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（2）微生物的培养技术及应用
——高二生物学人教版（2019）选择性必修三期末易错题集训
【易错点分析】
一、培养基的制备与类型辨析
易错点 1：混淆培养基的种类和用途
错误表现：
（1）分不清固体培养基与液体培养基的适用场景（如误认为 “液体培养基用于微生物分离”）
（2）混淆选择培养基与鉴别培养基的功能（如认为 “伊红美蓝培养基是选择培养基”）
正确解析：
类型 特点 用途
固体培养基 含琼脂，呈固态 微生物分离、纯化、计数（稀释涂布法） 平板划线法、菌落观察
液体培养基 不含琼脂，呈液态 工业生产（扩大培养）、菌种富集 发酵工程中的菌种培养
选择培养基 添加特定成分（如抗生素、尿素） 筛选特定微生物（抑制杂菌生长） 以尿素为唯一氮源的培养基（筛选分解尿素的细菌）
鉴别培养基 添加指示剂或化学物质 鉴别微生物（根据特征反应） 伊红美蓝培养基（鉴别大肠杆菌，菌落呈紫黑色）
特别提醒：
选择培养基的 “筛选” 是通过 “抑制其他微生物生长” 实现的，如加入青霉素可筛选酵母菌（真菌），抑制细菌生长
鉴别培养基的 “鉴别” 是通过 “特定颜色或形态变化” 实现的，无需抑制杂菌
易错点 2：培养基成分的错误搭配
错误表现：
忘记微生物生长的必需成分（如碳源、氮源、水、无机盐），或混淆自养型与异养型微生物的碳源（如认为 “硝化细菌需要有机碳源”）
误认为 “所有培养基都需添加生长因子”（实际仅部分微生物如乳酸菌需要）
正确解析：
自养型微生物（如硝化细菌、蓝藻）：以无机碳源（CO 、碳酸盐）为碳源，无需有机物
异养型微生物（如大肠杆菌、酵母菌）：需有机碳源（葡萄糖、牛肉膏）
生长因子：维生素、氨基酸等特殊营养物质，仅部分微生物（如乳酸菌、动物细胞）需要，培养基中需额外添加
二、无菌技术的操作细节
易错点 1：消毒与灭菌的概念混淆
错误表现：
分不清消毒与灭菌的强度和适用对象（如 “对接种环进行消毒”“对培养基进行消毒”）
记错灭菌方法的条件（如高压蒸汽灭菌的温度、时间，干热灭菌的适用范围）
正确解析：
方法 强度 适用对象 典型条件
消毒 较温和 不耐高温的物体（如皮肤、培养基瓶口） 酒精擦拭（70% 乙醇）、巴氏消毒法（62℃，30 分钟）
灭菌 彻底杀灭 耐高温的器物（如培养基、接种环） 高压蒸汽灭菌（121℃，100kPa，15-30 分钟）、干热灭菌（160-170℃，2 小时，适用于玻璃器皿）
特别提醒：
培养基必须用高压蒸汽灭菌，不能用干热灭菌（干热会使培养基中的水分蒸发）
玻璃器皿（如培养皿）和金属工具（如接种环）可用干热灭菌或灼烧灭菌（接种环常用灼烧灭菌）
易错点 2：倒平板操作的细节失误
错误表现：
倒平板时培养基温度过高（烫手）或过低（已凝固），或未在酒精灯火焰旁操作
误认为 “倒平板后立即倒置培养”（实际需冷却凝固后再倒置）
正确操作：
灭菌后的培养基冷却至50℃左右（手感微烫但不烫手）时倒平板，避免高温杀死接种的微生物
倒平板需在酒精灯火焰旁进行，避免空气中杂菌污染
平板冷凝后倒置培养，防止冷凝水滴落污染培养基
三、微生物的分离与计数方法
易错点 1：平板划线法与稀释涂布平板法的混淆
错误表现：
认为 “平板划线法可用于微生物计数” 或 “稀释涂布平板法不能用于分离单菌落”
混淆两种方法的操作步骤（如平板划线时未灼烧接种环导致杂菌污染）
正确解析：
方法 目的 能否计数 关键操作要点
平板划线法 分离纯化微生物（获得单菌落） 不能 每次划线前需灼烧接种环，冷却后再划线，最后一区不与首区相连
稀释涂布平板法 分离纯化微生物并计数 能 菌液需梯度稀释（如 10-3~10-6倍），涂布器需用酒精引燃灭菌
特别提醒：
平板划线法中，只有最后一次划线的末端可能形成单菌落，前几次划线主要是稀释菌液
稀释涂布平板法计数时，选择菌落数在 30~300 之间的平板，且需至少涂布 3 个平板取平均值，避免偶然误差
易错点 2：活菌计数与显微镜直接计数的误差分析
错误表现：
认为 “稀释涂布平板法计数结果与实际活菌数完全一致” 或 “显微镜计数法可区分死菌与活菌”
正确解析：
活菌计数法（稀释涂布平板法）
结果偏低，原因：
① 当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；
② 部分菌体在培养过程中死亡，无法形成菌落。
显微镜直接计数法
