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课时3　调整培养基的配方选择培养某种微生物并通过计数确定是否能满足生产需要
课时概念解析　本课时的概念为“通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物”“稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法”，这两个概念的构建需要以下基本概念或证据的支持：
(1)培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长；(2)稀释涂布平板法和显微镜计数法可用于测定微生物的数量。
概念1　稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量
1.利用稀释涂布平板法测定微生物的数量
2.利用显微镜计数法测定微生物的数量
(1)器材用具：显微镜、____________等。
(2)实验步骤
(3)计算公式
酵母细胞个数/mL＝___________________________________________。
[辨正误]
(1)使用血细胞计数板计数细胞时，应先滴加摇匀的细胞稀释液，再盖上盖玻片。(　　)
(2)利用显微镜计数法测定酵母菌数量时，采用“五点取样”对酵母细胞进行计数，由于事先确定了计数的区域，所以不能满足随机取样的要求。(　　)
(3)稀释涂布平板法测定出的微生物数目通常会比实际值偏大，显微镜计数法测定出的数目通常会比实际值偏小。(　　)
1.(科学实验和探究情境)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？__________________________________________
__________________________________________________________________
___________________________________________________________________
(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？__________________________________________________________________
___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(3)为什么统计的菌落数比活菌的实际数目低？___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
2.(科学实验和探究情境)某生物兴趣小组从土壤悬液中分离出酵母菌后进行了扩大培养，现欲通过血细胞计数板和显微镜了解培养液中酵母菌的密度。
请分析回答下列问题：
(1)如果用血细胞计数板计数细胞时进行如下图所示的操作，统计出来的数据比实际值会有何种偏差？正确的操作是什么？
___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(2)一次取样后，将样液稀释10倍，采用下图1所示血细胞计数板计数，在显微镜下观察到下图2所示的现象(“○”表示酵母菌)
对图2的中方格中酵母菌计数时，最佳计数路径是a～d中的哪一种？若以图2的计数结果作为应计数的5个中方格的平均值，则此样液中酵母菌的密度是多大？
____________________________________________________________________
1.稀释涂布平板法测定微生物数量
提醒：每一稀释倍数的菌液都至少要涂布3个平板，作为重复实验，求其平均值，若其中有菌落数与其他平板差别很大的，则需要重新实验。
2.两种微生物计数方法的比较
【典例应用】
例1 (2024·A9协作体联考)台盼蓝是一种活体染色剂，只能将死细胞染成深色，不能使活细胞着色。经台盼蓝染液染色后，将酵母菌培养液稀释100倍，用血细胞计数板(规格为1 mm×1 mm×0.1 mm)进行计数，观察到一个中方格的菌体数如图。相关叙述正确的是(　　)
A.将稀释液加入计数室，盖上盖玻片，再用吸水纸吸去多余的稀释液
B.为避免酵母菌增殖影响实验结果，滴加酵母菌稀释液后需立即计数
C.计数同一样品时，应统计计数室中的全部25个中方格，再取平均值
D.若用图示中方格内酵母菌代表整个计数室酵母菌的分布情况，则培养液中酵母菌的密度为2.25×108(个·mL－1)
例2 (2024·宁波高二期末)丙草胺是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某研究小组从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数(如图所示)，以期为修复污染土壤提供微生物资源。下列有关叙述错误的是(　　)
A.将培养基调至酸性时，有利于降解菌的生长繁殖
B.利用该方法的计数结果往往比显微镜计数法偏小
C.图示梯度稀释中土样的最大稀释倍数为106倍
D.以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养可提高降解菌的难度
概念2　调整培养基的配方和培养方式可有目的地培养某种微生物
1.选择培养基
2.能分解尿素的微生物的分离与计数(活动)
(1)实验原理
(2)实验步骤
提醒：鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物，如本实验中所使用的加入了酚红指示剂的培养基。
[辨正误]
(1)在不添加任何氮源的培养基上，只有能固氮的微生物才能生长。(　　)
(2)对需氧型微生物进行液体培养时，应该进行静置培养。(　　)
(3)过高的蔗糖浓度会抑制微生物生长，过低的蔗糖浓度又不能满足微生物生长的需要。(　　)
(4)微囊藻在氮磷比为4.5时生长最好，颤藻在氮磷比为0.45时生长最好。(　　)
(科学实验探究情境)为对能分解尿素的微生物进行分离和计数，某同学按照下表所示的配方配置了A培养基和B培养基：
培养基 配方
A 1 g蛋白胨、0.48 g酵母提取物、1g NaCl、2 g 琼脂，加水至100 mL
B 0.1 g葡萄糖、0.48 g NaCl、0.48 g K2HPO4、1 mg 酚红、2 g琼脂糖，尿素溶液40 mL，加水至60 mL
请分析下列问题：
(1)从物理性质看，A培养基属于何种培养基？从功能上看B培养基属于何种培养基？
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(2)B培养基是如何实现对分解尿素的微生物的筛选的？___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
(3)在B培养基中有许多菌落周围颜色未发生明显改变，应如何解释这一现象？___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
____________________________________________________________________
1.选择培养基与鉴别培养基的比较
2.微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用
【典例应用】
例3 (2024·强基联盟高二联考)硒是一种生命活动必需的微量元素。亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的一些富硒细菌可将其还原为红色单质硒。下图表示土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程。下列叙述错误的是(　　)
A.步骤②中可重复将1 mL菌液加入9 mL无菌水进行梯度稀释
B.图中步骤④的培养基属于鉴别培养基，原理是该培养基含红色的富硒细菌
C.步骤④中，可根据菌落周围出现红色区域对目的菌株进行筛选
D.通过同时培养灭菌的空白平板，可检测培养基灭菌是否合格
例4 (2024·绿谷联盟联考)某种除草剂(一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，按下图过程选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是(　　)
A.图中培养基在各种成分都溶化后且分装前进行灭菌
B.图中接种方法为平板划线法，该方法可以于细菌计数
C.实验过程中需要将培养皿中培养基调至中性偏碱
D.培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源相同
