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山东省菏泽市曹县第一中学2024-2025学年高二下学期期中模拟生物试题
一、单选题
1．以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是（ ）
A．①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死
B．②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌
C．③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入
D．④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低
2．镇江陈醋具有“色、香、酸、醇、浓”之特色，其主要工艺流程如下图。相关叙述正确的是（ ）

A．作为工业生产，镇江陈醋的酿制过程需要做到严格无菌
B．“淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，有助于霉菌的糖化等过程
C．接种醋酸菌后的固态发酵需要“翻缸”，主要目的是抑制杂菌
D．后发酵时间越长，醋体中风味物质的不断堆积导致醋品更佳
3．研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（　　）

A．a点时取样、蛋白胨氮源培养基 B．b点时取样、角蛋白氮源培养基
C．c点时取样、蛋白胨氮源培养基 D．c点时取样、角蛋白氮源培养基
4．安莎霉素主要用于治疗结核分枝杆菌导致的肺部感染。该抗生素是一种产自深海的赖氨酸缺陷型放线菌所产生的。为筛选出能产安莎霉素的菌种，科研工作者用紫外线对采自深海的放线菌进行诱变与选育，实验的部分流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ）

注：原位影印可确保在一系列平板培养基的相同位置上接种并培养出相同菌落。
A．经过A处理，试管中大多数放线菌都可产生安莎霉素
B．在①中进行扩大培养时，接种后需对培养基进行灭菌处理
C．②和④是完全培养基，③是缺赖氨酸的不完全培养基
D．D菌落不能产生安莎霉素，而E菌落能产生安莎霉素
5．含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（ ）
A．乙菌的运动能力比甲菌强
B．为不影响菌的运动需选用液体培养基
C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量
D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
6．为探究提高“日照蓝莓”品质和产量的新途径，某生物兴趣小组的同学以“日照蓝莓”的主要品种——兔眼蓝莓为实验材料进行脱毒处理，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述正确的是（　　）
A．取材时可选用兔眼蓝莓的芽尖等分生组织作为外植体
B．用体积分数为70%的酒精和质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液对外植体消毒时，消毒时间尽可能长一些，以避免造成伤害
C．再分化过程中诱导出芽和诱导生根不需要更换培养基
D．脱毒后的兔眼蓝莓果实体积更大，产量更高，后代个体中更不易被病毒感染
7．利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是（　　）
A．该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量
B．植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产
C．次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养
D．利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物
8．一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗 p72 的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是（ ）
A．注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大
B．单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合
C．利用该小鼠只能制备出一种抗 p72 的单抗
D．p72 部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况
9．抗体结构分为可变区（V区）和恒定区（C区），与抗原特异性结合的区域被称为CDR区，位于V区中。由杂交瘤技术制备的鼠源单抗可诱导人体产生抗单抗抗体（ADAs），从而降低其治疗效果。单克隆抗体经过了四代的发展：小鼠单克隆抗体→嵌合单克隆抗体（将小鼠V区代替人类V区）→人源化单克隆抗体（只有小鼠来源的CDR区，其余由人类免疫球蛋白G框架组成）→全人源单克隆抗体。下列关于单克隆抗体的叙述，正确的是（ ）
A．杂交瘤细胞一般是由小鼠的骨髓瘤细胞和浆细胞融合形成的
B．嵌合单克隆抗体、人源化单克隆抗体诱发产生ADAs的强度依次升高
C．人鼠嵌合单抗的制备过程涉及蛋白质工程和细胞工程等生物技术
D．人编码抗体的基因转移至小鼠中，小鼠表达出的均为完全人源化单抗
10．小鼠正常2细胞期胚胎经过电融合诱导形成四倍体胚胎，四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育形成胎盘等胚体以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。将ES细胞和四倍体胚胎聚合形成新的重构胚，可发育成完整小鼠个体，称为四倍体补偿技术。下列说法错误的是（　　）
A．重构胚中的ES细胞具有自我更新能力，但很难分化为胎盘等胚外组织
B．重构胚发育至桑葚胚或囊胚再移植到生理状态相同的小鼠子宫内才能发育成完整小鼠个体
C．通过四倍体补偿技术得到的小鼠个体的基因型与供体ES细胞的基因型不同
D．利用四倍体补偿技术，可将ES细胞经过体外遗传学修饰，得到经过人为修饰的目的小鼠
11．“筛选”是生物技术与工程中重要的环节。下列叙述正确的是（　　）
A．用选择培养基筛选微生物，对照组不接种微生物，实验组接种微生物
B．诱导植物原生质体融合时，观察是否再生细胞壁可筛选异种融合细胞
C．制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞
D．胚胎移植前可取囊胚期内细胞团的细胞进行性别鉴定和遗传病筛查
12．用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　）