结果偏高，原因：计数对象包括死菌和活菌，且可能将菌液中的杂质误认为菌体
四、实验设计与结果分析
易错点 1：忽略对照实验的设计
错误表现：
检测培养基是否被污染时，未设置 “未接种的空白培养基” 作为对照
筛选特定微生物时，未设置 “标准菌种对照组” 验证结果
正确设计：
空白对照：将未接种的培养基与接种的培养基同时培养，若空白培养基出现菌落，说明培养基灭菌不彻底
条件对照：如探究抗生素对微生物的抑制作用时，需设置 “添加抗生素的实验组” 与 “未添加抗生素的对照组”
易错点 2：菌种保藏方法的选择错误
错误表现：
混淆临时保藏与甘油管藏的适用场景（如 “长期保存菌种用斜面固体培养基临时保藏”）
正确方法：
临时保藏：将菌种接种到斜面固体培养基，放入 4℃冰箱，适用于短期保存（几个月），需定期转移菌种（避免菌种老化）
甘油管藏：菌液与甘油混合后放入 - 20℃冰箱，适用于长期保存（数年），适用于工业生产用菌种
总结：突破易错点的关键
对比记忆法：通过表格对比易混淆概念（如消毒 vs 灭菌、选择培养基 vs 鉴别培养基）
操作流程图解：绘制倒平板、平板划线等操作的流程图，标注关键细节（如灼烧接种环的时机）
误差分析训练：结合实验题，分析计数结果偏高或偏低的原因，强化逻辑推理能力
【易错点练习】
1.塑料废弃后难以降解，给人类的生存环境造成极大污染。科学家从嗜盐细菌中找到一种具有塑料的理化特性且易被微生物降解的聚羟基脂肪酸酯(PHA)。科研人员从某盐湖中取水，接种到特殊培养基上，培养一段时间后，挑选单菌落并分别扩大培养，再检测菌的数目和PHA的产量，最终获得目标菌株。下列相关叙述正确的是( )
A.实验用到的特殊培养基中应含有较高的盐分
B.挑选的单菌落是由若干嗜盐细菌繁殖而来的
C.进行扩大培养时，培养基中需加入适量琼脂
D.实验中，只有接种需要在酒精灯火焰旁进行
2.培养基可以为实验室培养的微生物提供合适的营养和环境条件，下列有关培养基的叙述正确的是( )
A.培养不同微生物的培养基所含的营养物质完全不同
B.培养基中的牛肉膏所能提供的营养只有碳源和氮源
C.培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，并将pH调至酸性
D.培养基中的氮源是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的
3.芽孢杆菌耐高温，是常见的蛋白酶生产菌。培养基中的蛋白质可被蛋白酶降解后在菌落周围形成透明圈。如图是筛选蛋白酶高产菌株的过程，下列叙述错误的是( )
A.70～80℃水浴10分钟的目的是杀死非芽孢杆菌
B.在酒精灯火焰旁将样品用无菌水稀释并涂布接种
C.以奶粉为唯一氮源的培养基能起到选择作用
D.通过透明圈大小可筛选出蛋白酶高产菌株
4.L-天冬酰胺酶由细菌和真菌合成，可分解天冬酰胺释放出氨，然后与奈斯勒试剂反应呈棕色。为筛选获得L-天冬酰胺酶高产菌株，设计了如下固体培养基。固体培养基：主要成分有牛肉膏、蛋白胨、水、NaCl、琼脂、奈斯勒试剂。实验结果如下图。下列叙述错误的是( )
A.根据实验结果可知，接种时采用的是稀释涂布平板法
B.应选择菌落C作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养
C.该培养基从功能来看属于选择培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏
D.无菌技术还可以避免操作者被有害微生物感染，实验结束后的培养基不能直接丢弃
5.在生产生活和科研中，经常通过无菌技术避免杂菌的污染。下列叙述正确的是( )
A.通过消毒或灭菌，可杀死所有的微生物，包括孢子和芽孢
B.接种环、涂布器等接种用具的灭菌方式只有灼烧灭菌
C.为避免污染，接种等操作尽量在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行
D.对于牛奶等不耐高温的液体，一般采用紫外线照射法进行消毒
6.消毒和灭菌是微生物培养中常用的操作方法。下列说法正确的是( )
A.微生物接种技术的方法各不相同，但核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度
B.在100℃煮沸5～6分钟属于灭菌方法，可杀死微生物细胞和一部分芽孢
C.在灭菌后倒平板前，加入一定量的缓冲液以调节培养基的pH