1.(2023·广东卷，10)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(　　)
A.A点时取样、尿素氮源培养基
B.B点时取样、角蛋白氮源培养基
C.B点时取样、蛋白胨氮源培养基
D.C点时取样、角蛋白氮源培养基
2.(2023·山东卷，15)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　)
A.不含氮源的平板不能用于微生物培养
B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
3.(2022·全国乙卷，37，改编)化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。
碳源 细胞干重(g/L) S产量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖废液 2.30 0.18
回答下列问题：
(1)通常在实验室培养微生物时，需要对所用的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有_________________________________________________________。
(2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是______________；用菌株C生产S的最适碳源是______________。菌株C的生长除需要碳源外，还需要______________________(答出2点即可)等营养物质。
(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是____________。
(4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：_____________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，其意义是___________________________________________________________________。
课时3　调整培养基的配方选择培养某种微生物
并通过计数确定是否能满足生产需要
概念1
自主建构
1．三　减小　平均值
2．(1)血细胞计数板　(2)盖玻片边缘　红细胞　五点取样　下　右　3　(3)80个小方格细胞总数/80×400×10 000×稀释倍数
辨正误
(1)×　提示：应先盖上盖玻片，再滴加摇匀的细胞稀释液。
(2)×　提示：采用“五点取样”对酵母细胞进行计数，虽然事先确定了计数的区域，但酵母细胞在中间和四个角上的方格中出现的概率是随机的，所以仍能满足随机取样的要求。
(3)×　提示：前者通常偏小，因为可能有的菌落是由两个或多个活菌繁殖形成；后者通常偏大，因为会把死细胞一并统计。
合作探究
1．(1)提示：不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。
(2)提示：不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。
(3)提示：当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
2．(1)提示：偏大。正确的操作应该是先盖上盖玻片，后滴细胞悬液。
(2)提示：a。5×107个/mL
典例应用
例1　D　[应先放置盖玻片，然后使稀释液从凹槽边缘处自行渗入计数室，A错误；滴加稀释液后等细胞沉降到计数室底部再开始计数，B错误；计数同一样品时，应统计计数室中的5个中方格(由图可知该血细胞计数板规格是25×16)，再取平均值，C错误；图中一个中方格16小方格中的酵母菌数总共有12个，其中3个被台盼蓝染色，说明为死细胞，不计数，则可计数酵母菌为9个，培养液中的酵母菌数为＝每个小方格中的平均酵母菌数×400个小方格×酵母菌培养稀释倍数×10 000，则该1 mL样品中酵母菌数约＝9÷16×400×100×10 000＝2.25×108(个·mL－1)，D正确。]
例2　A　[细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，A错误；该计数方法为稀释涂布平板法，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故计数结果比显微镜计数法偏小，B正确；图示5号试管的稀释倍数最大，为106倍，C正确；由题干信息可知，该实验的目的是从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，故培养基应以丙草胺为唯一氮源，该培养基中只有降解丙草胺的细菌菌株才能生长，其他微生物的生长会受到抑制，故用该培养基进行培养可提高降解菌的浓度，D正确。]
概念2
自主建构
1．化学成分　特定的微生物　抗性　敏感　固氮　目标微生物　特定的细胞
2．(1)脲　(2)倒置　恒温培养箱
辨正误
(1)√
(2)×　提示：对需氧型微生物进行液体培养时，应该进行振荡培养以保证氧气供应。
(3)√　(4)√
合作探究
(1)提示：A属于固体培养基。B属于选择培养基。
(2)提示：该培养基中唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能够分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，会因缺乏氮源而无法生长繁殖，所以用该培养基能够筛选出分解尿素的微生物。
(3)提示：这些未变色的菌落可能是自生固氮微生物或能直接吸收尿素并作为氮源的微生物，而不是能产生脲酶的微生物。
典例应用
例3　B　[稀释涂布平板法是采用梯度稀释后涂布的，为得到以10倍为梯度的稀释倍数，步骤②中可重复将1 mL菌液加入9 mL无菌水进行梯度稀释，A正确；图中步骤④的培养基属于鉴别培养基，土壤中的一些富硒细菌可将亚硒酸钠还原为红色单质硒，而其他细菌却没有这种能力，利用此原理可进行鉴定，B错误；步骤④中，如果菌落周围出现红色区域，则说明含有富硒细菌，为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围红色区域的大小，从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，接种于新的培养基平板，对菌株进行进一步的纯化，C正确；通过同时培养灭菌的空白平板，可检测培养基灭菌是否合格：若空白培养基无菌落生长，则证明灭菌合格，D正确。]
例4　C　[培养基在各种成分都溶化后，再分装到锥形瓶后进行灭菌，A错误；平板划线法不能计数，B错误；细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，C正确；培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源不同，有透明圈的，能够利用除草剂中的氮源，没有透明圈的，不能利用除草剂中的氮源，D错误。]
感悟真题
1．D　[研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此目标菌具有既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白的功能，所以在C点时取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，D正确。]
2．D　[不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须灭菌，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。]
3．(1)高压蒸汽灭菌等　(2)葡萄糖　制糖废液　氮源、无机盐、生长因子　(3)缺少淀粉酶
(4)设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度
(5)减少污染、节省原料、降低生产成本
