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(共61张PPT)
微生物培养技术与应用
选修性必修三
<第二课时>
高中生物
考点
1. 微生物的基本培养技术
高考考情具体分析
(2024江苏卷)(2024山东卷)(2023重庆卷)
(2023北京卷)(2023全国卷)(2022天津卷)
(2022海南卷)
聚焦高考
2. 微生物的选择培养和计数
(2024重庆卷)(2024浙江卷)(2024宁夏卷)
(2023辽宁卷)(2023江苏卷)(2023山东卷)
(2023广东卷)(2023山东卷)
考点一
微生物的基本培养技术
考点二
微生物的选择培养和计数
内容索引
【考点一】微生物的基本培养技术
原核生物
原生生物
真菌
病毒
新冠病毒
霉菌
衣原体
草履虫
微生物
①为微生物提供合适的营养
培养基
②为微生物提供合适的环境条件
培养环境
③确保其他微生物无法混入
无菌技术
④将需要的微生物分离出来
分离培养
实验室培养微生物的条件：
【考点一】微生物的基本培养技术
一、培养基的配制
1. 培养基的概念、用途和类型
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
①概念:
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
②作用:
③类型:
按化学成分分类：
（含化学成分不明确的天然物质）
（培养基成分明确）
工业生产
天然培养基
用途
微生物的分类、鉴定
合成培养基
用途
【考点一】微生物的基本培养技术
【考点一】微生物的基本培养技术
按物理
性质分类：
按作用 分类：
（不加凝固剂）
工业生产
液体培养基
用途
观察微生物的运动、分类鉴定
（加凝固剂少）
半固体培养基
用途
固体培养基
（加凝固剂多）
用途
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
用途
选择培养基
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
用途
鉴别培养基
【考点一】微生物的基本培养技术
【考点一】微生物的基本培养技术
2. 培养基的营养成分
（1）基本成分：水、 碳源、氮源 、无机盐等营养物质。
碳源
无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-
有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等
自养微生物，并且不提供能量
异养微生物
功能：①构成细胞物质和一些代谢产物；②有机碳既是碳源又是能源。
氮源
无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等
有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等
功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等。
含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源。
【考点一】微生物的基本培养技术
无机盐
功能：
提供无机营养
调剂PH
维持渗透压
（2）常见的细菌培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的营养构成
表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
功能：
良好的溶剂
维持生物大分子结构的稳定
水
*牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等特殊营养物质
主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨
【考点一】微生物的基本培养技术
（2）特殊需求：
需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
微生物 对培养基的需求
乳酸杆菌 添加维生素
霉菌 将培养基调至酸性
细菌 将培养基调至中性或弱碱性
厌氧微生物 提供无氧的条件
注意 :培养基不一定都含有碳源、氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，分离自生固氮菌的培养基中，不需加入氮源。
培养基不一定都需加特殊营养物质，许多微生物可自行合成这些特殊营养物质。
【考点一】微生物的基本培养技术
获得 的微生物培养物。
二、无菌技术
1.目的：
纯净
2.关键：
防止 污染。
杂菌
避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触。
为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。
对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒
将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
消毒
灭菌
注意：
3.两个方面：
【考点一】微生物的基本培养技术
4.消毒与灭菌的概念及区别
项目 消毒 灭菌
作用强度 较为 的理化因素 的理化因素
作用程度 杀死物体表面或内部 微生物 杀死物体内外的 微生物
芽孢和孢子 一般不能杀灭 能杀灭
适用对象 实验操作的空间、操作者衣着和双手 微生物培养器皿、接种用具和培养基等
温和
强烈
一部分
所有
【考点一】微生物的基本培养技术
类型 适用范围 操作方法
消毒
灭菌
5.常见物品的消毒或灭菌方法
较为温和理化方法，杀死部分微生物。
强烈的理化方法，杀死所有微生物。
煮沸消毒
巴氏消毒
化学药剂
紫外线
灼烧灭菌
家庭餐具等生活用品
100℃煮沸5～6min
牛奶等不耐高温的液体
擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线照射30min
接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等
干热灭菌
物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h
湿热灭菌
培养基及多种器材和物品
高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121 ℃,15～30min
接种室、接种箱，超净工作台
（迅速彻底）
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
生物活体（皮肤、伤口）、水源等
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
【考点一】微生物的基本培养技术
1、培养物、纯培养物、菌落、纯培养的概念
