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(共19张PPT)
动物细胞工程
动物细胞工程：
重点：动物细胞培养条件、过程；干细胞的类型
动物细胞融合方法，单克隆抗体制备过程、应用
动物体细胞核移植定义、原理、流程
动物细胞培养: 概念,原理,2种酶，2种生长方式（悬浮生长、细胞贴壁）；
接触抑制，原代培养/传代培养；4个培养条件,应用
1.P45为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？
2.细胞培养用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？P44用胃蛋白酶可以吗？
3.什么是悬浮生长和细胞贴壁？
4.细胞分裂受阻的原因是什么？解决思路？具体做法
5.什么是原代培养、传代培养？
6.总结动物细胞培养和植物组织培养的异同。
动物细胞培养P43：从动物体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖 2种酶：胰蛋白酶、胶原蛋白酶
幼龄动物的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞相反。
分化程度越低的细胞，增殖能力越强，更容易培养。
蛋白质。不行；胃蛋白酶的适宜PH约为2，多数动物细胞培养的适宜PH为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境下失活，所以不行。
悬浮生长（悬浮在培养液中）；细胞贴壁（大多数细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，如贴附于培养瓶的瓶壁上）
4个培养条件：P44①营养：合成培养基，血清（未知成分）,培养液
②无菌、无毒：灭菌及无菌操作；定期更换培养液，清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 ③温度、PH、渗透压
④气体环境：95%空气和5%CO2 CO2作用维持培养液PH
动物细胞培养:
概念,原理,2种酶，2种生长方式（悬浮生长、细胞贴壁）；
接触抑制，原代培养/传代培养；4个培养条件,应用
3.什么是悬浮生长和细胞贴壁？
4.细胞分裂受阻的原因是什么？解决思路？具体做法
5.什么是原代培养、传代培养？
6.总结动物细胞培养和植物组织培养的异同。
悬浮生长（悬浮在培养液中）；细胞贴壁（大多数细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，如贴附于培养瓶的瓶壁上）
细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等
接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
原代培养：分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养为原代培养。
传代培养：分瓶后的细胞培养为传代培养。
干细胞培养及应用
1.干细胞的分类和分布
2.功能---有自我更新能力和分化潜能
胚胎干细胞的功能？成体干细胞的功能？--P46页
3.应用
ES细胞
诱导多能干细胞：iPS细胞 P46
1.胚胎干细胞的伦理问题、免疫排斥问题
2.诱导方法：导入特定基因、特定蛋白或小分子化学物（P108）等；
成纤维细胞，已分化的T细胞、B细胞等
3.课本P98 T2（4）
概念：使两个或多个细胞结合形成一个细胞
原理：细胞膜流动性
诱导方法：PEG融合法，电融合法，灭活病毒诱导法
意义：突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能
应用：研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤、培育生物新品种的重要手段，最重要的应用是制造单克隆抗体
一、动物细胞融合P48 :概念、原理、诱导方法、意义、应用
项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交
原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
融合前 用胰蛋白酶等处理分散成单个细胞 纤维素酶、果胶酶去除细胞壁
诱导方法 PEG融合法、电融合法、 灭活病毒诱导法 物理法：电融合法、离心法
化学法：聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高PH融合法
结果 获得杂交细胞或细胞产物 获得杂种植株
用途 制备单克隆抗体（最重要） 培育作物新品种
意义 克服远缘杂交障碍 产量低！纯度低！特异性差！
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
米尔斯坦、科勒的设想
诱导动物细胞融合方法：PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
动物细胞融合技术
原理：细胞膜的流动性
动物细胞培养技术
原理：细胞增殖
第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。
第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。
多孔细胞培养板
怎样二次筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞？
将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个进行培养（克隆化培养）
一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体
上清液可与特定抗原
结合的培养孔为阳性孔
抗体检测板
单克隆抗体制备: 2大步,2个原理,3种诱导方法,2种筛选,2种培养
①给小鼠注射特定抗原的目的
从小鼠体内得到的B淋巴细胞实际上是哪种细胞
②区分杂交瘤细胞的特点 单克隆抗体的优点
③细胞融合完成后,融合体系中会出现哪些类型的细胞 为什么
2大步：动物细胞融合； 动物细胞培养
2个原理：细胞膜的流动性； 细胞增殖
3种诱导方法：PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生抗体
单克隆抗体的优点：能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备。
2种筛选：第一次为筛选出杂交瘤细胞，方法——选择培养基
第二次为筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，
方法——克隆化培养，抗体检测。多次筛选。
2种培养：体外培养（从培养液中获取单克隆抗体）；
小鼠腹腔内增殖（小鼠腹水肿获取单克隆抗体）
B
单克隆抗体的应用：
1.作为诊断试剂：早早孕诊断试剂盒；用同位素或荧光标记的单克隆抗体定位肿瘤等疾病
2.治疗疾病
3.运载药物：抗体--药物偶联物（ADC）
（1）ADC的组成成分、作用机制？
（2）抗体和药物各有什么作用？
（3）ADC在临床应用上有何优势？
抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞。药物起治疗作用，如杀伤靶细胞
10．(2020·山东日照模拟)下面是两种“生物导弹”的作用原理示意图，没有与肿瘤细胞结合的“生物导弹”一段时间后被机体清除。阿霉素是一种抗肿瘤药，可抑制 DNA 和 RNA 的合成；细胞毒素可有效杀伤肿瘤细胞，但没有特异性；二者在杀伤肿瘤细胞的同时还都会对健康细胞造成伤害。下列说法不正确的是(　　)
A．单克隆抗体是由杂交瘤细胞合成和分泌的，该技术的基础是动物细胞融合
B．两种生物导弹治癌的作用机理不完全相同，使用的单克隆抗体可能不同
C．单克隆抗体直接携带两种药物，通过体液定向运输到癌细胞并与之结合
D．单克隆抗体特异性强、灵敏度高，因而药物不会再对正常细胞造成伤害
注意：1.动物细胞培养是所有动物细胞工程技术的基础。
2.区分定向运输与靶向结合
ACD
五、动物细胞核移植技术和克隆动物:动物细胞核移植概念、类型及难易、原理、过程、应用、存在问题
2. P52为什么动物体细胞核移植难度明显高于胚胎细胞？
为什么体细胞克隆猴的诞生轰动了世界？
3.生产原理是什么？如何让动物体细胞核的全能性表达出来？
4.整个生产流程设计哪些技术？
5.克隆牛遗传性状分析P54T2，为什么要去除卵母细胞的细胞核？
6. 三个亲本，区分供体、受体的作用；生殖方式
7.体细胞核移植的应用及存在的问题？P54
原理：动物体细胞的细胞核具有全能性
受体细胞选择MII期卵母细胞的原因：体积大易操作；含有促使细胞核表现全能性的物质和营养条件
收集卵巢，采集卵母细胞，体外培养到MII期
高产奶牛（供体）
培养体细胞
物理或化学法激活重构胚，
胚胎移植进入受体母牛体内（代孕）
电融合法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞，形成重构胚。
生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛
动物体细胞核移植，胚胎移植，动物细胞培养
克隆牛的遗传物质组成：供体细胞核DNA，去核卵母细胞的细胞质DNA。表现型=基因型+环境
所以克隆动物不是对体细胞供体动物100%的复制
1.动物细胞核移植P52：将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。
由于胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难。
P54
课本P55T2;

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