解析　(1)防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键，对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有高压蒸汽灭菌等。(2)分析题干实验结果，以葡萄糖为碳源时，细胞干重最大，故菌株C生长的最适碳源是葡萄糖；以制糖废液为碳源时，S产量最高，故用菌株C生产S的最适碳源是制糖废液。微生物的生长需要水、无机盐、碳源、氮源以及特殊的营养物质，故菌株C的生长除需要碳源外，还需要氮源、无机盐、生长因子等营养物质。(3)由实验结果可知，菌株C可以利用葡萄糖，但在以淀粉为碳源时，菌株C不能生长，说明菌株C无法利用淀粉，分析其原因是菌株C不能合成淀粉酶，导致其无法利用淀粉。(4)以制糖废液作为碳源，进一步确定生产S的最适碳源浓度，可以以碳源浓度作为自变量，不同碳源浓度下S产量作为因变量，实验思路为：设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，从而确定最适碳源浓度。(共51张PPT)
第一章　发酵工程
课时3　
调整培养基的配方选择培养某种微生物并通过计数确定是否能满足生产需要
本课时的概念为“通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物”“稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法”，这两个概念的构建需要以下基本概念或证据的支持：
(1)培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长；(2)稀释涂布平板法和显微镜计数法可用于测定微生物的数量。
课时概念解析
目录 CONTENTS
1. 稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量
2.调整培养基的配方和培养方式可有目的地培养某种微生物
3.感悟真题
自主建构
合作探究
合作探究
课时概念图
自主建构
三
1.利用稀释涂布平板法测定微生物的数量
减小
平均值
2.利用显微镜计数法测定微生物的数量
(1)器材用具：显微镜、______________等。
血细胞计数板
(2)实验步骤
盖玻片边缘
红细胞
五点取样
下
右
3
(3)计算公式
酵母细胞个数/mL＝__________________________________________________。
80个小方格细胞总数/80×400×10 000×稀释倍数
×
[辨正误]
(1)使用血细胞计数板计数细胞时，应先滴加摇匀的细胞稀释液，再盖上盖玻片。( )
提示：应先盖上盖玻片，再滴加摇匀的细胞稀释液。
(2)利用显微镜计数法测定酵母菌数量时，采用“五点取样”对酵母细胞进行计数，由于事先确定了计数的区域，所以不能满足随机取样的要求。( )
提示：采用“五点取样”对酵母细胞进行计数，虽然事先确定了计数的区域，但酵母细胞在中间和四个角上的方格中出现的概率是随机的，所以仍能满足随机取样的要求。
(3)稀释涂布平板法测定出的微生物数目通常会比实际值偏大，显微镜计数法测定出的数目通常会比实际值偏小。( )
提示：前者通常偏小，因为可能有的菌落是由两个或多个活菌繁殖形成；后者通常偏大，因为会把死细胞一并统计。
×
×
1.(科学实验和探究情境)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？
提示：不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。
(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？
提示：不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。
●某同学在三种稀释度下吸取0.1 mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算105稀释度下1 g样品的活菌数。
提示：105的稀释度下取0.1 mL的菌液涂布的三个平板上的菌落数，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244(个)。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108(个)。
(3)为什么统计的菌落数比活菌的实际数目低？
提示：当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
2.(科学实验和探究情境)某生物兴趣小组从土壤悬液中分离出酵母菌后进行了扩大培养，现欲通过血细胞计数板和显微镜了解培养液中酵母菌的密度。
请分析回答下列问题：
(1)如果用血细胞计数板计数细胞时进行如下图所示的操作，统计出来的数据比实际值会有何种偏差？正确的操作是什么？
提示：偏大。正确的操作应该是先盖上盖玻片，后滴细胞悬液。
(2)一次取样后，将样液稀释10倍，采用下图1所示血细胞计数板计数，在显微镜下观察到下图2所示的现象(“○”表示酵母菌)
对图2的中方格中酵母菌计数时，最佳计数路径是a～d中的哪一种？若以图2的计数结果作为应计数的5个中方格的平均值，则此样液中酵母菌的密度是多大？
提示：a。5×107个/mL
1.稀释涂布平板法测定微生物数量
提醒：每一稀释倍数的菌液都至少要涂布3个平板，作为重复实验，求其平均值，若其中有菌落数与其他平板差别很大的，则需要重新实验。
2.两种微生物计数方法的比较
2.两种微生物计数方法的比较
2.两种微生物计数方法的比较
【典例应用 】
D
例1 (2024·A9协作体联考)台盼蓝是一种活体染色剂，只能将死细胞染成深色，不能使活细胞着色。经台盼蓝染液染色后，将酵母菌培养液稀释100倍，用血细胞计数板(规格为1 mm×1 mm×0.1 mm)进行计数，观察到一个中方格的菌体数如图。相关叙述正确的是(　　)
A.将稀释液加入计数室，盖上盖玻片，再用吸水纸吸
去多余的稀释液
B.为避免酵母菌增殖影响实验结果，滴加酵母菌稀释
液后需立即计数
C.计数同一样品时，应统计计数室中的全部25个中方格，再取平均值
D.若用图示中方格内酵母菌代表整个计数室酵母菌的分布情况，则培养液中酵母菌的密度为2.25×108(个·mL－1)
解析：应先放置盖玻片，然后使稀释液从凹槽边缘处自行渗入计数室，A错误；
滴加稀释液后等细胞沉降到计数室底部再开始计数，B错误；
计数同一样品时，应统计计数室中的5个中方格(由图可知该血细胞计数板规格是25×16)，再取平均值，C错误；
图中一个中方格16小方格中的酵母菌数总共有12个，其中3个被台盼蓝染色，说明为死细胞，不计数，则可计数酵母菌为9个，培养液中的酵母菌数为＝每个小方格中的平均酵母菌数×400个小方格×酵母菌培养稀释倍数×10 000，则该1 mL样品中酵母菌数约＝9÷16×400×100×10 000＝2.25×108(个·mL－1)，D正确。
A.将稀释液加入计数室，盖上盖玻片，再用吸水纸吸去多余的稀释液
B.为避免酵母菌增殖影响实验结果，滴加酵母菌稀释液后需立即计数
C.计数同一样品时，应统计计数室中的全部25个中方格，再取平均值
D.若用图示中方格内酵母菌代表整个计数室酵母菌的分布情况，则培养液中酵母菌的密度为2.25×108(个·mL－1)
例2 (2024·宁波高二期末)丙草胺是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某研究小组从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数(如图所示)，以期为修复污染土壤提供微生物资源。下列有关叙述错误的是(　　)
A.将培养基调至酸性时，有利于降解菌的生长繁殖
B.利用该方法的计数结果往往比显微镜计数法偏小
C.图示梯度稀释中土样的最大稀释倍数为106倍
D.以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养可提高
降解菌的难度
A
解析：细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，A错误；
该计数方法为稀释涂布平板法，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故计数结果比显微镜计数法偏小，B正确；
图示5号试管的稀释倍数最大，为106倍，C正确；
由题干信息可知，该实验的目的是从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，故培养基应以丙草胺为唯一氮源，该培养基中只有降解丙草胺的细菌菌株才能生长，其他微生物的生长会受到抑制，故用该培养基进行培养可提高降解菌的浓度，D正确。
A.将培养基调至酸性时，有利于降解菌的生长繁殖
B.利用该方法的计数结果往往比显微镜计数法偏小
C.图示梯度稀释中土样的最大稀释倍数为106倍
D.以丙草胺为唯一氮源的培养基进行培养可提高降解菌的难度
化学成分
1.选择培养基
特定的微生物
抗性
敏感
固氮
目标微生物
特定的细胞
2.能分解尿素的微生物的分离与计数(活动)
(1)实验原理
脲
(2)实验步骤