D.高压蒸汽灭菌，只有当压力表的压力降到一个标准大气压时，才能打开盖子
7.检验某水体中大肠杆菌数目是否符合生活饮用水卫生标准，常用滤膜法测定，其操作流程如图所示。EMB培养基上形成的不同菌落中，大肠杆菌菌落呈深紫色。下列叙述正确的是( )
A.过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶均需要进行消毒处理
B.制备EMB培养基时，待培养基冷却至室温后在酒精灯火焰附近倒平板
C.接种时用无菌镊子夹取滤膜边缘，滤膜截留细菌面向上紧贴于EMB培养基上
D.EMB培养基为选择培养基，培养后平板上的菌落均为大肠杆菌菌落
8.营养缺陷型菌株由于不能合成某种物质，无法在基本培养基中生氏，添加相应物质后才能正常生长。如图是实验人员利用影印法筛选氨基酸缺陷型大肠杆菌的过程。下列叙述正确的是( )
A.M培养基和N培养基都应加入抗生素以防止杂菌污染
B.①过程为扩大培养，②过程采用平板划线法进行接种
C.原位影印时，应先将无菌绒布转印至③对应的培养基上
D.从④对应的培养基中挑选菌落乙进行纯化培养可得到目的菌株
9.平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是( )
A.不含氮源的平板不能用于微生物培养
B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D.稀释涂布平板法可统计样品中的活菌数
10.刚果红能与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素水解后形成的纤维二糖和葡萄糖等发生这种反应，纤维素被纤维素分解菌分解后，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。某同学利用刚果红配制培养基，分离土壤中能分解纤维素的微生物并观察菌落数。下列叙述正确的是( )
A.用平板划线法接种后统计平板上的菌落数，统计值比活菌实际数低
B.透明圈出现的原因是菌落周围的纤维素被微生物产生的纤维素酶分解
C.应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化
D.以纤维素为唯一碳源且加入刚果红的培养基从功能上分属于选择培养基
11.下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是( )
A. 通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比
B. 通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大
C. 通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌
D. 血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定
12.为避免航天器在执行载人航天任务时出现微生物污染风险，需要对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测。下列叙述错误的是( )
A.航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物
B.细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀
C.在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品
D.采用平板划线法等分离培养微生物，观察菌落特征
13.某实验小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，操作流程如图所示，下列相关叙述正确的是( )
A.培养基应以尿素为唯一氮源，其上生长的都是能分解尿素的细菌
B.培养一段时间后，培养基中的营养成分会减少，pH会升高
C.使用后的培养基在丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境
D.涂布3个平板可以避免出现菌落数比活菌的实际数目少的现象
