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(共28张PPT)
探究·实践 DNA的粗提取与鉴定
历史上第一管DNA粗提取物
Friedrich Miescher（1844-1895）
历史上最早注意到DNA这个东西的人是当时年仅24岁的瑞士医生Friedrich Miescher。他利用大量刚换下的外科绷带来分离白细胞的化学组分。当他用各种溶剂一点点冲洗，分离脓液中的各种组分时，他发现析出的一个东西有点不太一样：它在弱酸性溶液里会沉淀，提高碱性后又会重新溶解。这就是历史上第一管DNA粗提取物。
（图片来自百度）
实验目的：利用不同生物材料进行DNA的粗提取与鉴定
猕猴桃
2n=58
洋葱
2n=16
葱白
2n=16
一、分析本实验涉及的DNA物理性质和化学性质
具体表现
物理性质
化学性质
DNA不溶于酒精，但能溶于2 mol/L的NaCl溶液。
在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
实验原理
1.DNA存在于真核细胞的什么部位？
2.如何使DNA从细胞内到达细胞外？
3.如何将DNA与不溶性杂质分离？
4.如何将DNA与可溶性蛋白等杂质分离？
5.鉴定DNA的原理是什么？
二、明确DNA粗提取与鉴定的原理
实验原理
1.DNA存在于真核细胞的什么部位？
细胞核（主要）
线粒体（少量）
叶绿体（少量）
（图片来自人教版必修1）
2.如何使DNA从细胞内到达细胞外？
（图片来自人教版必修1）
机械外力破碎——研磨
SDS
研磨液
EDTA
Tris-HCl缓冲液
抑制DNA酶活性
瓦解细胞膜
维持pH稳定
3.如何将DNA与不溶性杂质分离？
过滤
4.如何将DNA与可溶性蛋白质等杂质分离？
DNA
可溶性蛋白质等
DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精
DNA沉淀析出
离子
5.二苯胺鉴定DNA的原理
彻底水解
4种含氮碱基
脱氧核糖
磷酸
H+
-H2O
-羟基-γ-酮基戊醛
蓝色物质
DNA
1.利用DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精这一原理初步分离DNA和蛋白质。
2.利用在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色这一原理鉴定DNA。
实验原理
实验材料：洋葱、葱白、猕猴桃、研磨液、体积分数为95%的酒精、二苯胺试剂、蒸馏水
实验器具：烧杯、量筒、移液枪、枪头、塑料杯、塑料管、研磨过滤器、恒温水浴锅、10mL离心管等
实验材料和器具
选取洋葱、葱白、猕猴桃三种常见蔬菜水果，借助研磨液和研磨过滤器破碎细胞，释放DNA，再利用预冷的酒精溶液（体积分数95%）将DNA以白色丝状物的形式析出，最后利用蒸馏水溶解DNA并加入二苯胺试剂进行鉴定，比较不同实验材料进行DNA粗提取的效果是否存在差异。
实验设计思路
实验过程
实验结论：不同实验材料进行DNA粗提取效果存在差异，其中葱白提取效果相较于洋葱和猕猴桃更好。
实验结果
葱白组
对照
洋葱组
猕猴桃组
要加入等量的生物材料，并且研磨材料时必须充分。
实验前要将95%的酒精溶液进行预冷处理。
尽可能干燥白色丝状物再进行溶解，防止其上的酒精影响后续的溶解与鉴定。
加入二苯胺后进行沸水浴，沸水浴时间要充足。
待DNA-二苯胺混合液冷却后再观察其颜色变化。
注意事项
研磨过滤器
创新装置优势：
1.研磨过滤一步到位，简单方便
2.操作过程中材料不易损失浪费
实验创新点
一、装置改进，化繁为简，效果明显
创新装置优势：
3.塑料制品不带电荷，
不会吸附DNA分子
一、装置改进，化繁为简，效果明显
实验创新点
创新装置优势：
3.塑料制品不带电荷，不会
吸附DNA分子
一、装置改进，化繁为简，效果明显
实验创新点
实验创新点
二、材料改进，突破传统材料瓶颈
洋葱
葱白
猕猴桃
创新材料优势：
1.容易研磨 2.实验效果明显
创新材料优势：
1.容易研磨 2.实验效果明显
洋葱
葱白
猕猴桃
实验创新点
二、材料改进，突破传统材料瓶颈
创新试剂优势：
1.无需配制，简单方便 2.实验效果明显
葱白+NaCl
葱白
+蒸馏水
洋葱+NaCl
洋葱
+蒸馏水
猕猴桃+NaCl
猕猴桃
+蒸馏水
实验创新点
三、 试剂改进，简化实验流程
对照
创新评价量表优势：
1.评价量表细致具体，易操作
2.评价范围广，涵盖操作规范性及团队协作性
四、 评价改进，化教学评价为具象
实验创新点
凝胶电泳法
（图片来自百度）
拓展 精确分离DNA
紫外分光光度计
（图片来自百度）
DNA在波长为260nm处有最大吸收值，纯的DNA溶液OD260/OD280为1.8，小于1.8表示有蛋白质或酚类污染，大于1.8表示有RNA污染。
拓展 精确鉴定DNA
小结
①保护提取物 ②释放提取物 ③分离提取物
提取类实验一般思路
①发生颜色变化 ②便于操作与观察
鉴定类实验一般思路
谢谢观看

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