A．若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同
B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因
C．若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否
D．若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落
13．某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（ ）
A．增加模板DNA的量 B．延长热变性的时间
C．延长延伸的时间 D．提高复性的温度
14．荧光定量PCR可定量检测样本中DNA含量，其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针，当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针并生成荧光分子，即DNA每扩增一次，就有个荧光分子光生成（如图），荧光监测系统随时接收荧光信号变化。下列叙述错误的有（ ）
A．图示引物与胞内DNA复制所用引物的化学本质不同
B．耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸的方向均为5'→3'
C．一段待扩增的DNA经过4次循环后，等长目标片段所占比例为1/3
D．反应管内荧光信号到达设定阀值所经历的循环数，与样本DNA浓度呈负相关
15．将一段编码序列（CDS）插入到一个载体上，将该载体命名为pVN2024。如图A所示，将CDS插入到载体的SacⅡ位点，该位点位于lacZ基因的MCS区（含多个酶切位点），CDS的终止子上游0.8kb处有一个PstⅠ的酶切位点。为确认CDS的大小和插入方向，科研人员用不同的限制酶切割重组质粒并进行电泳，结果如图B。下列说法错误的是（ ）

A载体示意图，方框内表示载体中限制酶识别位点；B不同限制酶切割产物的电泳示意图，M为标准电泳条带
A．SpeⅠ酶切可用于判断CDS插入的方向
B．与lacZ基因相比，CDS插入时方向相反
C．CDS长度为2.6kb，在距一端0.5kb处有一个EcoRI识别位点
D．若重组质粒同时用EcoRⅠ和SpeⅠ酶切，电泳能检测到4个不同条带
二、多选题
16．灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害。为了绿色、高效地防治灰霉病，科研人员从灰霉病多发的大棚土壤中取样、分离出多种单菌落并进行扩大培养，随后将各组微生物的无菌发酵滤液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后在平板中央接种灰葡萄孢，通过比较灰葡萄孢菌丝生长情况，从而筛选出高效的灰葡萄孢拮抗菌。相关叙述正确的是（ ）
A．在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌
B．取无菌发酵滤液的目的是用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用
C．为筛选出高效拮抗菌，只需要在普通培养基接种等量灰葡萄孢作为对照
D．灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏的组别对应的微生物即为最高效拮抗菌
17．科学家将4个关键基因移植入已分化的肌肉细胞中并表达，使这个细胞成为多能干细胞(iPS细胞)，如图为该实验示意图。下列有关叙述不正确的是（ ）
A．图示过程体现了iPS细胞的全能性
B．iPS细胞所带遗传信息与肌肉细胞相同
C．关键基因表达使细胞功能趋向专门化，降低了细胞的分化程度
D．应用该技术可缓解器官移植时器官供应不足的问题
18．猪体内隐藏的病毒少，是人类器官移植的优质供体。为防止免疫排斥，科研人员培育了用于器官移植的基因编辑猪，具体流程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．CMAH基因和β4GalNT2基因可能是抗原决定基因
B．从1号收集的卵母细胞需在体外培养到MⅡ期再进行去核处理
C．可用电刺激、Ca2+载体、蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚
D．胚胎移植前需用促性腺激素对3号进行同期发情和超数排卵处理