提醒：鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物，如本实验中所使用的加入了酚红指示剂的培养基。
倒置
恒温培养箱
√
[辨正误]
(1)在不添加任何氮源的培养基上，只有能固氮的微生物才能生长。( )
(2)对需氧型微生物进行液体培养时，应该进行静置培养。( )
提示：对需氧型微生物进行液体培养时，应该进行振荡培养以保证氧气供应。
(3)过高的蔗糖浓度会抑制微生物生长，过低的蔗糖浓度又不能满足微生物生长的需要。( )
(4)微囊藻在氮磷比为4.5时生长最好，颤藻在氮磷比为0.45时生长最好。( )
×
√
√
(科学实验探究情境)为对能分解尿素的微生物进行分离和计数，某同学按照下表所示的配方配置了A培养基和B培养基：
培养基 配方
A 1 g蛋白胨、0.48 g酵母提取物、1g NaCl、2 g 琼脂，加水至100 mL
B 0.1 g葡萄糖、0.48 g NaCl、0.48 g K2HPO4、1 mg 酚红、2 g琼脂糖，尿素溶液40 mL，加水至60 mL
请分析下列问题：
(1)从物理性质看，A培养基属于何种培养基？从功能上看B培养基属于何种培养基？
提示：A属于固体培养基。B属于选择培养基。
(2)B培养基是如何实现对分解尿素的微生物的筛选的？
提示：该培养基中唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能够分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，会因缺乏氮源而无法生长繁殖，所以用该培养基能够筛选出分解尿素的微生物。
(3)在B培养基中有许多菌落周围颜色未发生明显改变，应如何解释这一现象？
提示：这些未变色的菌落可能是自生固氮微生物或能直接吸收尿素并作为氮源的微生物，而不是能产生脲酶的微生物。
●(科学实验探究情境)已知刚果红是一种染料，它可以与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。
请回答下列问题：
(1)现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出实验方案。
提示：用“纤维素作为唯一碳源”的选择培养基进行培养，并在培养基中加入刚果红进行鉴别。在培养基上形成透明圈的菌落即为纤维素分解菌。
(2)怎么比较纤维素分解菌的分解能力？
提示：透明圈直径与菌落直径比值越大，说明分解纤维素的能力越强。
1.选择培养基与鉴别培养基的比较
2.微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用
●几种选择培养基的设计
●几种常用的鉴别培养基
B
例3 (2024·强基联盟高二联考)硒是一种生命活动必需的微量元素。亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的一些富硒细菌可将其还原为红色单质硒。下图表示土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程。下列叙述错误的是(　　)
【典例应用 】
A.步骤②中可重复将1 mL菌液加入9 mL
无菌水进行梯度稀释
B.图中步骤④的培养基属于鉴别培养基，
原理是该培养基含红色的富硒细菌
C.步骤④中，可根据菌落周围出现红色区域对目的菌株进行筛选
D.通过同时培养灭菌的空白平板，可检测培养基灭菌是否合格
解析：稀释涂布平板法是采用梯度稀释后涂布的，为得到以10倍为梯度的稀释倍数，步骤②中可重复将1 mL菌液加入9 mL无菌水进行梯度稀释，A正确；
图中步骤④的培养基属于鉴别培养基，土壤中的一些富硒细菌可将亚硒酸钠还原为红色单质硒，而其他细菌却没有这种能力，利用此原理可进行鉴定，B错误；
步骤④中，如果菌落周围出现红色区域，则说明含有富硒细菌，为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围红色区域的大小，从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，接种于新的培养基平板，对菌株进行进一步的纯化，C正确；
通过同时培养灭菌的空白平板，可检测培养基灭菌是否合格：若空白培养基无菌落生长，则证明灭菌合格，D正确。
A.步骤②中可重复将1 mL菌液加入9 mL无菌水进行梯度稀释
B.图中步骤④的培养基属于鉴别培养基，原理是该培养基含红色的富硒细菌
C.步骤④中，可根据菌落周围出现红色区域对目的菌株进行筛选
D.通过同时培养灭菌的空白平板，可检测培养基灭菌是否合格
例4 (2024·绿谷联盟联考)某种除草剂(一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，按下图过程选育能降解该除草剂的细菌。下列叙述正确的是(　　)
C
A.图中培养基在各种成分都溶化
后且分装前进行灭菌
B.图中接种方法为平板划线法，
该方法可以于细菌计数
C.实验过程中需要将培养皿中培养基调至中性偏碱
D.培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源相同
A.图中培养基在各种成分都溶化后且分装前进行灭菌
B.图中接种方法为平板划线法，该方法可以于细菌计数
C.实验过程中需要将培养皿中培养基调至中性偏碱
D.培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源相同
解析：培养基在各种成分都溶化后，再分装到锥形瓶后进行灭菌，A错误；
平板划线法不能计数，B错误；
细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，C正确；
培养基上形成的两种菌落中的细菌所利用的氮源不同，有透明圈的，能够利用除草剂中的氮源，没有透明圈的，不能利用除草剂中的氮源，D错误。
D
1.(2023·广东卷，10)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(　　)
A.A点时取样、尿素氮源培养基
B.B点时取样、角蛋白氮源培养基
C.B点时取样、蛋白胨氮源培养基
D.C点时取样、角蛋白氮源培养基
A.A点时取样、尿素氮源培养基
B.B点时取样、角蛋白氮源培养基
C.B点时取样、蛋白胨氮源培养基
D.C点时取样、角蛋白氮源培养基
解析：研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此目标菌具有既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白的功能，所以在C点时取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，D正确。
D
2.(2023·山东卷，15)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　)
A.不含氮源的平板不能用于微生物培养
B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
解析：不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；
平板涂布时涂布器使用前必须灭菌，B错误；
使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；
脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。
3.(2022·全国乙卷，37，改编)化合物S被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C可生产S，S的产量与菌株C培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S产量的影响，结果见表。
碳源 细胞干重(g/L) S产量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖废液 2.30 0.18
回答下列问题：
(1)通常在实验室培养微生物时，需要对所用的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有___________________________________________________________________。
(2)由实验结果可知，菌株C生长的最适碳源是______________；用菌株C生产S的最适碳源是______________。菌株C的生长除需要碳源外，还需要______________________(答出2点即可)等营养物质。
