体 D．都是纯合子
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