14.尿素是一种非蛋白氮饲料，常被用于反刍动物日粮配制，以降低日粮蛋白用量，节约饲养成本。反刍动物的瘤胃中尿素被分解成氨，氨则被用于合成优质微生物蛋白。某兴趣小组尝试从奶牛的瘤胃中分离出尿素分解菌。下列有关叙述正确的是( )
A.需配制以尿素为唯一碳源的培养基，还需要加牛肉膏等营养物质
B.用灭菌后的涂布器蘸取0.1mL菌液在酒精灯火焰旁将菌液涂布均匀
C.以未接种的培养基为对照组，可判断选择培养基是否具有选择作用
D.尿素分解成氨后，培养基中的pH升高，可用酚红指示剂进行鉴定
15.组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成生命活动必需的组氨酸。将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。2-氨基芴是一种致突变剂，将沾有2-氨基芴的滤纸片放到上述平板培养基中，再接种组氨酸缺陷型沙门氏菌进行培养，会有较多菌落出现。以下叙述正确的有几项( )
①在接种前，2-氨基芴和滤纸片需进行灭菌处理
②菌落的形成可能与致突变剂有关
③这种沙门氏菌不宜用于检测环境中的化学致突变剂
④实验所用培养基为固体培养基
⑤经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型
⑥缺陷型细菌均是通过基因重组具备了合成组氨酸的能力
A.3项 B.4项 C.5项 D.6项
16.下列有关微生物培养的叙述正确的是( )
A.通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落
B.若培养基需要调节pH，应该在灭菌后进行
C.倒置平板可防止培养基被滴落的冷凝水污染
D.用显微镜直接计数固体培养基中微生物数量
17.氧氟沙星（OFL）（C18H20FN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌的氟喹诺酮类药物，某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株X。筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题：
（1）利用细菌处理去除废水中的抗生素，这种方法的不足之处是____，因此需要筛选抗生素优势降解菌株。
（2）筛选能够降解OL的菌株时，富集培养基中需要加入____作为唯一碳源或氨源。用于培养菌株X的固体培养基含有水、蛋白胨、酵母提取物和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为菌株X生长提供碳源、氮源和____等。I和Ⅲ所用培养基的物理性质分别为____和____。
（3）过程Ⅱ、Ⅲ使用的接种方法是____，操作所用的实验器具必须____。过程中的总稀释次数为8次，在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选取____作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是135、153、144，故推测A中1mL菌液所含细菌的数量约为____个。
（4）该实验小组欲进一步探究初始OFL浓度对菌株X降解OFL能力的影响，进行了相关的实验。请简要写出实验思路：____。
18.牛、羊等反刍动物具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。下图是研究人员从瘤胃提取物中获得尿素分解菌的流程。回答下列问题：
(1)图中①过程所使用的接种方法是_________________。用该接种方法对微生物进行计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目________________，原因是_______________。
(2)培养基能为微生物提供的营养成分有______________，从培养基功能分析，甲、乙均为________培养基，均是以_________作为唯一氮源。
(3)图中乙在培养时，培养皿的放置方式如图_________(填“a”或“b”)，原因是__________________。
(4)实验中初步估测甲瓶中细菌数为3×106个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过300个，则至少应将甲瓶的菌液稀释________倍。
