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课时1　微生物的培养需要适宜条件
课时概念解析　本课时的概念为“无菌技术是在培养某种微生物时，保持无菌物品及无菌区域不被微生物污染的技术”“灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提”。这两个概念的建构需要以下概念或证据的支持：
(1)细胞是生物体结构与生命活动的基本单位。(2)细胞的生存需要能量和营养物质，并通过分裂实现增殖。
概念1　培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
1.培养基的定义、成分及理化性质
2.培养基的类型
提醒：固体培养基表面的微生物生长速度比液体培养基中慢，原因是细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质交换速度相对较慢。
[辨正误]
(1)培养基的主要成分为水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。(　　)
(2)平板属于固体培养基，常用于菌种保存。(　　)
(3)细菌通常要求在中性偏酸的环境中生长。(　　)
1.(科学实验和探究情境)下表为微生物的培养基配方，完成下列问题：
KH2 PO4 Na2 HPO4 MgSO4· 7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至 1 000 mL
(1)培养基中的碳源主要是________，尿素主要为微生物的生长提供__________，琼脂的作用是________。
(2)从化学成分来看，该培养基属于________培养基；从物理性质来看，该培养基属于________培养基。
2.(科学实验和探究情境)下表为某种培养基的配方，请分析回答问题：
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
(1)该培养基按物理性质分属于哪类培养基？判断的依据是什么？___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(2)该培养基适合用来培养自养型还是异养型微生物？为什么？____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
1.培养基的成分及功能
2.几种常见微生物的碳源、氮源与能源供应
【典例应用】
例1 (2024·舟山质检)下列关于培养基的叙述，错误的是(　　)
A.液体培养基常用于大规模快速繁殖某种微生物
B.固体培养基表面的微生物生长速度比在液体培养基中快
C.平板固体培养基常用于观察由单个细胞生长繁殖成的菌落
D.斜面固体培养基常用于菌种保存
例2 (2024·湖州高二期末)下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源的来源和新陈代谢类型的描述，其中正确的一组是(　　)
项目 硝化细菌 乳酸菌 根瘤菌 衣藻
能源 NH3 乳酸 N2 光能
碳源 CO2 糖类 糖类 CO2
氮源 NH3 N2 N2 NO
代谢类型 自养需氧型 异养厌氧型 自养需氧型 自养需氧型
A.硝化细菌与乳酸菌 　 B.乳酸菌与根瘤菌
C.根瘤菌与衣藻 　 D.硝化细菌与衣藻
1.培养自养型微生物，通常需要提供无机碳源，如CO2、NaHCO3等；而培养异养型微生物，则需要提供有机碳源，如糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等。
2.如果培养基里不含有机碳源，则通常培养的是自养型微生物；若含有机碳源，则通常培养的是异养型微生物。
3.培养基的配方中没有琼脂，则通常为液体培养基；培养基的配方中含有琼脂，则通常为固体培养基。　　　
概念2　灭菌和无菌技术可以排除非目标微生物的干扰
1.实验器具与培养基的灭菌
2.特殊有机物的灭菌
3.使用过的器皿、废弃物的处理
所有使用过的器皿、废弃物等必须先经过____________后再洗涤或倾倒。
4.接种过程中的灭菌和无菌操作
(1)接种工具的灭菌
(2)瓶口或试管口的灭菌：接种过程中，打开塞子____________和塞上塞子____________都要将瓶口或试管口在酒精灯火焰上____________灭菌。
(3)接种时要靠近酒精灯的________。
5.配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基(活动)
(1)20%马铃薯蔗糖培养基的配方
去皮马铃薯丝(或小块)20 g，________2 g，琼脂1.5～2 g，水100 mL(自然pH)。
(2)方法步骤
[辨正误]
(1)波长在256～266 nm的紫外线可使菌体的蛋白质和核酸变性，有很强的杀菌作用。(　　)
(2)在使用涂布器接种时，应该将涂布器在酒精灯的火焰上进行灼烧，然后立即进行涂布，以防止其他微生物进入。(　　)
(3)由于葡萄糖在115 ℃以上会焦化，因此对于含葡萄糖的培养基不能采用高压灭菌方法灭菌。(　　)
(科学实验和探究情境)在培养某种微生物时，防止其他微生物混入，保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术，称为无菌技术。
(1)培养基、双手和接种环分别采用什么方法进行灭菌或消毒处理？____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(2)培养工作结束后，培养基等废弃物能否直接倾倒，为什么？____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
(3)接种时为什么要靠近酒精灯的火焰？
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
灭菌、消毒与防腐的比较
【典例应用】
例3 (2024·绍兴高二期末)微生物的培养和分离实验通常需要进行高压蒸汽灭菌。下列相关叙述正确的是(　　)
