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实验五 叶绿体色素的提取和分离（必修一P97）
一．实验目的：
1．尝试用过滤方法提取叶绿体中的色素和用纸层析法分离提取到的色素。
2．分析实验结果，探究叶绿体中有几种色素，以及各自所呈现的颜色。
二．实验原理：
1．叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮、乙醇等能提取色素。
2．层析液是一种脂溶性很强的有机溶 ( www. )剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析法来分离四种色素。
三、实验材料：幼嫩、鲜绿的菠菜叶
四、实验步骤：
步 骤 注 意 问 题 分 析
1．提取色素5克绿叶剪碎，放入研钵，加SiO2、CaCO3和5mL丙酮（或10mL无水乙醇）迅速、充分研磨。（若没有无水乙醇，也可用体积分数为95%的乙醇，但要加入适量的无水碳酸钠，除去水分） 加SiO2加CaCO3加丙酮迅速 加SiO2为了研磨得更充分。加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。因为叶绿素含镁，可被细胞液中的有机酸产生的氢代替，形成去镁叶绿素，CaCO3可中和液泡破坏释放的有机酸，防止叶绿体被破坏。叶绿体色素易溶于丙酮等有机溶剂。减少研磨过程叶绿素的分解，减少有毒性的丙酮挥发。
2．收集滤液漏斗基部放一单层尼龙布，研磨倒入漏斗内挤压，将滤液收集到小试管中，用棉花塞塞住试管口。 尼龙布起过滤作用。试管口用棉花塞塞紧是为了防止丙酮挥发。
3．制备滤纸条将干燥的滤纸，顺着纸纹剪成长10cm，宽1cm的纸条，一端剪去二个角，并在距这一端1cm处划一铅笔线。 干燥顺着纸纹剪成长条一端剪去二个角 可吸收更多的滤液。层析时，色素分离效果好。可使层析液同时到达滤液细线。
4．划滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线，干后重复三次。 滤液细线越细、越齐越好。重复三次。 防止色素带之间部分重叠。增加色素在滤纸上的附着量，实验结果更明显。
5．纸层析法分离色素将3mL层析液倒入烧杯中，将滤纸条（划线一端朝下）插入层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。 层析液不能没及滤纸条。烧杯要盖培养皿盖。 防止色素溶解在层析液中，层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发
6．观察实验结果 扩散最快是胡萝卜素，扩散最慢是叶绿素b，含量最多的是叶绿素a。 四种色素之所以能被分离，是因为四种色素随层析液在滤纸上的扩散速度不同。
五：实验讨论：
1．滤纸条上的滤液细线，为什么不能触及层析液？
答：滤纸条上的滤液细线如触及层析液，滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。
2．提取和分离叶绿体色素的关键是什么？
答：提取叶绿体色素的关键是：①叶片要新鲜、浓绿；②研磨要迅速、充分；③滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。分离叶绿体色素的关键是：一是滤液细线要细且直，而且要重复划几次；二是层析液不能没及滤液线。
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胡萝卜素（橙黄色）
叶黄素（黄色）
叶绿素b（黄绿色）
叶绿素a（蓝绿色）
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