(5)已知尿素分解菌产生的脲酶可以催化尿素分解产生NH3→培养基碱性增强→酚红指示剂变红。将纯化获得的菌种接种于以尿素为唯一氮源的固体培养基(其他营养成分等适宜)上,加入酚红指示剂,通过观察培养基上菌落就______可以鉴别出目的菌株,原因是_____。
19.我国卫生部门规定饮用水标准是1mL自来水中细菌总数不超过100个（37°C培养24h），1000mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个（37°C培养48h）。水中大肠杆菌的含量常采用伊红—亚甲基蓝琼脂培养基进行检测，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色且带有金属光泽。某校生物兴趣小组开展校园桶装纯净水微生物含量检测活动，请回答问题：
（1）为了检测饮用水中细菌的数量，该兴趣小组按下表配方配制伊红—亚甲基蓝琼脂培养基：
蛋白胨 乳糖 磷酸氢二钾 琼脂 蒸馏水 2%伊红水溶液 0.5%亚甲基蓝水溶液
10g 10g 2g 20～30g 1000ml 20mL 13mL
从物理状态和用途两个角度分析，该培养基分别属于____________培养基，其中蛋白胨可以为细菌生长提供____________（至少写出两点）等营养物质。培养基灭菌____________（前/后）需要调节培养基的pH值。
（2）某同学分别向3个培养基中各加入1mL未经稀释的待测水样，涂布均匀后置于37°C的恒温培养箱中培养24h，结果如图1所示。检测时使用的接种量为1mL而不是0.1mL，其理由是____________。
（3）下图2为用滤膜法测定饮用水中大肠杆菌数目的流程示意图，请完成下表。
实验步骤的目的 简要操作过程
①____________ 将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，加热煮沸15min，共煮沸三次
过滤细菌 装置安装好后，向漏斗内加入1000mL水样，加盖抽滤。
冲洗漏斗壁 再向漏斗内加等量②____________继续抽滤。
培养大肠杆菌 用无菌镊子取滤膜，将其紧贴在伊红一亚甲基蓝琼脂平板上，然后将平板③____________，37℃培养48小时
统计大肠杆菌菌落数 选取④____________的菌落进行计数，统计结果为2个
（4）综合（2）（3）测定结果，你认为所测桶装纯净水的微生物含量____________（能/不能）达到饮用水卫生标准，理由是____________。
答案以及解析
1.答案：A
解析：A项，由题意可知，实验用到的特殊培养基中应含有较高的盐分，故A项正确； B项，挑选的单菌落是由一个嗜盐细菌繁殖而来的，故B项错误； C项，进行扩大培养时，培养基中不需加入琼脂，故C项错误； D项，实验中，接种和倒平板都需要在酒精灯火焰旁进行，故D项错误。
综上所述，本题正确答案为A。
2.答案：D
解析：A、培养不同微生物的培养基所含的营养物质应该不完全相同。虽然各种培养基的具体配方不同，但是一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。有些异养微生物需要生长因子等特殊营养物质，因此特殊营养物质不是所有培养基共有的，A错误；
B、牛肉膏所能提供的营养除了碳源和氮源外还有磷酸盐和维生素，B错误；
C、培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，因为乳酸杆菌自身不能合成某些维生素，但培养乳酸杆菌时pH应调至中性或微碱性，而不是酸性，C错误；
D、蛋白质、核酸等物质都含有氮元素，培养基中的氮源是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的，D正确。
故选D。
3.答案：D
解析：A、细菌中的芽孢杆菌较为耐高温，70~80℃水浴10分钟的目的是杀死非芽孢菌，A正确；B、为防止杂菌污染，在酒精灯火焰旁将样品用无菌水稀释并涂布接种，B正确；C、蛋白酶降解培养基中的蛋白质可在菌落周围形成透明圈，奶粉富含蛋白质，以奶粉为唯一氮源的培养基能起到选择作用，C正确；D、通过透明圈与菌落直径的比值大小，可对产蛋白酶芽孢杆菌降解蛋白质的能力进行比较，D错误。故选D。
4.答案：C
解析：A、从接种结果来看，菌落分布较为均匀，应该采用的是稀释涂布平板法，A正确；