A.实验前，可采用高压蒸汽灭菌法对实验器具和培养基进行灭菌
B.培养基中有尿素时，通过降低高压蒸汽灭菌的压力与温度即可
C.经高压蒸汽灭菌后的器具可直接用于微生物实验
D.实验后的培养基不需要进行高压灭菌，直接丢弃
例4 (2024·百校联盟高二联考)配制培养基是培养微生物的第一步，下列叙述正确的是(　　)
A.配制培养基时，需要在酒精灯火焰旁操作
B.获得纯净培养物的关键是阻止一切微生物生长
C.制作棉塞不能使用医用的脱脂棉
D.在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上可以继续使用
1.(2021·天津卷，1)下列操作能达到灭菌目的的是(　　)
A.用免洗酒精凝胶擦手
B.制作泡菜前用开水烫洗容器
C.在火焰上灼烧接种环
D.防疫期间用石炭酸喷洒教室
2.(2018·全国卷Ⅱ，37节选)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
(1)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________________________________________。
(2)密闭空间内的空气可采用紫外线照射灭菌，其原因是紫外线能__________________________________________________________________。
(3)水厂供应的自来水通常是经过__________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
课时1　微生物的培养需要适宜条件
概念1
自主建构
1．生长繁殖　积累代谢产物　无机盐　碳源　氮源　中性偏碱　中性偏酸
2．(1)凝固剂　大规模快速繁殖某种微生物　分离、鉴定、活菌计数　菌种保存　(2)可重复性强　不恒定　生物发酵工业
辨正误
(1)√
(2)×　提示：平板和斜面都属于固体培养基，平板常用微生物的分离、鉴定和活菌计数等，斜面常用于菌种保存。
(3)×　提示：细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长。
合作探究
1．(1)葡萄糖　氮源　凝固剂　(2)合成　固体
2．(1)提示：液体培养基。依据为培养基中不含凝固剂。
(2)提示：自养型。因为培养基中无有机碳源。
典例应用
例1　B　[由于细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质交换速度相对较慢，培养基表面的微生物生长速度比在液体培养基中慢，B错误。]
例2　D　[硝化细菌能将NH3氧化成亚硝酸和硝酸，并利用该过程释放的化学能，将CO2和水合成有机物，属于自养需氧型生物，其氮源和能源都是NH3，碳源是CO2；乳酸菌是异养厌氧型生物，不能直接利用N2，氮源是硝酸根离子等，碳源和能源为糖类；根瘤菌是能固氮的异养需氧型生物，进行生命活动所需要的能量来自糖类等有机物的氧化分解，氮源是N2，碳源和能源是糖类；衣藻是低等植物，能利用光能进行光合作用制造有机物，属于自养需氧型生物，其能源是光能，碳源是CO2，氮源是NO等。]
概念2
自主建构
1．烘箱中烘干　超净工作台
2．G6玻璃砂漏斗　温度　压力
3．高压灭菌
4．(1)灼烧　冷却　酒精　灼烧　冷却　(2)后　前　灼烧　(3)火焰
5．(1)蔗糖　(2)煮沸　过滤　加热溶化　大　小　普通棉花
辨正误
(1)√
(2)×　提示：在使用涂布器接种时，应将涂布器浸泡在75%的酒精中，接种前将表面残留着少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上灼烧，冷却后用于涂布。
(3)×　提示：可采用适当降低温度、压力(112 ℃，500 g/cm2)以及延长时间(30 min)的高压灭菌方法灭菌。
合作探究
(1)提示：高压蒸汽灭菌、酒精擦拭、火焰灼烧。
(2)提示：不能，因为实验使用过的废弃物对环境有不确定性的影响，必须先经过高压灭菌后再倾倒。
(3)提示：利用燃烧产生的上升气流减少空气中微生物落入培养基的可能性。
典例应用
例3　A　[无菌操作的首要条件是各种器具必须是无菌的，这些器具可用高压蒸汽灭菌法灭菌，A正确；尿素受热会分解，只能用G6玻璃砂漏斗进行过滤除菌，但玻璃砂漏斗使用前也要在121 ℃下高压蒸汽灭菌，B错误；通常要将高压蒸汽灭菌后的实验器具放入60～80 ℃的烘箱中烘干后再使用，C错误；为防止污染环境，实验后的培养基需要高压灭菌后再丢弃，D错误。]
例4　C　[配制培养基时，不需要在酒精灯火焰旁操作，接种时需要在酒精灯火焰旁操作，A错误；获得纯净培养物的关键是无菌操作，保证目标微生物的生长，B错误；在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上不能继续使用，D错误。]
感悟真题
1．C　[用免洗酒精凝胶擦手的目的为消毒，A错误；制作泡菜前用开水烫洗容器属于消毒操作，B错误；在火焰上灼烧接种环能达到灭菌目的，C正确；防疫期间用石炭酸喷洒教室，属于消毒操作，D错误。]
2．(1)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少
(2)使菌体的蛋白质和核酸变性
(3)氯气
解析　(1)巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。(2)紫外线照射能灭菌的原因是其能够使菌体的蛋白质和核酸变性。(3)自来水通常采用氯气消毒。(共33张PPT)
第一章　发酵工程
课时1　
微生物的培养需要适宜条件
本课时的概念为“无菌技术是在培养某种微生物时，保持无菌物品及无菌区域不被微生物污染的技术”“灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提”。这两个概念的建构需要以下概念或证据的支持：
(1)细胞是生物体结构与生命活动的基本单位。(2)细胞的生存需要能量和营养物质，并通过分裂实现增殖。
课时概念解析
目录 CONTENTS
1. 培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