(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C不能生长，其原因是____________。
高压蒸汽灭菌等
葡萄糖
制糖废液
氮源、无机盐、生长因子
缺少淀粉酶
(4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实验思路：_______________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(5)利用制糖废液生产S可以实现废物利用，其意义是____________________________________________________________________。
设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，确定最适碳源浓度
减少污染、节省原料、降低生产成本
解析：(1)防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键，对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有高压蒸汽灭菌等。
(2)分析题干实验结果，以葡萄糖为碳源时，细胞干重最大，故菌株C生长的最适碳源是葡萄糖；以制糖废液为碳源时，S产量最高，故用菌株C生产S的最适碳源是制糖废液。微生物的生长需要水、无机盐、碳源、氮源以及特殊的营养物质，故菌株C的生长除需要碳源外，还需要氮源、无机盐、生长因子等营养物质。
(3)由实验结果可知，菌株C可以利用葡萄糖，但在以淀粉为碳源时，菌株C不能生长，说明菌株C无法利用淀粉，分析其原因是菌株C不能合成淀粉酶，导致其无法利用淀粉。
(4)以制糖废液作为碳源，进一步确定生产S的最适碳源浓度，可以以碳源浓度作为自变量，不同碳源浓度下S产量作为因变量，实验思路为：设计一系列不同浓度的制糖废液分别培养菌株C，测定不同浓度制糖废液中S产量，寻找S产量最大的碳源浓度，从而确定最适碳源浓度。课时精练3　调整培养基的配方选择培养某种微生物并通过计数确定是否能满足生产需要
(时间：30分钟分值：50分)
选择题：第1～11题，每小题3分，共33分。
【基础对点】
题型1　微生物的计数
1.下列有关微生物计数的描述错误的是(　　)
统计某一稀释度下的菌落数，至少计数3个平板并求平均值
活菌计数法因为观察的是菌落，所以统计值往往比活菌的实际数目高
显微镜直接计数法在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征
血细胞计数板能在显微镜下直接对菌液中的酵母细胞进行计数
2.(2024·朝阳区高二期末)为提高鱼体对饲料中脂肪源的利用效率，研究人员欲从罗非鱼肠道微生物中分离出油脂分解菌，下列说法错误的是(　　)
用液体培养基对罗非鱼肠道微生物进行富集培养
以豆油为唯一碳源的选择培养基筛选油脂分解菌
可通过平板划线法分离得到油脂分解菌的单菌落
未接种的全营养培养基作为对照防止灭菌不合格
3.测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，其中正确的是(　　)
涂布了一个平板，统计的菌落数是230
涂布了两个平板，统计的菌落数是216和260，取平均值是238
涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
涂布了三个平板，统计的菌落数分别是209、240和256，取平均值235
4.下列关于微生物数量测定的相关叙述，正确的是(　　)
通过稀释涂布平板法统计的活菌数一般低于实际的活菌数
利用显微镜进行计数时，可使用普通的载玻片完成计数
平板划线法除可以用于分离微生物外，也常用于统计细菌数目
应尽量选菌落数少的平板来统计，以确保一个菌落来自单个细菌
5.(2024·朝阳区高二期末)某实验小组利用滤膜法检测饮料中微生物的数量，原理是将待测样品通过微孔滤膜过滤富集后，再将滤膜置于培养基上培养，根据滤膜上的菌落数推算出样品中微生物的数量。过程如图所示。
下列说法错误的是(　　)
实验用到滤膜和水样都需要提前灭菌处理
用无菌水配制牛肉膏蛋白胨培养基，倒平板后进行高压蒸汽灭菌
统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少
滤膜孔径过大可能导致平板上长不出菌落
题型2　微生物的筛选与鉴定
6.分离土壤中分解尿素的细菌，可选用的培养基是(　　)
选项 尿素 琼脂糖 葡萄糖 硝酸盐
A ＋ ＋ ＋ ＋
B － － － －
C ＋ ＋ ＋ －
D ＋ － － ＋
注：“＋”表示加入，“－”表示不加。
A B
C D
7.“分离土壤中能分解尿素的微生物”实验中，配制LB全营养培养基的目的是(　　)
作为实验组，分离尿素分解菌
作为对照组，检测培养基灭菌是否彻底
作为对照组，观察尿素分解菌在含有酚红培养基上的菌落形态
作为对照组，观察全营养条件下能生长的土壤微生物的种类和数量
8.如图为“能分解尿素的微生物的分离与计数”的实验结果，下列叙述正确的是(　　)
图中采用平板划线分离法接种
图中①和②表示尿素培养基长出的菌落
图中③、④培养基中菌落生长代谢时，会释放CO2
实验结果表明，自然界中能合成脲酶的微生物比例较高
9.如图为“土壤中分解尿素的微生物的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　　)
3号试管的稀释倍数为103倍
5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个
4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数约为5号试管的10倍
该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高
【综合提升】
10.(2024·湖州高二期中)将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌(菌株a和b)进行如图所示的实验。下列叙述正确的是(　　)
注：图中完全培养基即基本培养基。
基本培养基中包含菌株a和b所需的特殊营养物质
菌株a和b需要的特殊营养物质有所不同
接种至基本培养基的方法是平板划线法
基本培养基出现的少量菌落皆为单菌落
11.(2024·台州高二期中)某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述正确的是(　　)
将细菌接种在固体培养基X上可采用平板划线法
根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
配制的培养基X需经高压蒸汽灭菌后直接倒平板
固体培养基X对菜品中的细菌没有选择性
12.(17分)(2024·嘉兴高二期末)木质素是一类复杂的有机聚合物，在细胞壁的形成中特别重要，赋予木材和树皮刚性且不容易腐烂的特性。科研人员从木材场土壤中筛选分离出木质素分解菌。实验流程如下图所示。已知木质素能与苯胺蓝结合形成蓝色复合物。回答下列问题：
(1)(2分)图示操作过程，共将1 g土壤稀释了________倍。
(2)(7分)图中对土壤悬浮液进行系列梯度稀释的目的是__________________________________________________________。
图示所用的接种方法是____________，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入恒温培养箱中进行培养，其中设置空平板的目的是____________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(3)(6分)采用苯胺蓝培养基筛选木质素降解菌时，得到了如图⑥所示的菌落，已知这些细菌均为异养型细菌，则图⑥所用的培养基是________________(填“以木质素为唯一碳源”或“添加了木质素的牛肉膏蛋白胨”)的培养基，原因是___________________________________________________________________
____________________________________________________________________。
(4)(2分)若要进一步筛选降解木质素能力强的菌株，可以从图⑥中菌________(填序号)获取。
课时精练3　调整培养基的配方选择培养某种微生物
并通过计数确定是否能满足生产需要
1．B　[为减小误差，统计某一稀释度下的菌落数，至少计数3个平板并求平均值，A正确；由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上显示的只是一个菌落，故活菌计数法的统计值往往比活菌的实际数目低，B错误。]