B、菌落B和菌落C周围棕色圈的直径相同，但C的菌落直径更小，因此菌落C的单个细胞产生的L-天冬酰胺酶更多，应选择菌落C作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养，B正确；
C、培养基中加入有奈斯勒试剂，若微生物能产生L-天冬酰胺酶则菌落周围会出现棕色圈，因此该培养基从功能来看属于鉴别培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏和蛋白胨，C错误；
D、无菌技术可用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，还可以避免操作者被有害微生物感染，但实验结束后为避免环境污染，培养基在丢弃前要进行灭菌处理，D正确。
故选C。
5.答案：C
解析：只有通过灭菌，才可以将所有的微生物，包括孢子和芽孢都杀死，A错误；接种环、涂布器等接种用具除了灼烧灭菌外，也可用高压蒸汽灭菌，B错误；为避免环境污染，接种等操作尽量在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行，超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦拭，然后紫外线消毒30min,C正确;对于一些不耐高温的液体，如牛奶，一般采用巴氏消毒法，D错误。
6.答案：A
解析：A、微生物接种技术的方法各不相同，但核心都是要防止杂菌污染，这是获得纯净培养物的关键，A正确；
B、在100℃煮沸5～6分钟属于煮沸消毒法，可杀死微生物细胞和一部分芽孢，B错误；
C、在灭菌前，加入一定量的缓冲液以调节培养基的pH，C错误；
D、高压蒸汽灭菌，只有当压力表的压力降到零时，才能打开排气阀，拧松螺栓，打开盖子，D错误。
故选A
7.答案：C
解析：微生物培养的关键是无菌技术，过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶需要进行灭菌处理，A错误；制备EMB培养基时，待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近倒平板，B错误；接种时用无菌镊子夹取滤膜边缘，滤膜截留细菌面向上紧贴于EMB培养基上，这样细菌只能透过滤膜吸收营养，限制了菌落向四周生长，以免不同菌落长成一片，无法区分，C正确；EMB培养基能鉴别出大肠杆菌，属于鉴别培养基，没有选择作用，培养后平板上除了大肠杆菌菌落也可能有别的菌落，D错误。
8.答案：C
解析：
9.答案：D
解析：A、不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；
B、平板涂布时，涂布器在使用前必须浸在酒精中，使用时将涂布器放在火焰上灼烧灭菌，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布，B错误；
C、接种后即使未长出菌落的培养基在丢弃前也要进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；
D、稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，D正确。
故选D。
10.答案：B
解析：平板划线法不能用于菌落的计数，A错误；刚果红染料能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌产生的纤维素酶分解后，红色复合物消失，在菌落周围会出现透明圈，B正确；菌落周围形成的透明圈的直径与菌落直径的比值可反映菌落分解纤维素的能力，该值越大，说明该菌分解纤维素的能力越强，故应选择周围透明圈直径与菌落直径比值大的菌落进行纯化，C错误；以纤维素为唯一碳源的培养基可以筛选能分解纤维素的微生物，属于选择培养基，而在该培养基中加入刚果红则可以鉴别能产生纤维素酶的微生物，从功能上分属于鉴别培养基，D错误。
11.答案：A
解析：A、微生物种类不同，所需营养物的碳氮比也不同，具有高碳氮比的生物需要高碳氮比的营养物，反之则低；酵母菌的碳氮比高于细菌，所以培养酵母菌培养基需要更高的碳氮比，A正确； B、通常细菌的生长速度比酵母菌快，但形成的菌落不一定大于酵母菌，这与细菌种类有关，部分细菌的菌落小于酵母菌，B错误； C、微生物培养基通常都采用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误； D、血细胞计数板适于酵母菌的计数，不适于微小的细菌计数，细菌计数一般采用细菌计数板，D错误。