19．最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP或ddTTP），子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧腺苷三磷酸（dATP），继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述正确的是（　　）
A．上述PCR反应体系中只加入一种引物
B．电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢
C．5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列
D．患者该段序列中某位点的碱基C突变为G
20．人干扰素（IFN）是机体免疫细胞产生的一类细胞因子。用白细胞生产干扰素时，每个细胞最多只能产生100～1000个干扰素分子，而用基因工程技术改造的大肠杆菌发酵生产（原理如图），在1～2天内每个菌体能产生20万个干扰素分子。天然的干扰素在体外保存相当困难，如果将干扰素分子上的一个半胱氨酸变为丝氨酸，在一定条件下可以延长保存时间。下列说法错误的是（　　）
A．基因工程核心步骤需要的工具酶有DNA聚合酶、限制酶、DNA连接酶，其作用部位都是磷酸二酯键
B．将重组质粒导入大肠杆菌常用显微注射技术
C．酵母菌或大肠杆菌都可作受体菌，二者生产的干扰素在结构上没有区别
D．为延长保存时间，对干扰素进行改造，需通过改造干扰素基因来实现
三、实验题
21．啤酒经酵母菌发酵酿制而成。生产中，需从密闭的发酵罐中采集酵母菌用于再发酵，而直接开罐采集的传统方式会损失一些占比很低的独特菌种。研究者探究了不同氧气含量下酵母菌的生长繁殖及相关调控，以优化采集条件。
(1)酵母菌是兼性厌氧微生物，在密闭发酵罐中会产生 和CO2。有氧培养时，酵母菌增殖速度明显快于无氧培养，原因是酵母菌进行有氧呼吸，产生大量 。
(2)本实验中，采集是指取样并培养4天。在不同的气体条件下从发酵罐中采集酵母菌，统计菌落数（图甲）。由结果可知，有利于保留占比很低菌种的采集条件是 。
(3)根据上述实验结果可知，采集酵母菌时O2浓度的陡然变化会导致部分菌体死亡。研究者推测，酵母菌接触O2的最初阶段，细胞产生的过氧化氢（H2O2）浓度会持续上升，使酵母菌受损。已知H2O2能扩散进出细胞。研究者在无氧条件下从发酵罐中取出酵母菌，分别接种至含不同浓度H2O2的培养基上，无氧培养后得到如图乙所示结果。请判断该实验能否完全证实上述推测，并说明理由 。
(4)上述推测经证实后，研究者在有氧条件下从发酵罐中取样并分为两组，A组菌液直接滴加到H2O2溶液中，无气泡产生；B组菌液有氧培养4天后，取与A组活菌数相同的菌液，滴加到H2O2溶液中，出现明显气泡。结果说明，酵母菌可通过产生 以抵抗H2O2的伤害。
22．驹形杆菌可合成细菌纤维素（BC）并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性能优异的生物材料，BC膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表达载体，将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC膜并可实现光控染色的工程菌株，为新型纺织原料的绿色制造及印染工艺升级提供了新思路（图一）。
回答下列问题：
(1)研究者优化了培养基的 （答两点）等营养条件，并控制环境条件，大规模培养工程菌株后可在气液界面处获得BC菌膜（菌体和 BC膜的复合物）。
(2)研究者利用T7 噬菌体来源的RNA聚合酶（T7RNAP）及蓝光光敏蛋白标签，构建了一种可被蓝光调控的基因表达载体（光控原理见图二a，载体的部分结构见图二b）。构建载体时，选用了通用型启动子 PBAD（被工程菌 RNA 聚合酶识别）和特异型启动子PT7（仅被T7RNAP识别）。为实现蓝光控制染色，启动子①②及③依次为 ，理由是 。
(3)光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，其作用为 （答两点）。
(4)根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只有经蓝光照射的区域被染成黑色，其原因是 。
(5)有企业希望生产其他颜色图案的BC膜。按照上述菌株的构建模式提出一个简单思路 。
四、解答题
23．基因递送是植物遗传改良的重要技术之一，我国多个实验室合作开发了一种新型基因递送系统（切—浸—生芽Cut-Dip-Budding，简称CDB法）。图1与图2分别是利用常规转化法和CDB法在某植物中递送基因的示意图。