2.灭菌和无菌技术可以排除非目标微生物的干扰
3.感悟真题
自主建构
合作探究
合作探究
课时概念图
自主建构
生长繁殖
1.培养基的定义、成分及理化性质
积累
代谢产物
无机盐
碳源
氮源
中性
偏碱
中性偏酸
2.培养基的类型
提醒：固体培养基表面的微生物生长速度比液体培养基中慢，原因是细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质交换速度相对较慢。
凝固剂
大规模快速繁殖某
种微生物
分离、鉴定、活菌计数
菌种保存
可重复性强
不恒定
生物发酵工业
√
[辨正误]
(1)培养基的主要成分为水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。( )
(2)平板属于固体培养基，常用于菌种保存。( )
提示：平板和斜面都属于固体培养基，平板常用微生物的分离、鉴定和活菌计数等，斜面常用于菌种保存。
(3)细菌通常要求在中性偏酸的环境中生长。( )
提示：细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长。
×
×
1.(科学实验和探究情境)下表为微生物的培养基配方，完成下列问题：
KH2 PO4 Na2 HPO4 MgSO4· 7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至
1 000 mL
(1)培养基中的碳源主要是________，尿素主要为微生物的生长提供______，琼脂的作用是________。
(2)从化学成分来看，该培养基属于______培养基；从物理性质来看，该培养基属于______培养基。
葡萄糖
氮源
凝固剂
合成
固体
2.(科学实验和探究情境)下表为某种培养基的配方，请分析回答问题：
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
(1)该培养基按物理性质分属于哪类培养基？判断的依据是什么？
提示：液体培养基。依据为培养基中不含凝固剂。
(2)该培养基适合用来培养自养型还是异养型微生物？为什么？
提示：自养型。因为培养基中无有机碳源。
1.培养基的成分及功能
2.几种常见微生物的碳源、氮源与能源供应
【典例应用 】
B
例1 (2024·舟山质检)下列关于培养基的叙述，错误的是(　　)
A.液体培养基常用于大规模快速繁殖某种微生物
B.固体培养基表面的微生物生长速度比在液体培养基中快
C.平板固体培养基常用于观察由单个细胞生长繁殖成的菌落
D.斜面固体培养基常用于菌种保存
解析：由于细胞与固体培养基的接触面积较小，细胞与环境间物质交换速度相对较慢，培养基表面的微生物生长速度比在液体培养基中慢，B错误。
例2 (2024·湖州高二期末)下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源的来源和新陈代谢类型的描述，其中正确的一组是(　　)
D
A.硝化细菌与乳酸菌 　 B.乳酸菌与根瘤菌
C.根瘤菌与衣藻 　 D.硝化细菌与衣藻
1.培养自养型微生物，通常需要提供无机碳源，如CO2、NaHCO3等；而培养异养型微生物，则需要提供有机碳源，如糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等。
2.如果培养基里不含有机碳源，则通常培养的是自养型微生物；若含有机碳源，则通常培养的是异养型微生物。
3.培养基的配方中没有琼脂，则通常为液体培养基；培养基的配方中含有琼脂，则通常为固体培养基。
烘箱中烘干
1.实验器具与培养基的灭菌
超净工作台
2.特殊有机物的灭菌
G6
玻璃砂漏斗
温度
压力
3.使用过的器皿、废弃物的处理
所有使用过的器皿、废弃物等必须先经过__________后再洗涤或倾倒。
高压灭菌
4.接种过程中的灭菌和无菌操作
(1)接种工具的灭菌
(2)瓶口或试管口的灭菌：接种过程中，打开塞子____和塞上塞子____都要将瓶口或试管口在酒精灯火焰上______灭菌。
(3)接种时要靠近酒精灯的______。
灼烧
冷却
酒精
灼烧
冷却
后
前
灼烧
火焰
5.配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基(活动)
(1)20%马铃薯蔗糖培养基的配方
去皮马铃薯丝(或小块)20 g，______2 g，琼脂1.5～2 g，水100 mL(自然pH)。
蔗糖
(2)方法步骤
煮沸
过滤
加热溶
化
大
小
普通棉花
√
[辨正误]
(1)波长在256～266 nm的紫外线可使菌体的蛋白质和核酸变性，有很强的杀菌作用。( )
(2)在使用涂布器接种时，应该将涂布器在酒精灯的火焰上进行灼烧，然后立即进行涂布，以防止其他微生物进入。( )
提示：在使用涂布器接种时，应将涂布器浸泡在75%的酒精中，接种前将表面残留着少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上灼烧，冷却后用于涂布。
(3)由于葡萄糖在115 ℃以上会焦化，因此对于含葡萄糖的培养基不能采用高压灭菌方法灭菌。( )
提示：可采用适当降低温度、压力(112 ℃，500 g/cm2)以及延长时间(30 min)的高压灭菌方法灭菌。
×
×
(科学实验和探究情境)在培养某种微生物时，防止其他微生物混入，保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术，称为无菌技术。
(1)培养基、双手和接种环分别采用什么方法进行灭菌或消毒处理？
提示：高压蒸汽灭菌、酒精擦拭、火焰灼烧。
(2)培养工作结束后，培养基等废弃物能否直接倾倒，为什么？
提示：不能，因为实验使用过的废弃物对环境有不确定性的影响，必须先经过高压灭菌后再倾倒。
(3)接种时为什么要靠近酒精灯的火焰？
提示：利用燃烧产生的上升气流减少空气中微生物落入培养基的可能性。
●(生活、学习和实践情境)市售的牛奶中有部分是采用巴氏消毒法杀菌的，通常称为“巴氏杀菌乳”(如图)。这种牛奶一般来说储存时间较短，其原因是什么？