12.答案：D
解析：A、嗜极微生物适应极端环境的特性使它们有在空间暴露环境或地外星球环境中存活的可能，因此航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物，A正确；
B、细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀，会腐蚀舱内材料以及设备线路、元器件，B正确；
C、对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测，需要在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品，C正确；
D、航天器及洁净的组装车间环境微生物很少，分离培养微生物，观察菌落特征，不需要采用平板划线法，D错误。
故选D。
13.答案：B
解析：A、某些固氮菌不需要培养基提供氮源，所以能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长，所以培养基应以尿素为唯一氮源，其上生长的不一定都是能分解尿素的细菌，A错误；B、由于分解尿素的细菌是异养生物，所以培养基的营养成分会减少，分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH会升高，B正确；C、使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，C错误；D、涂布3个平板可以减小实验误差，但并不能避免出现菌落数比活菌的实际数目少的现象，D错误。故选B。
14.答案：D
解析：实验目的是分离出尿素分解菌,需要以尿素作为唯一氮源的培养基,使能分解尿素的微生物生长,其他微生物不能生长,起到选择作用,A错误；涂布器不能进行取样,B错误；以未接种的培养基为对照组,能判断培养基是否被杂菌污染,不能判断选择培养基是否有选择作用,C错误；尿素分解为氨后,培养基中碱性增强,pH升高,可用酚红指示剂进行鉴定,D正确。
15.答案：C
解析：①在微生物培养过程中，培养基、实验材料、实验用具等在使用前都要进行灭菌处理，①正确；②2-氨基芴的作用是诱导沙门氏菌产生基因突变，菌落的形成可能与该诱变剂有关，②正确；③可以诱发基因突变的还有物理因素，且基因突变具有随机性和不定向性，该种沙门氏菌不宜用来检测环境中的化学致突变剂，③正确；④由题干信息可知，该培养基为平板培养基，属于固体培养基，④正确；⑤组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，由于基因突变存在可逆性，经化学诱变剂处理的缺陷型细菌可能变为野生型，⑤正确；⑥自然条件下，基因重组一般发生在进行有性生殖的真核生物中，缺陷型细菌中很可能发生了基因突变，⑥错误。综上所述，①②③④⑤正确，⑥错误。故选C。
16.答案：C
解析：A、通常使用固体培养基分离获得细菌单菌落,使用液体培养基进行扩大培养,A错误;B、若培养基需要调节pH,应该在灭菌前进行,B错误;C、倒置平板可防止培养基被滴落的冷凝水污染,C正确;D、利用显微镜计数时只能用液体培养基,D错误。故选:C
17.答案：（1）抗生素会抑制细菌的生长繁殖
（2）OFL（氧氟沙星）；维生素；液体；固体
（3）稀释涂布平板法；灭菌；菌落数目稳定时的记录；1.44×1011
（4）配制等量的含一系列浓度梯度的OFL的液体培养基，培养基灭菌后，分别接种等量的菌株X，培养相同时间后检测OFL的降解程度
解析：（1）抗生素会抑制细菌的生长繁殖，因此需要筛选抗生素优势降解菌株来处理废水中的抗生素。
（2）筛选能够降解OFL的菌株时，富集培养基中需要加入OFL作为唯一碳源或氮源；蛋白胨是用动、植物蛋白制成的粉末状物质，主要为菌株X提供碳源、氮源和维生素等。据图分析可知，I中的培养基用于富集培养，故I所用培养基的物理性质为液体，Ⅲ中培养基用于计数，故Ⅲ所用培养基的物理性质为固体。
（3）过程Ⅱ、Ⅲ使用的接种方法是稀释涂布平板法，操作所用的实验器具必须灭菌处理，防止杂菌污染，影响实验结果。选取菌落数目稳定时的记录作为结果；A中1mL菌液所含细菌的数量约为（135+153+144）÷3÷0.1×108=1.44×1011（个）。
