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选择性必修三第1章
第2节　微生物的选择培养和计数（二）
一、单选题
1．某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3供植物吸收和利用。以下说法错误的是(　　)
A．土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶
B．能分解尿素的细菌也能以尿素的分解产物CO2作为碳源
C．为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择尿素作为唯一氮源
D．筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4的作用是提供无机盐和维持pH
2．平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列叙述正确的是(　　)
A．采用稀释涂布平板法获得的菌落数往往多于实际的活菌数
B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环连续划在固体培养基表面
C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基中进行培养
D．与平板划线法相比，稀释涂布平板法形成单菌落的效果更好
3．油烟污染由多种有害物质组成，不易降解。某同学从长期受到油烟污染的环境中分离出油烟降解菌，其筛选分离过程如图所示。下列叙述正确的是(　　)
A．图中①～③的过程为梯度稀释
B．在培养基中加入油烟污染物，其作用是为微生物提供碳源和能源
C．④使用的是固体培养基，需加入琼脂作为微生物生长繁殖的营养物质
D．过程④可采用稀释涂布平板法或平板划线法分离菌种并进行计数
4．原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确的是(　　)
A．应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用
B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基
C．将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上
D．在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种
5．如图为选育高产β 胡萝卜素的布拉霉菌的过程。随β 胡萝卜素含量增加，菌体颜色从黄色加深至橙红色。未突变菌不能在含有β 紫罗酮的培养基上生长。下列有关叙述错误的是(　　)
A．过程①属于诱变育种 B．过程②可采用平板划线法接种
C．过程③应选择黄色菌株进行富集培养 D．培养基中添加β 紫罗酮起选择作用
6．养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种物质可由硝化细菌吸收利用。在“养殖池底泥中硝化细菌的分离和计数”实验中，下列说法正确的是(　　)
A．需要配制添加一定浓度铵盐的牛肉膏蛋白胨培养基，以筛选硝化细菌
B．应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行
C．采用平板划线法进行分离和计数时，还需与未接种的空白培养基同时培养
D．若空白对照组上长出了菌落，需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数
7．下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法的叙述，不正确的是(　　)
A．利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计数法，其缺点是不能区分死菌与活菌
B．两种计数方法，其统计值与实际值相比，均有差异，但产生差异的原因不同
C．两种计数方法均能在计数的同时观察到所研究微生物的形态特征
D．当菌落数目稳定时，一般选取菌落数在30～300的且差异不大的平板进行计数
8．某研究小组为了探究覆盖保鲜膜对西瓜表面微生物的种类和数量的影响，他们将覆盖保鲜膜保存了三天的西瓜的瓜瓤制备成浸出液，再将浸出液接种到培养基上进行观察。下列说法正确的是(　　)
A．应用液体培养基接种浸出液进行培养
B．应采用平板划线法对浸出液进行计数
C．每组至少设置三个平板，确保实验结果的准确性
D．只需要设置未接种瓜瓤浸出液的空白平板作对照
9．解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是(　　)
A．甲菌属于解脂菌
B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
10．如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素的细菌的过程示意图。下列有关叙述错误的是(　　)
A．在配制步骤②③的培养基时，应先调pH后湿热灭菌
B．步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，以获得单菌落
C．步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