提示：巴氏消毒法是采用相对温和的加热方式进行的消毒方法，该方法仅仅杀死物体表面或内部的一部分微生物(不包括芽孢和孢子)，因此长时间储存时，微生物有可能会慢慢繁殖起来，改变牛奶的品质，甚至产生有毒有害物质，危害健康。
灭菌、消毒与防腐的比较
【 典例应用 】
A
例3 (2024·绍兴高二期末)微生物的培养和分离实验通常需要进行高压蒸汽灭菌。下列相关叙述正确的是(　　)
A.实验前，可采用高压蒸汽灭菌法对实验器具和培养基进行灭菌
B.培养基中有尿素时，通过降低高压蒸汽灭菌的压力与温度即可
C.经高压蒸汽灭菌后的器具可直接用于微生物实验
D.实验后的培养基不需要进行高压灭菌，直接丢弃5
解析：无菌操作的首要条件是各种器具必须是无菌的，这些器具可用高压蒸汽灭菌法灭菌，A正确；
尿素受热会分解，只能用G6玻璃砂漏斗进行过滤除菌，但玻璃砂漏斗使用前也要在121 ℃下高压蒸汽灭菌，B错误；
通常要将高压蒸汽灭菌后的实验器具放入60～80 ℃的烘箱中烘干后再使用，C错误；
为防止污染环境，实验后的培养基需要高压灭菌后再丢弃，D错误。
例4 (2024·百校联盟高二联考)配制培养基是培养微生物的第一步，下列叙述正确的是(　　)
A.配制培养基时，需要在酒精灯火焰旁操作
B.获得纯净培养物的关键是阻止一切微生物生长
C.制作棉塞不能使用医用的脱脂棉
D.在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上可以继续使用
C
解析：配制培养基时，不需要在酒精灯火焰旁操作，接种时需要在酒精灯火焰旁操作，A错误；
获得纯净培养物的关键是无菌操作，保证目标微生物的生长，B错误；
在分装时培养基溅在三角瓶口和内壁上不能继续使用，D错误。
C
1.(2021·天津卷，1)下列操作能达到灭菌目的的是(　　)
A.用免洗酒精凝胶擦手 B.制作泡菜前用开水烫洗容器
C.在火焰上灼烧接种环 D.防疫期间用石炭酸喷洒教室
解析：用免洗酒精凝胶擦手的目的为消毒，A错误；
制作泡菜前用开水烫洗容器属于消毒操作，B错误；
在火焰上灼烧接种环能达到灭菌目的，C正确；
防疫期间用石炭酸喷洒教室，属于消毒操作，D错误。
2.(2018·全国卷Ⅱ，37节选)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
(1)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是____________________________________________________。
(2)密闭空间内的空气可采用紫外线照射灭菌，其原因是紫外线能______________________________________________。
(3)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少
使菌体的蛋白质和核酸变性
氯气
解析：(1)巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。
(2)紫外线照射能灭菌的原因是其能够使菌体的蛋白质和核酸变性。
(3)自来水通常采用氯气消毒。课时精练1 微生物的培养需要适宜条件
(时间：30分钟分值：50分)
选择题：第1～16题，每小题2分，共32分。
【基础对点】
题型1　培养基的成分和类型
1.欲观察某种微生物的菌落特征，应选择的培养基类型为(　　)
液体培养基 固体培养基
合成培养基 天然培养基
2.下列有关细菌培养的叙述，正确的是(　　)
固体培养基不含水分
培养细菌的培养基通常要将pH调整到中性偏酸
向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长
有的物质既可作碳源也可作氮源，碳源并不都能提供能量
3.(2024·9＋1联盟高二联考)不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养型微生物营养的描述中，错误的是(　　)
氮源物质为该微生物提供必要的氮素
碳源物质也是该微生物的能源物质
无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
水是该微生物的营养要素之一
4.如表所示为某培养基的配方，下列叙述错误的是(　　)
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至1 000 mL 0.1万单位
根据物理特征划分，该培养基属于液体培养基
微生物无法在该培养基表面形成肉眼可见的菌落
根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型
固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基
5.(2024·Z20联盟高二联考)甲、乙、丙为三种微生物，下表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是(　　)
项目 粉状 硫10g K2HPO4 4g FeSO4 0.5g 蔗糖 10g (NH4)2SO4 0.4 g H2O 100 mL MgSO4 9.25 g CaCl2 0.5 g
Ⅰ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
Ⅱ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅲ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
注：“＋”表示培养基中加入了这种物质，“－”表示培养基中没有加入这种物质。
甲、乙、丙都是异养型微生物
甲、乙都是自养型微生物，丙是异养型微生物
甲是异养型微生物，乙是固氮微生物，丙是自养型微生物
甲是固氮微生物，乙是自养型微生物，丙是异养型微生物
题型2　灭菌和无菌技术
6.下列实验用品通常需要进行高压蒸汽灭菌的是(　　)
A B
C D
7.下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是(　　)