二、无菌技术
接种于培养基内,在合适条件下形成 的含特定种类微生物的群体
由单一个体繁殖所获得的微生物群体
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞群体
获得纯培养物的过程
培养物
纯培养物
菌落
纯培养
特征:
大小、形状、颜色、隆起程度等。
【考点一】微生物的基本培养技术
2.接种方法：
平板划线法和稀释涂布平板法。
3.纯培养步骤：
【配制培养基】：
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖(可用蔗糖代替)、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。
如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成后，灭菌之前进行操作。
配制培养基、灭菌、倒平板、接种和分离、培养等。
【考点一】微生物的基本培养技术
【灭菌】：
a.培养基灭菌:
b.培养皿灭菌: 法
取5 ~ 8套培养皿
培养皿叠成一束
用几层牛皮纸包紧
放入干热灭菌箱内，160 ~ 170℃灭菌2h
湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法
干热灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞
包上牛皮纸，并用皮筋勒紧
压力100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15 ~ 30min
【考点一】微生物的基本培养技术
【倒平板】：
待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
倒平板的具体操作步骤如下：
④等待培养基冷却凝固后,将培养皿倒过来放置。
①拔出锥形瓶的棉塞
③用拇指和食指将培养皿打开二条稍大于瓶口的缝隙,将 培养基(10~20mL)倒入培养 Ⅲ,立即盖上皿盖。
②将瓶口迅速通过火焰
【考点一】微生物的基本培养技术
注意：
(1)培养基要冷却到 50 ℃左右时开始倒平板,温度过高会 烫手,过低培养基又会凝固
(2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰,通过灼烧灭菌,防 止瓶口的微生物污染培养基。
(3)倒平板时,将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,不要 完全打开,以免杂菌污染培养基。
(4)平板凝固后,要将平板倒置。因为平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,平板倒置后,既可避免培养基表面的水分过快地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。
(5)在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿 底之间的部位,那么这个平板不能用来培养微生物。因为空 气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
(6)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行,避免杂菌污染。
【考点一】微生物的基本培养技术
【接种和分离】：
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。
方法：
平板划线法
原理：
平板划线法操作步骤：
①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红
②在火焰旁冷却接种环。同时拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞
③将试管口通过火焰
④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
【考点一】微生物的基本培养技术
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。
⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞
⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖
【考点一】微生物的基本培养技术
注意：
(1)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
(2)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(3)划线时最后一次划线不要与第一次划线相连。
(4)划线时力度大小要适当，避免用力过大将培养基划破。
(5)操作第一步即取菌种之前以及每次划线之前都需要将接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的不同：
【考点一】微生物的基本培养技术
第一次划线灼烧
避免接种环上可能存在的微生物污染培养基
1
每次划线前灼烧
杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使下次划线的菌种均来自上次划线的末端
2
最后一次划线结束灼烧
杀死接种环上残留的菌种,避免微生物污染环境和感染操作者
3
【考点一】微生物的基本培养技术
【培养】：
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入 28℃ 左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养 24 ~ 48h。
未接种的培养基直接培养起什么作用？
做空白对照，若培养后培养基表面无菌落，则说明培养基没有污染。
【考点一】微生物的基本培养技术
在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
这些菌落的颜色、大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
【结果分析】：
在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。
如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
对点练习
1．（2024·陕西·一模）在微生物的培养过程中，离不开培养基的配制和灭菌技术。下列相关叙述正确的是（ ）
A．使用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，需在100kPa、121℃条件下维持15~30min
B．不同微生物生长所需的pH不同，配制完成的培养基在灭菌后按需要调节相应的pH