回答下列问题。
(1)图1中，从外植体转变成愈伤组织的过程属于 ；从愈伤组织到幼苗的培养过程需要的激素有生长素和 ，该过程还需要光照，其作用是 。
(2)图1中的愈伤组织，若不经过共培养环节，直接诱导培养得到的植株可以保持植株A的 。图1中，含有外源基因的转化植株A若用于生产种子，其包装需标注 。
(3)图1与图2中，农杆菌侵染植物细胞时，可将外源基因递送到植物细胞中的原因是 。
(4)已知某酶（PDS）缺失会导致植株白化。某团队构建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体（含有绿色荧光蛋白标记基因），利用图2中的CDB法将该重组载体导入植株B，长出毛状根，成功获得转化植株B．据此分析，从毛状根中获得阳性毛状根段的方法是 ，图2中，鉴定导入幼苗中的基因编辑载体是否成功发挥作用的方法是 ，依据是 。
(5)与常规转化法相比，采用CDB法进行基因递送的优点是 （答出2点即可）。
24．如图是研究人员培育能生产人血清白蛋白牛乳的转基因母牛的过程。回答下列问题：
(1)获能后的精子与卵细胞相遇时，首先它释放出 ，以溶解卵细胞膜外的一些结构。判断卵细胞受精的标志通常是 。
(2)过程②利用的技术是 ，过程⑤的操作的其优势是 。在进行⑤之前需要对胚胎进行性别鉴定，题中应选择性染色体组成为 的胚胎进行操作。
(3)研究人员将早期胚胎进行分割后进行⑤操作，结果接受分割胚胎的其中一头健康母牛发生流产。从胚胎分割的角度分析，造成这种现象的原因可能是 。
(4)核移植的受体是去核的卵母细胞，卵母细胞中的核是指 ，选用去核卵母细胞做受体不仅因为其体积大易操作，卵黄中营养物质丰富最主要原因为 。
(5)过程①中的质粒作为常用的载体，需要具备的条件是 。(答出2点)。
五、解答题组
25．某抗膜蛋白治疗性抗体药物研发过程中，需要表达N蛋白胞外段，制备相应的单克隆抗体，增加其对N蛋白胞外段特异性结合的能力。
Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制备，流程如图1
(1)构建重组慢病毒质粒时，选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，目的是 。用脂质体将重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞，质粒被包在脂质体 （填“双分子层中”或“两层磷脂分子之间”）。
(2)质粒在包装细胞内组装出由 组成的慢病毒，用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。
Ⅱ．N蛋白胞外段单克隆抗体制备，流程如图2
(3)用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠脾组织用 酶处理，制成细胞悬液，置于含有混合气体的 中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。
(4)用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行 培养。用 技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集 ，提取单克隆抗体。在体外培养液中进行培养时，接种入培养液中杂交瘤细胞的数量是影响单克隆抗体产量的重要因素之一，为探究一定培养液中接种杂交瘤细胞的最佳数量，请写出实验思路： 。
(5)利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成 ，实现特异性治疗。
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
答案 C B D C B A D D C C
题号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
答案 C D D C A ABD ABC ABC AC ABC
21．(1) 酒精/C2H5OH ATP
(2)无氧取样，无氧培养
(3)不能，因为没有“接触 O2 后，酵母菌内源 H2O2 浓度上升”的证据
(4)过氧化氢酶/H2O2 酶
22．(1)碳源、氮源、无机盐
(2) PT7、PBAD 和PBAD 启动子②和③选用 PBAD可以使工程菌无论有、无蓝光 照射都可表达无活性的T7RNAP，在蓝光照射后，无活性的 T7RNAP 转变为有活性的T7RNAP，与特异性启动子P7识别结合并转录基因1，即可用蓝光控制酪氨酸酶的表达
(3)杀死不含光控表达载体的杂菌，避免杂菌污染；筛选出含光控表达载体的工程菌
(4)蓝光诱导酪氨酸酶基因的表达，酪氨酸酶催化酪氨酸转化为黑色素，蓝光照射不到的部位酪氨酸酶不表达
(5)将酪氨酸酶替换成催化其他色素合成的酶(或将酪氨酸酶替换成不同颜色蛋白)
23．(1) 脱分化 细胞分裂素 诱导叶绿素的形成；满足叶绿体利用光能制造有机物的需要
(2) 遗传特性 转基因标识
(3)Ti质粒中的T-DNA能将外源基因递送到植物细胞中，并与植物细胞的染色体DNA整合到一起
(4) 荧光检测选择带有绿色荧光标记的毛状根 观察幼苗是否表现出白化特征 PDS缺失会导致植株白化，白化苗的出现意味着通过基因编辑技术成功实现PDS基因的敲除
(5)操作方法简单，不需要借助植物组织培养技术进行操作，且培养周期较短。
24．(1) 多种酶 观察到极体或雌、雄原核
(2) 体外受精 充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，大大缩短了供体的繁殖周期 XX
(3)桑葚胚或囊胚的内细胞团未均等分割，胚胎发育停滞或无法发育
(4) 纺锤体—染色体复合物 M Ⅱ期的卵母细胞质中含有激发细胞核全能性表达的物质
(5)能在受体细胞中自我复制，或整合到染色体DNA上、具有一至多个限制酶切点、具有标记基因
25．(1) 检测目的基因是否成功导入受体细胞 双分子层中
(2)蛋白质外壳和含N蛋白胞外段基因的核酸
(3) 胰蛋白酶或胶原蛋白 CO2的培养
(4) 克隆化 抗原-抗体杂交 细胞培养液 将适宜的动物细胞培养液均分为体积相同的几组（可自设组数），在不同组别中接种不同数量的能产生登革病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞；一定时间后，测定各组培养液中的抗体含量
(5)抗体-药物偶联物ADC

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