高压蒸汽灭菌 　　 紫外灯照射
70%酒精浸泡灭菌 　　 过滤灭菌
8.(2024·温州新力量联盟高二联考)2020年，疫情中的最美逆行者，在给患者治疗时，要充分消毒并防护，以下说法中正确的是(　　)
医务人员进入工作区要全身灭菌
接种疫苗前要对注射区域进行消毒
消毒与灭菌的含义本质是相同的
常用的消毒方法有灼烧法和高压蒸汽法
9.(2024·台州高二期末)下列有关生物技术实践实验中的灭菌方法，错误的是(　　)
用高压蒸汽灭菌法对涂布器进行灭菌
尿素培养基用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌即可
含葡萄糖的培养基须在500 g/cm2压力下灭菌30 min
接种环在使用的过程中常通过灼烧灭菌
10.(2024·环大罗山联盟高二联考)下列关于灭菌及无菌操作的叙述，错误的是(　　)
微生物实验中通常用121 ℃(1 kg/cm2压力)对实验器具和培养基进行15～20 min的灭菌处理
接种间、培养间应定期采用紫外线或药物熏蒸的方法进行消毒或灭菌
接种过程中，打开塞子后和塞上塞子前都要将瓶口或试管口在酒精灯火焰上灼烧灭菌
全部培养工作结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须直接彻底洗涤或专门倾倒
11.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，实验中下列做法错误的是(　　)
对接种环进行灼烧处理
带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉
带菌培养基必须经加热后才能倒掉
操作者对双手进行酒精处理属于消毒
12.(2024·百校联盟联考)在器械灭菌时，通常会在高压蒸汽灭菌锅中放置生物指示剂来检验灭菌效果，自含型生物指示剂如图所示。为检验生物指示剂是否出现阳性变化，需用工具在塑料瓶外挤破安瓿瓶，使菌片浸没在培养液内。最终根据灭菌与未灭菌的生物指示剂的阳性变化情况，判断器械灭菌效果。下列叙述错误的是(　　)
安瓿瓶中培养液的作用是使芽孢复苏
菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌
挤破安瓿瓶后，需培养一段时间再观察是否出现阳性变化
若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌效果良好
题型3　配制马铃薯蔗糖培养基
13.(2024·七彩阳光联盟联考)为了培养酵母菌，需预先配制用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基。下列说法正确的是(　　)
制备斜面培养基时，试管中液体的量约为试管长度的1/3
1 kg/cm3、121 ℃高压蒸汽灭菌20 min后，应将斜面培养基摆成斜面
固体培养基的琼脂属于糖类，可以为酵母菌生长提供碳源
制作棉塞时，应该使用医用的脱脂棉，不能使用普通棉花
14.下列关于制备用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖斜面培养基的叙述，正确的是(　　)
应将琼脂加热溶化后加入马铃薯浸汁中
应先将培养基高压蒸汽灭菌再分装到试管中
应在高压蒸汽灭菌后将斜面培养基摆成斜面
分装时，试管中培养液的量应约为试管长度的1/2
15.下列有关微生物培养的叙述，错误的是(　　)
配制斜面培养基时要注意控制好温度，防止培养基提前凝固
配制液体培养基时，按需要量称取琼脂
试管的棉塞粗细要适当，不能使用医用的脱脂棉
微生物实验材料丢弃前一定要灭菌
【综合提升】
16.(2024·南京期中)无菌技术是获得纯净微生物培养物的关键。下列相关叙述正确的是(　　)
实验过程中所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，70%的酒精用来灭菌效果最好
试管口、瓶口等易被污染的部位，接种时可通过火焰灼烧来灭菌
不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
17.(18分)如表所示为某培养基的配方，请回答下列问题：
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万 单位
(1)(4分)从培养基的物理特征上看，该培养基属于________培养基，判断的依据是__________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(2)(4分)从培养基的化学成分上看，该培养基属于________培养基，判断的依据是__________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(3)(2分)该培养基中葡萄糖的主要作用是___________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(4)(2分)该培养基的氮源为________。
(5)(2分)该培养基中加入0.1万单位的青霉素，其作用可能是____________________________________________________________________。
(6)(4分)从无菌操作的角度分析，向该培养基中加入葡萄糖时，应采用的方法是____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
___________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
课时精练1　微生物的培养需要适宜条件
1．B　[微生物在固体培养基表面生长会形成肉眼可见的菌落。]
2．D　[固体培养基中也含有水分，因为含有凝固剂，所以呈固态，A错误；培养细菌的培养基通常要将pH调整到中性偏碱，B错误；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；有的物质既可作碳源也可作氮源，如蛋白胨，碳源并不都能提供能量，如CO2等，D正确。]