2．D　[未接种的以豆油为唯一碳源的选择培养基作为对照，防止灭菌不合格，D错误。]
3．D　[为了减小实验误差，需要涂布三个平板，A、B错误；三个平板之间的计数结果需相差不大，C错误，D正确。]
4．A　[利用稀释涂布平板法统计活菌时，当两个或多个细胞连在一起时，会形成一个菌落，导致统计结果低于实际的活菌数，A正确；利用显微镜进行计数时，需要使用血细胞计数板，B错误；平板划线法只适用于分离微生物，不能用于统计细菌数目，C错误；菌落数少，可能存在较大的随机误差，D错误。]
5．A　[实验用到的滤膜要提前灭菌处理，水样不能灭菌，A错误。]
6．C　[分离分解尿素的细菌，要以尿素为唯一氮源，不添加硝酸盐，分解尿素的细菌为异养型，则需添加碳源葡萄糖，分离微生物要用固体培养基，所以加琼脂糖，C正确。]
7．D　[配制LB全营养培养基的目的是作为对照组，观察全营养条件下能生长的土壤微生物的种类和数量，以区分选择培养基是否具有选择作用，D正确。]
8．C　[根据实验结果可知，图中采用的接种方法为稀释涂布平板法，A错误；图中①和②的菌落数明显多于③的菌落数，很可能是由于杂菌污染导致的，而不是分离出了以尿素为氮源的微生物，B错误；③、④已经分离出单个细菌繁殖而来的尿素分解菌的菌落，尿素分解菌含有脲酶，能够催化尿素分解成氨、CO2和水，C正确；根据实验结果，无法判断自然界中能合成脲酶的微生物比例较高，D错误。]
9．C　[3号试管的稀释倍数为104倍，A错误；5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为(168＋175＋167)÷3÷0.1×106＝1.7×109(个)，B错误；4号试管中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号试管的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号试管的10倍，C正确；稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个或多个细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，D错误。]
10．B　[单独培养菌株a和b时，培养基中均无菌落生长，而当菌株a和b共同培养时，培养基中有少量菌落产生，因此基本培养基无法提供它们单独生长的特殊营养物质，A错误；a单独培养和b单独培养均不能生长，a和b混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的特殊营养物质，且它们所需要特殊营养物质有所不同，B正确；根据菌株a和菌株b混合后菌落的分布情况可知，接种至基本培养基时使用的是稀释涂布平板法，C错误；基本培养基出现的少量菌落不一定都为单菌落，也有可能是重叠的菌落，D错误。]
11．D　[据题意可知，在固体培养基X上接种后还需进行计数，故只能用稀释涂布平板法而不能用平板划线法，A错误；在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，B错误；配制的培养基X需经高压蒸汽灭菌，冷却后倒平板，C错误；固体培养基X没有做任何处理，所以对菜品中的细菌没有选择性，D正确。]
12．(1)104
(2)保证每个菌落都是由一个单细胞发育而来　稀释涂布平板法　检验培养基灭菌是否合格
(3)添加了木质素的牛肉膏蛋白胨　菌5周围没有透明圈，说明菌5不是木质素分解菌；若所用培养基以木质素为唯一碳源，则不会出现菌5
(4)3
解析　(1)图示操作过程中，10 g土壤加入到90 mL无菌水中相当于将1 g土壤稀释了10倍，此后经过3次梯度稀释，因此图示操作完成后相当于1 g土壤稀释了104倍。(2)在涂布平板时，接种的土壤悬浮液浓度过高会使细菌数量增多，培养后菌落粘连在一起，不易得到单菌落，不能计数，因此需要对土壤悬浮液进行系列梯度稀释，目的是保证每个菌落都是由一个单细胞发育而来；图示所用的接种方法是稀释涂布平板法，设置空平板进行培养的目的是检验培养基灭菌是否合格，如果空平板长出了菌落，说明培养基灭菌不彻底，如果空平板没有长出菌落，说明培养基灭菌彻底。(3)步骤⑥所用的培养基上既出现有透明圈的菌1～4(木质素分解菌分解木质素形成)，也出现无透明圈的菌5(非木质素分解菌)，说明该培养基是添加了木质素的牛肉膏蛋白胨的培养基。(4)若要进一步筛选降解木质素能力强的菌株，则应选择透明圈比较大的菌种，因为透明圈越大，说明降解木质素的能力越强，可以从图⑥中菌3获取。(共33张PPT)
课时精练3
调整培养基的配方选择培养某种微生物并通过计数确定是否能满足生产需要
(时间：30分钟　满分：50分)
B
题型1　微生物的计数
1.下列有关微生物计数的描述错误的是(　　)
A.统计某一稀释度下的菌落数，至少计数3个平板并求平均值
B.活菌计数法因为观察的是菌落，所以统计值往往比活菌的实际数目高
C.显微镜直接计数法在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征
D.血细胞计数板能在显微镜下直接对菌液中的酵母细胞进行计数
解析：为减小误差，统计某一稀释度下的菌落数，至少计数3个平板并求平均值，A正确；由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上显示的只是一个菌落，故活菌计数法的统计值往往比活菌的实际数目低，B错误。
基础对点
01
02
类题
03
04
05
06
07
08
09
类题
10
11
类题
12
2.(2024·朝阳区高二期末)为提高鱼体对饲料中脂肪源的利用效率，研究人员欲从罗非鱼肠道微生物中分离出油脂分解菌，下列说法错误的是(　　)
A.用液体培养基对罗非鱼肠道微生物进行富集培养
B.以豆油为唯一碳源的选择培养基筛选油脂分解菌
C.可通过平板划线法分离得到油脂分解菌的单菌落
D.未接种的全营养培养基作为对照防止灭菌不合格
解析：未接种的以豆油为唯一碳源的选择培养基作为对照，防止灭菌不合格,D错误。
D
基础对点
01
02
类题
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类题
10
11
类题
12
●某同学利用血细胞计数板测量酵母菌培养液中酵母菌的密度时，显微镜下观察到的一个中方格的酵母菌分布情况，如图所示。下列相关叙述正确的是(　　)
D
基础对点
01
02
类题
03
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类题
10
11
类题
12
A.一块血细胞计数板中央有一个计数室
B.该计数板的一个计数室中有16个中方格
C.未对酵母菌染色会导致计数值比实际值偏小
D.需要对该酵母菌培养液稀释后再吸取滴加重新计数
解析：一块血细胞计数板中央有2个计数室，A错误；
该计数板的一个计数室中有25个中方格，每个中方格有16个小方格，B错误；
未对酵母菌染色会将死酵母菌计数在内，导致计数值比实际值偏大，C错误；
据图可知：图中酵母菌较密集，所以需要对该酵母菌培养液稀释后再重新计数，D正确。
A.一块血细胞计数板中央有一个计数室
B.该计数板的一个计数室中有16个中方格
C.未对酵母菌染色会导致计数值比实际值偏小
D.需要对该酵母菌培养液稀释后再吸取滴加重新计数
基础对点
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类题
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类题
10
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类题
12
3.测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，其中正确的是(　　)
A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B.涂布了两个平板，统计的菌落数是216和260，取平均值是238
C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163
D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是209、240和256，取平均值235
解析：为了减小实验误差，需要涂布三个平板，A、B错误；
三个平板之间的计数结果需相差不大，C错误，D正确。
D
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类题
12