D．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较不同种细菌分解尿素的能力
二、多选题
11．精氨酸依赖型菌株不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图。下列相关叙述正确的是(　)
A．野生型菌液的培养皿中不会出现菌落
B．乙培养基与甲相比可能缺少了精氨酸
C．紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生可遗传变异
D．乙中的菌落A为鸟氨酸发酵的优良菌种
12．图甲所示是稀释涂布平板法中的部分操作，图乙所示是平板划线法的操作结果。下列相关叙述正确的是(　　)
A．图甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能涂布菌液
B．对于浓度较高的菌液，若图甲中的最高稀释倍数仅为102，则所得到的菌落一定是由单一的细胞繁殖而成的
C．图乙所示培养皿中每个划线区域都可得到符合要求的菌落
D．图乙中连续划线的起点是上一次划线的末端(除第一次划线外)
三、非选择题
13．某生物兴趣小组试图探究山羊瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌(目的菌)。实验步骤如图所示。请回答下列问题：
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数 500 367 248 36 18
(1)该实验中所用培养基在成分上的特殊要求是 ；培养基中的KH2PO4和Na2HPO4的作用有 。
(2)实验中采用的分离纯化细菌的方法是 。实验过程中，除了需将接种后的平板放在适宜的环境中培养一段时间后观察，还需要设置在相同条件下培养的
，作为对照实验，其目的是 ________。
(3)为了计数细菌，将取自瘤胃中的液体进行稀释，接种在培养基上，放置在37 ℃恒温培养箱中培养24～48 h，统计菌落数，结果如上表。其中 倍的稀释倍数比较适合计数。有同学认为，该计数方法统计的细菌数目会比实际数目 ，他的理由是
。
14．某种在田间广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能有效降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明，培养皿中会残留少量无菌空气)。回答下列问题：
(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行 处理。
(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、营养成分的角度要求上述培养基具备的特点是 。若需要调节培养基pH，应在灭菌 (填“前”或“后”)进行。对培养基进行灭菌，常采用 法。
(3)图中形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源可能是 ，有透明带菌落利用的氮源主要是 ，据此可筛选出目的菌。
(4)若对活菌进行计数，常用的接种方法为 。为了测定微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液 0.1 mL，培养后菌落数目分别为155、160、176、149，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为 个。
15．酵母菌作为白酒发酵生产中的主酵菌群，通常在整个发酵过程中的前期，对发酵原料的转化利用能力及乙醇的生产能力较强，但随着发酵过程的进行，在窖池酸度下降至pH≤4．5后，酵母菌的生理代谢活动逐渐受到抑制，对发酵原料的转化利用能力及乙醇的发酵生产能力也逐渐下降，甚至停止。酒用耐酸性酵母菌的筛选及应用，将改善传统的白酒生产工艺，促进白酒生产的产量与产值的提高，将产生较大的经济效益。现开展对五粮液酒厂耐酸性酿酒酵母菌的分离与筛选。请回答下列问题：
(1)从窖池底泥，黄浆水（窖底部的水，呈黄色，含有丰富的有机酸）中寻找耐酸酵母菌的原因是
。
(2)过程②需充分振荡的主要目的是 。过程②所用培养基为酵母菌提供了 营养。
(3)过程③所用接种工具是 ，划线顺序是 。酿酒酵母不能采用赖氨酸作为酵母氮源，因而在赖氨酸培养基上不能生长。将④中菌株经饥饿处理后接种到赖氨酸培养基，直到15d后仍无菌落生长，说明④中的菌种是 。
(4)对麦芽汁培养48h的酵母菌株，以16×40倍的显微镜镜检，筛选出菌体上多端出芽菌株，目的是
。
单选题
1．【答案】B 【解析】　能分解尿素的细菌是一种分解者，属于异养型生物，不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，B错误。
2．【答案】D 【解析】　由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以利用稀释涂布平板法获得的菌落数往往少于实际的活菌数，A错误；平板划线法不需要稀释菌液，是将菌液通过接种环连续划在固体培养基表面，B错误；稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基中进行培养，C错误。