3．B　[CO2为无机物，只能做碳源而不能作为能源物质，B错误。]
4．D　[液体培养基中加入凝固剂(如琼脂)可形成固体培养基，题表所示的培养基配方中没有加凝固剂，因此属于液体培养基，A正确、D错误；微生物在固体培养基表面生长，可形成肉眼可见的菌落，B正确；该培养基中的(CH2O)可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，C正确。]
5．D　[由题表数据可知，Ⅰ是无氮培养基，只有能固氮的微生物才能在其上正常生长繁殖；Ⅱ是不含碳源的培养基，只有自养型微生物才能在其上正常生长繁殖；Ⅲ培养基含有氮源和碳源，营养成分全面，适合多种微生物生长繁殖。再结合题干分析可知，甲是固氮微生物、乙是自养型微生物、丙是异养型微生物，D正确。]
6．D　[接种环和涂布器通常需要进行灼烧灭菌，A、B错误；酒精灯不需要进行灭菌，C错误；试管需要进行高压蒸汽灭菌，D正确。]
7．D　[由于尿素受热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用过滤灭菌法，D正确。 ]
8．B　[医务人员进入工作区要全身消毒，A错误；灭菌是采用强烈的物理、化学方法杀灭物体表面以及内部的一切微生物的方法，在经过灭菌后的物体中，不再存在任何活着的生命；消毒则是采用较温和的物理、化学方法仅杀死物体表面或内部一部分不需要的微生物，C错误；常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等，D错误。]
9．B　[尿素需用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌后加入经高压蒸汽灭菌过的培养基中，制成尿素培养基，B错误。]
10．D　[全部培养工作结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须先经过高压灭菌后再洗涤或倾倒，D错误。]
11．C　[带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，简单的加热达不到灭菌效果，B正确，C错误。]
12．D　[检验生物指示剂是否出现阳性变化时，有活性的芽孢呈阳性，因此需要培养液使芽孢复苏，A正确；芽孢是细菌的休眠体，可以帮助细菌度过不良环境。因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌，B正确；芽孢复苏需要时间，所以挤破安瓿瓶后，需培养一段时间再观察是否出现阳性变化，C正确；若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌前没有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。]
13．B　[制备斜面培养基时，试管中液体的量约为试管长度的1/4，A错误；培养基中的琼脂虽属于糖类，但酵母菌无法分解利用，因此不能为酵母菌生长提供碳源，C错误；由于医用脱脂棉吸水后易引起污染，因此制作棉塞时应该使用普通棉花，不能使用医用脱脂棉，D错误。]
14．C　[应将琼脂加入马铃薯浸汁后再加热溶化，A错误；应先将培养基分装到试管中再进行高压蒸汽灭菌，B错误；分装时，试管中培养液的量应约为试管长度的1/4，D错误。]
15．B　[配制固体培养基时，按需要量称取琼脂，B错误。]
16．C　[微生物培养的器皿、接种用具和培养基等均需要灭菌，生物材料依据情况消毒或灭菌，A错误；酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，酒精用于消毒，不是灭菌，B错误；消毒是指采用较温和的物理、化学方法仅杀死物体表面或内部一部分不需要的微生物的过程，D错误。]
17．(1)液体　其成分中不含凝固剂
(2)合成　其化学成分完全清楚
(3)为微生物的生长提供碳源和能源
(4)NaNO3
(5)抑制细菌的生长
(6)可采用已在121 ℃下灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后，再在超净工作台内添加到培养基中；或采用适当降低温度、压力(112 ℃，500 g/cm2)以及延长时间(30 min)的高压蒸汽灭菌方法灭菌(共29张PPT)
课时精练1
微生物的培养需要适宜条件
(时间：30分钟　满分：50分)
B
题型1　培养基的成分和类型
1.欲观察某种微生物的菌落特征，应选择的培养基类型为(　　)
A.液体培养基 B.固体培养基
C.合成培养基 D.天然培养基
解析：微生物在固体培养基表面生长会形成肉眼可见的菌落。
2.下列有关细菌培养的叙述，正确的是(　　)
A.固体培养基不含水分
B.培养细菌的培养基通常要将pH调整到中性偏酸
C.向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长
D.有的物质既可作碳源也可作氮源，碳源并不都能提供能量
D
解析：固体培养基中也含有水分，因为含有凝固剂，所以呈固态，A错误；
培养细菌的培养基通常要将pH调整到中性偏碱，B错误；
破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；
有的物质既可作碳源也可作氮源，如蛋白胨，碳源并不都能提供能量，如CO2等，D正确。
3.(2024·9＋1联盟高二联考)不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养型微生物营养的描述中，错误的是(　　)
A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B.碳源物质也是该微生物的能源物质
C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D.水是该微生物的营养要素之一
解析：CO2为无机物，只能做碳源而不能作为能源物质，B错误。
B
4.如表所示为某培养基的配方，下列叙述错误的是(　　)
D