4.下列关于微生物数量测定的相关叙述，正确的是(　　)
A.通过稀释涂布平板法统计的活菌数一般低于实际的活菌数
B.利用显微镜进行计数时，可使用普通的载玻片完成计数
C.平板划线法除可以用于分离微生物外，也常用于统计细菌数目
D.应尽量选菌落数少的平板来统计，以确保一个菌落来自单个细菌
A
基础对点
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类题
12
解析：利用稀释涂布平板法统计活菌时，当两个或多个细胞连在一起时，会形成一个菌落，导致统计结果低于实际的活菌数，A正确；
利用显微镜进行计数时，需要使用血细胞计数板，B错误；
平板划线法只适用于分离微生物，不能用于统计细菌数目，C错误；
菌落数少，可能存在较大的随机误差，D错误。
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12
5.(2024·朝阳区高二期末)某实验小组利用滤膜法检测饮料中微生物的数量，原理是将待测样品通过微孔滤膜过滤富集后，再将滤膜置于培养基上培养，根据滤膜上的菌落数推算出样品中微生物的数量。过程如图所示。
A
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类题
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10
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类题
12
下列说法错误的是(　　)
A.实验用到滤膜和水样都需要提前灭菌处理
B.用无菌水配制牛肉膏蛋白胨培养基，倒平
板后进行高压蒸汽灭菌
C.统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少
D.滤膜孔径过大可能导致平板上长不出菌落
解析：实验用到的滤膜要提前灭菌处理，水样不能灭菌，A错误。
题型2　微生物的筛选与鉴定
6.分离土壤中分解尿素的细菌，可选用的培养基是(　　)
C
基础对点
01
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类题
03
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类题
10
11
类题
12
选项 尿素 琼脂糖 葡萄糖 硝酸盐
A ＋ ＋ ＋ ＋
B － － － －
C ＋ ＋ ＋ －
D ＋ － － ＋
注：“＋”表示加入，“－”表示不加。
解析：分离分解尿素的细菌，要以尿素为唯一氮源，不添加硝酸盐，分解尿素的细菌为异养型，则需添加碳源葡萄糖，分离微生物要用固体培养基，所以加琼脂糖，C正确。
基础对点
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类题
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类题
10
11
类题
12
7.“分离土壤中能分解尿素的微生物”实验中，配制LB全营养培养基的目的是(　　)
A.作为实验组，分离尿素分解菌
B.作为对照组，检测培养基灭菌是否彻底
C.作为对照组，观察尿素分解菌在含有酚红培养基上的菌落形态
D.作为对照组，观察全营养条件下能生长的土壤微生物的种类和数量
解析：配制LB全营养培养基的目的是作为对照组，观察全营养条件下能生长的土壤微生物的种类和数量，以区分选择培养基是否具有选择作用，D正确。
D
基础对点
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类题
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类题
10
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类题
12
8.如图为“能分解尿素的微生物的分离与计数”的实验结果，下列叙述正确的是(　　)
C
基础对点
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类题
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A.图中采用平板划线分离法接种
B.图中①和②表示尿素培养基长出的菌落
C.图中③、④培养基中菌落生长代谢时，会释放CO2
D.实验结果表明，自然界中能合成脲酶的微生物比例较高
解析：根据实验结果可知，图中采用的接种方法为稀释涂布平板法，A错误；
图中①和②的菌落数明显多于③的菌落数，很可能是由于杂菌污染导致的，而不是分离出了以尿素为氮源的微生物，B错误；
③、④已经分离出单个细菌繁殖而来的尿素分解菌的菌落，尿素分解菌含有脲酶，能够催化尿素分解成氨、CO2和水，C正确；
根据实验结果，无法判断自然界中能合成脲酶的微生物比例较高，D错误。
A.图中采用平板划线分离法接种
B.图中①和②表示尿素培养基长出的菌落
C.图中③、④培养基中菌落生长代谢时，会释放CO2
D.实验结果表明，自然界中能合成脲酶的微生物比例较高
基础对点
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9.如图为“土壤中分解尿素的微生物的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　　)
C
基础对点
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A.3号试管的稀释倍数为103倍
B.5号试管的结果表明每克土壤
中的菌株数为1.7×108个
C.4号试管中稀释液进行平板培养
得到的菌落平均数约为5号试管的10倍
D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高
解析：3号试管的稀释倍数为104倍，A错误；
5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为(168＋175＋167)÷3÷0.1×106＝1.7×109(个)，B错误；
4号试管中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号试管的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号试管的10倍，C正确；
稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个或多个细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，D错误。
A.3号试管的稀释倍数为103倍
B.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个
C.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数约为5号试管的10倍
D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高
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类题
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●某同学依据下图操作步骤，从土壤中分离能分解尿素的微生物。其中尿素固体培养基和尿素液体培养基均以尿素为唯一氮源。下列叙述正确的是(　　)
C
基础对点
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A.尿素固体培养基比尿素液体培养基多了琼脂
B.以尿素为唯一氮源的培养基的灭菌方式是过滤除菌
C.利用液体培养基的培养需要振荡以提高营养成分的利用率
D.两种步骤获得的菌落比值相等(甲1/甲2＝乙1/乙2)
解析：尿素固体培养基比尿素液体培养基多了琼脂和酚红指示剂，A错误；
以尿素为唯一氮源的培养基的灭菌方式是高压蒸汽灭菌，其中的尿素溶液用过滤除菌，B错误；
利用液体培养基进行培养的过程中，通过振荡可以提高营养成分的利用率，C正确；
两种步骤获得的菌落比值关系为(甲1/甲2＞乙1/乙2)，因为后者经过了对尿素分解菌的选择培养，所以尿素分解菌的比例变大，D错误。
A.尿素固体培养基比尿素液体培养基多了琼脂
B.以尿素为唯一氮源的培养基的灭菌方式是过滤除菌
C.利用液体培养基的培养需要振荡以提高营养成分的利用率
D.两种步骤获得的菌落比值相等(甲1/甲2＝乙1/乙2)
10.(2024·湖州高二期中)将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌(菌株a和b)进行如图所示的实验。下列叙述正确的是(　　)