（4）欲进一步探究初始OFL浓度对菌株X降解OFL能力的影响，则设计实验时实验的自变量是OFL浓度，因变量是菌株X降解OL的效果，因此可配制等量的含一系列浓度梯度的OFL的液体培养基，培养基灭菌后，分别接种等量的菌株X，培养相同时间后检测OFL的降解程度。
18.答案：(1)稀释涂布平板法；少；当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落
(2)碳源、氮源、水,无机盐；选择；尿素
(3)b；平板倒置可防止皿盖上的水珠滴落到培养基上,又可避免培养基中的水分蒸发过快
(4)103
(5)周围是否出现红色环带；目的菌株催化尿素分解产生NH3使菌落周围的培养基pH升高,导致酚红指示剂变红,使菌落周围出现红色环带
解析：(1)由题图1可知,①过程所使用的接种方法是稀释涂布平板法,用该接种方法对微生物进行计数时,统计的菌落数往往比活菌的实际数目少,这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。
(2)培养基为微生物提供的营养物质一般有碳源、氨源、水和无机盐等；由于本实验的目的是获得高效的尿素分解菌,因此,从培养基功能分析,图1中甲、乙均是以尿素作为唯一氮源的选择培养基。
(3)图1中乙在培养时,培养皿需要倒置,如图2中b所示,这样可避免冷凝水滴落到培养基上影响菌落形态,也可避免培养基中的水分蒸发过快。
(4)实验中初步估测甲瓶中细菌数为3×106个/mL,若要在每个平板上涂布0.1mL稀释后的菌液,且保证每个平板上长出的菌落数不超过300个,设至少应将甲瓶的菌液稀释x倍,则相关计算可表示为300÷0.1×x=3×106,计算可得x=103,即甲瓶中的菌液至少需要稀释10倍。
(5)目的菌株形成的菌落周围会出现红色环带,原因是尿素分解菌产生的脲酶可以催化尿素产生NH3使菌落周围的培养基pH升高,导致酚红指示剂变红,使菌落周围出现红色环带。
19.答案：（1）固体、鉴定；碳源、氮源、无机盐、维生素；前
（2）0.1mL水样中细菌数目较少，经培养后平板菌落数可能达不到30个
（3）滤膜消毒；无菌水；倒置；呈深紫色且带有金属光泽
（4）能；1mL水样中细菌总数约为99个，没有超过100个；1000mL水样中大肠杆菌为2个，没有超过3个
解析：（1）从物理状态来看，该培养基含有琼脂等凝固剂，属于固体培养基；从用途来看，培养基中含有伊红—亚甲基蓝，用于鉴别是否存在大肠杆菌，所以该培养基属于鉴定培养基；蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类，故其中蛋白胨可以为细菌生长提供碳源、氮源、无机盐、维生素等营养物质；培养基灭菌前需要调节培养基的pH，一般培养基高温高压对其pH值影响不大，且灭菌后调pH培养基易受污染。
（2）经稀释涂布平板法获得的平板上菌落数要求是30～300，图1中3个平板上所长菌落数均位于30～300之间，适合计数，检测时使用的接种量为1mL而不是0.1mL，其理由是0.1mL水样中细菌数目较少，经培养后平板菌落数可能达不到30个，故在接种时吸取1mL样液。
（3）“将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，加热煮沸15min，共煮沸三次”煮沸能起到消毒的作用，故步骤①的目的是对滤膜进行消毒；实验需要避免杂菌的污染，故冲洗漏斗壁时需要再向漏斗内加等量的无菌水，继续抽滤；将平板倒置，放入培养箱中培养，将平板倒置，既有利于培养基表面水分更好地挥发，又能防止冷凝水滴到培养基上造成杂菌污染；若存在大肠杆菌，伊红—亚甲基蓝用于检测大肠杆菌，选取呈深紫色且带有金属光泽的菌落进行计数。
（4）（2）中3个平板的菌落数的平均值为99，取样体积为1mL，（3）中平板菌落数为2，取样体积为1000mL，综合（2）（3）测定结果，以及题干“我国卫生部门规定饮用水标准是1mL自来水中细菌总数不超过100个（37°C培养24h），1000mL自来水中大肠杆菌菌落数不能超过3个（37°C培养48h）”可知所测桶装纯净水的微生物含量能达到饮用水卫生标准。

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