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O (CH2O) 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万
单位
A.根据物理特征划分，该培养基属于液体培养基
B.微生物无法在该培养基表面形成肉眼可见的菌落
C.根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型
D.固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基
解析：液体培养基中加入凝固剂(如琼脂)可形成固体培养基，题表所示的培养基配方中没有加凝固剂，因此属于液体培养基，A正确、D错误；
微生物在固体培养基表面生长，可形成肉眼可见的菌落，B正确；
该培养基中的(CH2O)可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，C正确。
5.(2024·Z20联盟高二联考)甲、乙、丙为三种微生物，下表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是(　　)
D
项目 粉状 硫10g K2HPO4 4g FeSO4 0.5g 蔗糖 10g (NH4)2SO4 0.4 g H2O 100 mL MgSO4 9.25 g CaCl2
0.5 g
Ⅰ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
Ⅱ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋
Ⅲ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
注：“＋”表示培养基中加入了这种物质，“－”表示培养基中没有加入这种物质。
A.甲、乙、丙都是异养型微生物
B.甲、乙都是自养型微生物，丙是异养型微生物
C.甲是异养型微生物，乙是固氮微生物，丙是自养型微生物
D.甲是固氮微生物，乙是自养型微生物，丙是异养型微生物
解析：由题表数据可知，Ⅰ是无氮培养基，只有能固氮的微生物才能在其上正常生长繁殖；Ⅱ是不含碳源的培养基，只有自养型微生物才能在其上正常生长繁殖；Ⅲ培养基含有氮源和碳源，营养成分全面，适合多种微生物生长繁殖。再结合题干分析可知，甲是固氮微生物、乙是自养型微生物、丙是异养型微生物，D正确。
题型2　灭菌和无菌技术
6.下列实验用品通常需要进行高压蒸汽灭菌的是(　　)
D
解析：接种环和涂布器通常需要进行灼烧灭菌，A、B错误；
酒精灯不需要进行灭菌，C错误；
试管需要进行高压蒸汽灭菌，D正确。
7.下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是(　　)
A.高压蒸汽灭菌 　　 B.紫外灯照射
C.70%酒精浸泡灭菌 　　 D.过滤灭菌
解析：由于尿素受热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用过滤灭菌法，D正确。
D
8.(2024·温州新力量联盟高二联考)2020年，疫情中的最美逆行者，在给患者治疗时，要充分消毒并防护，以下说法中正确的是(　　)
A.医务人员进入工作区要全身灭菌
B.接种疫苗前要对注射区域进行消毒
C.消毒与灭菌的含义本质是相同的
D.常用的消毒方法有灼烧法和高压蒸汽法
B
解析：医务人员进入工作区要全身消毒，A错误；
灭菌是采用强烈的物理、化学方法杀灭物体表面以及内部的一切微生物的方法，在经过灭菌后的物体中，不再存在任何活着的生命；消毒则是采用较温和的物理、化学方法仅杀死物体表面或内部一部分不需要的微生物，C错误；
常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等，D错误。
9.(2024·台州高二期末)下列有关生物技术实践实验中的灭菌方法，错误的是(　　)
A.用高压蒸汽灭菌法对涂布器进行灭菌
B.尿素培养基用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌即可
C.含葡萄糖的培养基须在500 g/cm2压力下灭菌30 min
D.接种环在使用的过程中常通过灼烧灭菌
解析：尿素需用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌后加入经高压蒸汽灭菌过的培养基中,制成尿素培养基，B错误。
B
10.(2024·环大罗山联盟高二联考)下列关于灭菌及无菌操作的叙述，错误的是(　　)
A.微生物实验中通常用121 ℃(1 kg/cm2压力)对实验器具和培养基进行15～20 min的灭菌处理
B.接种间、培养间应定期采用紫外线或药物熏蒸的方法进行消毒或灭菌
C.接种过程中，打开塞子后和塞上塞子前都要将瓶口或试管口在酒精灯火焰上灼烧灭菌
D.全部培养工作结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须直接彻底洗涤或专门倾倒
解析：全部培养工作结束后，所有使用过的器皿、废弃物等都必须先经过高压灭菌后再洗涤或倾倒，D错误。
D
11.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，实验中下列做法错误的是(　　)
A.对接种环进行灼烧处理
B.带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉
C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉
D.操作者对双手进行酒精处理属于消毒
解析：带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，简单的加热达不到灭菌效果，B正确，C错误。
C
12.(2024·百校联盟联考)在器械灭菌时，通常会在高压蒸汽灭菌锅中放置生物指示剂来检验灭菌效果，自含型生物指示剂如图所示。为检验生物指示剂是否出现阳性变化，需用工具在塑料瓶外挤破安瓿瓶，使菌片浸没在培养液内。最终根据灭菌与未灭菌的生物指示剂的阳性变化情况，判断器械灭菌效果。下列叙述错误的是(　　)