B
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A.基本培养基中包含菌株a和b所需的特殊营养物质
B.菌株a和b需要的特殊营养物质有所不同
C.接种至基本培养基的方法是平板划线法
D.基本培养基出现的少量菌落皆为单菌落
注：图中完全培养基即基本培养基。
解析：单独培养菌株a和b时，培养基中均无菌落生长，而当菌株a和b共同培养时，培养基中有少量菌落产生，因此基本培养基无法提供它们单独生长的特殊营养物质，A错误；
a单独培养和b单独培养均不能生长，a和b混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的特殊营养物质，且它们所需要特殊营养物质有所不同，B正确；
根据菌株a和菌株b混合后菌落的分布情况可知，接种至基本培养基时使用的是稀释涂布平板法，C错误；
基本培养基出现的少量菌落不一定都为单菌落，也有可能是重叠的菌落，D错误。
注：图中完全培养基即基本培养基。
A.基本培养基中包含菌株a和b所需的特殊营养物质
B.菌株a和b需要的特殊营养物质有所不同
C.接种至基本培养基的方法是平板划线法
D.基本培养基出现的少量菌落皆为单菌落
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11.(2024·台州高二期中)某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述正确的是(　　)
D
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A.将细菌接种在固体培养基X上
可采用平板划线法
B.根据菌落的特征可以准确判断
细菌的种类
C.配制的培养基X需经高压蒸汽灭菌后直接倒平板
D.固体培养基X对菜品中的细菌没有选择性
解析：据题意可知，在固体培养基X上接种后还需进行计数，故只能用稀释涂布平板法而不能用平板划线法，A错误；
在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，B错误；
配制的培养基X需经高压蒸汽灭菌，冷却后倒平板，C错误；
固体培养基X没有做任何处理，所以对菜品中的细菌没有选择性，D正确。
A.将细菌接种在固体培养基X上可采用平板划线法
B.根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
C.配制的培养基X需经高压蒸汽灭菌后直接倒平板
D.固体培养基X对菜品中的细菌没有选择性
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●(2024·七彩阳光联盟联考)E－test药敏试验是检测细菌抗药性的常用方法，E－test试纸条上不同刻度处含有对应度的抗生素，将其紧贴于已均匀涂布待测菌液的培养基表面培养24 h，抑菌圈与试纸条相交处的读数刻度，即为该抗生素可抑制细菌生长的最低浓度，记作MIC，将所测数值与国际标准MIC值进行比对即可反映细菌的耐药情况，科学家以人胃幽门螺杆菌为材料，分别检测了抗生素A、B以及某一浓度抗生素A存在时抗生素B的MIC，结果如下图所示，以下说法正确的是(　　)
A
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A.配制该菌培养基时，应将pH调至中性或弱碱性
B.根据抑菌圈的面积大小可得出结论，抗生素B的
抑菌效果一定大于抗生素A
C.若测得某人体内的幽门螺杆菌MICA的数值高于
标准MIC值，说明抗生素A的疗效较好
D.某一浓度抗生素A存在时抗生素B的MIC值下降，可尝试抗生素A与B联合用于临床治疗
解析：体外培养幽门螺杆菌(细菌)的培养基，应将pH调至中性或弱碱性，A正确；
已知该抗生素可抑制细菌生长的最低浓度记作MIC，MIC越小，说明抑菌能力越强，根据MICA的最小值在4～8之间，而MICB的最小值在8～16之间，可知抗生素A的抑菌效果大于抗生素B，B错误；
MIC越小，说明抑菌能力越强，因此若测得某人体内的幽门螺杆菌MICA的数值高于标准MIC值，说明抗生素A的疗效较差，C错误；
据图可知，某一浓度抗生素A存在时抗生素B的MIC值下降，只能说明该浓度的抗生素A与B联合使用可增强抑菌效果，若要将抗生素A与B联合用于临床治疗，还需要探究其他浓度的抗生素A与B联合抑菌的效果，D错误。
A.配制该菌培养基时，应将pH调至中性或弱碱性
B.根据抑菌圈的面积大小可得出结论，抗生素B的抑菌效果一定大于抗生素A
C.若测得某人体内的幽门螺杆菌MICA的数值高于标准MIC值，说明抗生素A的疗效较好
D.某一浓度抗生素A存在时抗生素B的MIC值下降，可尝试抗生素A与B联合用于临床治疗
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12.(2024·嘉兴高二期末)木质素是一类复杂的有机聚合物，在细胞壁的形成中特别重要，赋予木材和树皮刚性且不容易腐烂的特性。科研人员从木材场土壤中筛选分离出木质素分解菌。实验流程如下图所示。已知木质素能与苯胺蓝结合形成蓝色复合物。回答下列问题：
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(1)图示操作过程，共将1 g土壤稀释了________倍。
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(2)图中对土壤悬浮液进行系列梯度稀释的目的是___________________________________________________________________。
图示所用的接种方法是____________________，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入恒温培养箱中进行培养，其中设置空平板的目的是___________________________________________。
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保证每个菌落都是由一个单细胞发育而来
稀释涂布平板法
检验培养基灭菌是否合格
(3)采用苯胺蓝培养基筛选木质素降解菌时，得到了如图⑥所示的菌落，已知这些细菌均为异养型细菌，则图⑥所用的培养基是___________________________
(填“以木质素为唯一碳源”或“添加了木质素的牛肉膏蛋白胨”)的培养基，原因是_______________________________________________________________
____________________________________________________________________。
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添加了木质素的牛肉膏蛋白胨
菌5周围没有透明圈，说明菌5不是木质素分解菌；若所用培养基以木质素为唯一碳源，则不会出现菌5
(4)若要进一步筛选降解木质素能力强的菌株，可以从图⑥中菌________(填序号)获取。
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3
解析：(1)图示操作过程中，10 g土壤加入到90 mL无菌水中相当于将1 g土壤稀释了10倍，此后经过3次梯度稀释，因此图示操作完成后相当于1 g土壤稀释了104倍。
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(2)在涂布平板时，接种的土壤悬浮液浓度过高会使细菌数量增多，培养后菌落粘连在一起，不易得到单菌落，不能计数，因此需要对土壤悬浮液进行系列梯度稀释，目的是保证每个菌落都是由一个单细胞发育而来；图示所用的接种方法是稀释涂布平板法，设置空平板进行培养的目的是检验培养基灭菌是否合格，如果空平板长出了菌落，说明培养基灭菌不彻底，如果空平板没有长出菌落，说明培养基灭菌彻底。
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(3)步骤⑥所用的培养基上既出现有透明圈的菌1～4(木质素分解菌分解木质素形成)，也出现无透明圈的菌5(非木质素分解菌)，说明该培养基是添加了木质素的牛肉膏蛋白胨的培养基。
(4)若要进一步筛选降解木质素能力强的菌株，则应选择透明圈比较大的菌种，因为透明圈越大，说明降解木质素的能力越强，可以从图⑥中菌3获取。
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