3．【答案】B 【解析】　图中①～③的过程中加入油烟污染物作为唯一碳源，能够初步筛选出能分解油烟的微生物，故该过程称为选择培养，A错误；配制固体培养基时加入琼脂，其作用是作为凝固剂，而不是为微生物生长提供碳源，C错误；分离菌种常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，但对活菌进行计数时常用稀释涂布平板法而不能用平板划线法，D错误。
4．【答案】C 【解析】　若将土壤稀释液进行灭菌，则不能筛选出能高效降解原油的菌株，C错误。
5．【答案】C 【解析】　过程①表示利用紫外线诱导基因突变，故过程①属于诱变育种，A正确；过程②可采用平板划线法或稀释涂布平板法接种，B正确；菌体随β 胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色，所以进行过程③时，应选取橙红色的菌落接种至液体培养基进行富集培养，C错误；结合题意“未突变菌不能在含有β 紫罗酮的培养基上生长”可知，只有突变菌株可以在添加了一定浓度的β 紫罗酮的培养基上生长菌落，因此该培养基具有选择功能，D正确。
6．【答案】　B 【解析】　要分离硝化细菌，应该用以铵盐为唯一氮源的培养基，培养基中不能加入牛肉膏蛋白胨，A错误；平板划线法不能用于菌落计数，C错误；若空白对照组上长出了菌落，则说明培养基被污染了，实验数据无效，需重新实验，D错误。
7．【答案】C 【解析】　显微镜直接计数法无法区分死菌和活菌，A正确；稀释涂布平板法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故而统计值比实际值小；显微镜直接计数法计数时不能区分死菌和活菌，故测定的微生物数量往往大于实际的活菌数，因此两种计数方法其统计值与实际值相比，均有差异，但产生差异的原因不同，B正确；稀释涂布平板法观察到的是菌落的形态特征，而不是微生物的形态特征，显微镜直接计数法观察到的是微生物的形态特征，C错误。
8．【答案】C 【解析】　要探究微生物种类和数量的变化，应采用固体培养基，用稀释涂布平板法进行接种，液体培养基无法观察到菌落，不便区分微生物种类，平板划线法不能对微生物进行计数，A、B错误；每组至少设置三个平板，避免偶然性，确保实验结果的准确性，C正确；对照组还需要设置接种没有覆盖保鲜膜的西瓜的瓜瓤浸出液的平板，D错误。
9．【答案】B 【解析】　根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲菌可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A正确；乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正确；可以利用该平板来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以是菌落周围深蓝色圈的大小，D正确。
10.【答案】C 【解析】　步骤③筛选分解尿素的细菌的培养基中，应以尿素为唯一氮源，不能再含有其他氮源，C错误。
二、多选题
11．【答案】ABC 【解析】　由图观察可知，乙中的菌落A是野生型菌种，菌落B为精氨酸依赖型菌株，B可作为鸟氨酸发酵的优良菌种，D错误。
12．【答案】AD 【解析】　对于浓度较高的菌液，稀释倍数不够大，所得到的菌落不一定是由单一的细胞繁殖而成的B错误；平板划线法中多次划线的目的是降低菌种浓度，经过连续划线才有可能得到由单一的细胞繁殖而成的菌落，这种菌落才符合要求，C错误。
三、非选择题
【答案】(1)以尿素为唯一氮源　为细菌生长提供无机盐、作为缓冲液维持培养液的pH　
(2)稀释涂布平板法　未接种的空白培养基　检测培养基是否被污染　
(3)105或106　偏小　当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
【答案】(1)稀释　
(2)以除草剂为唯一氮源的固体培养基　前　湿热灭菌　
(3)N2　该除草剂　 (4)稀释涂布平板法　1.6×109
【解析】　(3)根据题中信息“该除草剂的培养基不透明”，则可知无透明带菌落利用的氮源并不是除草剂，而是空气中的N2，有透明带菌落利用的氮源为该除草剂。(4)接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法还可用于对微生物进行计数。在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1 mL，培养后菌落数目分别为155、160、176、149，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为(155＋160＋176＋149)÷4÷0.1×106＝1.6× 109(个)。
15.【答案】(1)寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找（或酵母菌生长繁殖时，将产生一定量的自发突变，一旦“耐酸突变”发生，耐酸突变个体因自然选择存活于窖底泥、黄浆水等低 pH 环境中）（合理即可）
(2)使菌体与培养液充分接触；增大培养液的溶氧量 水、无机盐、碳源、氮源
(3)接种环 a-e-d-c-b（或b-c-d-e-a） 酿酒酵母
(4)得到繁殖能力强的酵母菌

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