D
A.安瓿瓶中培养液的作用是使芽孢复苏
B.菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌
C.挤破安瓿瓶后，需培养一段时间再观察是否出
现阳性变化
D.若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌效果良好
解析：检验生物指示剂是否出现阳性变化时，有活性的芽孢呈阳性，因此需要培养液使芽孢复苏，A正确；
芽孢是细菌的休眠体，可以帮助细菌度过不良环境。因此菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌，B正确；
芽孢复苏需要时间，所以挤破安瓿瓶后，需培养一段时间再观察是否出现阳性变化，C正确；
若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌前没有活性芽孢，也就无法说明灭菌效果，D错误。
A.安瓿瓶中培养液的作用是使芽孢复苏
B.菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌
C.挤破安瓿瓶后，需培养一段时间再观察是否出现阳性变化
D.若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌效果良好
题型3　配制马铃薯蔗糖培养基
13.(2024·七彩阳光联盟联考)为了培养酵母菌，需预先配制用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基。下列说法正确的是(　　)
A.制备斜面培养基时，试管中液体的量约为试管长度的1/3
B.1 kg/cm3、121 ℃高压蒸汽灭菌20 min后，应将斜面培养基摆成斜面
C.固体培养基的琼脂属于糖类，可以为酵母菌生长提供碳源
D.制作棉塞时，应该使用医用的脱脂棉，不能使用普通棉花
B
解析：制备斜面培养基时，试管中液体的量约为试管长度的1/4，A错误；
培养基中的琼脂虽属于糖类，但酵母菌无法分解利用，因此不能为酵母菌生长提供碳源，C错误；
由于医用脱脂棉吸水后易引起污染，因此制作棉塞时应该使用普通棉花，不能使用医用脱脂棉，D错误。
14.下列关于制备用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖斜面培养基的叙述，正确的是(　　)
A.应将琼脂加热溶化后加入马铃薯浸汁中
B.应先将培养基高压蒸汽灭菌再分装到试管中
C.应在高压蒸汽灭菌后将斜面培养基摆成斜面
D.分装时，试管中培养液的量应约为试管长度的1/2
C
解析：应将琼脂加入马铃薯浸汁后再加热溶化，A错误；
应先将培养基分装到试管中再进行高压蒸汽灭菌，B错误；
分装时，试管中培养液的量应约为试管长度的1/4，D错误。
15.下列有关微生物培养的叙述，错误的是(　　)
A.配制斜面培养基时要注意控制好温度，防止培养基提前凝固
B.配制液体培养基时，按需要量称取琼脂
C.试管的棉塞粗细要适当，不能使用医用的脱脂棉
D.微生物实验材料丢弃前一定要灭菌
解析：配制固体培养基时，按需要量称取琼脂，B错误。
B
16.(2024·南京期中)无菌技术是获得纯净微生物培养物的关键。下列相关叙述正确的是(　　)
A.实验过程中所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B.酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，70%的酒精用来灭菌效果最好
C.试管口、瓶口等易被污染的部位，接种时可通过火焰灼烧来灭菌
D.不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
C
解析：微生物培养的器皿、接种用具和培养基等均需要灭菌，生物材料依据情况消毒或灭菌，A错误；
酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，酒精用于消毒，不是灭菌，B错误；
消毒是指采用较温和的物理、化学方法仅杀死物体表面或内部一部分不需要的微生物的过程，D错误。
17.如表所示为某培养基的配方，请回答下列问题：
成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO4 ·7H2O 葡萄糖 蒸馏水 青霉素
含量 3 g 1 g 0.5 g 30 g 定容至 1 000 mL 0.1万单位
(1)从培养基的物理特征上看，该培养基属于________培养基，判断的依据是_____________________________。
液体
其成分中不含凝固剂
(2)从培养基的化学成分上看，该培养基属于________培养基，判断的依据是_______________________________________。
(3)该培养基中葡萄糖的主要作用是_____________________________________。
(4)该培养基的氮源为________。
合成
其化学成分完全清楚
为微生物的生长提供碳源和能源
NaNO3
(5)该培养基中加入0.1万单位的青霉素，其作用可能是___________________________________________________________________。
(6)从无菌操作的角度分析，向该培养基中加入葡萄糖时，应采用的方法是____________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________。
抑制细菌的生长
可采用已在121 ℃下灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后，再在超净工作台内添加到培养基中；或采用适当降低温度、压力(112 ℃，500 g/cm2)以及延长时间(30 min)的高压蒸汽灭菌方法灭菌

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