C．为防止杂菌污染，灭菌后的培养基应立即倒入培养皿中并盖上皿盖，待冷却后倒置
D．进行接种工作前，需用紫外线对接种室、接种箱、工作台及人的双手进行消毒处理
A
对点练习
2．（2025·广西河池·一模）为检测医院排放的医疗废水中是否含有对链霉素 (一种抗生素) 有抗性的细菌，某学习小组进行了如下实验：
①配制LB培养基(主要成分是蛋白胨、酵母膏和NaCl)，灭菌后倒平板，备用；
②取少量医疗废水稀释一定的倍数，分别接种到三个平板上；
③将接种后的三个平板置于恒温培养箱培养 24-48h；
④定期观察并统计平板上菌落的数量、形态和颜色等。
下列有关分析错误的是（ ）
A．LB培养基中能为细菌提供氮源的只有蛋白胨
B．①过程中，LB培养基灭菌前需要将pH调至中性或弱碱性
C．②过程中，接种前三个平板均需要添加等量的链霉素
D．③过程中，还需要将一个未接种的平板置于恒温培养箱培养
A
对点练习
3．（2024·安徽合肥·三模）滥用抗生素会导致“超级细菌”（对多种抗生素有高耐药性）的产生。某实验小组研究细菌产生青霉素抗性与青霉素之间的关系，过程及结果如下图。下列叙述正确的是（　　）
A．可通过提高抗生素浓度避免超级细菌的产生
B．用接种环在培养基上连续划线获得实验菌落
C．图中含青霉素的培养基的菌落周围会出现抑菌圈
D．细菌培养基在使用前、后均需经过灭菌处理
D
【考点二】微生物的选择培养和计数
①实验室中微生物筛选的原理：
人为提供 的条件（包括 、 和 等），同时 。
有利于目的菌生长
抑制或阻止其他微生物的生长
营养
温度
pH
②选择培养基概念：
二、无菌技术
1.选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。
【考点二】微生物的选择培养和计数
③选择培养基四种常见制备方法或实例：
加入某些特定的物质（前提是培养基具备全部营养成分）
原理
依据某些微生物对某些物质的抗性,在培养基中加入某些物质,以“抑制”不需要的微生物生长,“促进”所需要的微生物生长
举例
培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长,但不影响金黄色葡萄球菌的生长,从而可将该菌分离出来
在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、 放线菌的生长,从而分离得到酵母菌和霉菌
【考点二】微生物的选择培养和计数
改变培养基的营养成分
可分离自生固氮微生物,非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存
培养基缺乏氮源时
异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的二氧化碳制造有机物而生存
培养基缺乏有机碳源时
【考点二】微生物的选择培养和计数
利用培养基中的“特定化学成分”进行分离
当石油为唯
一碳源时
不能利用石油的微生物不能生存,能够利用石油的微生物能生存,从而分 离出能降解石油的微生物
当尿素是唯
一氮源时
不能利用尿素的微生物因缺乏氮源而不能正常生长,能够分解尿素的微生物能利用尿素作为氮源而正常生长
当培养基中含有丰富的纤维素时
能分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖
【考点二】微生物的选择培养和计数
通过某些“特殊环境”进行分离
可分离耐盐菌,其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存
在高盐环境中
可分离得到耐高温的微生物,其他微生物在高温中因酶失活而无法生存
在高温环境中
【考点二】微生物的选择培养和计数
稀释涂布平板法
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
①方法：
2.微生物的选择培养——稀释涂布平板法
②基本操作：
A、梯度稀释菌液 B、涂布平板
稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。
细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表 3~8 cm的土壤层。铲去表层土 3 cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。
1.土壤取样
③操作步骤：
取样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌，操作完整后，一定要洗手。
【考点二】微生物的选择培养和计数
2.样品的稀释（梯度稀释菌液）
将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取 1mL上清液加入盛有 9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
1×10
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1×102
1×103
1×104
1×105
1×106
1×107
9 mL
无菌水
90mL无菌水
10g
【考点二】微生物的选择培养和计数
取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。
1
将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
2
将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。
3
用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
4
3.涂布平板
【考点二】微生物的选择培养和计数
4.恒温培养
恒温培养箱
待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。
【考点二】微生物的选择培养和计数
注意：
10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，计算时，不要忽略；
1
由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证；
2
过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行；
3
将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。
4
要设置空白对照，且一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。
5
【考点二】微生物的选择培养和计数
比较 平板划线法 稀释涂布平板法
工具 接种环 涂布器
原理 在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
特点 方法简单，但不适宜计数。 单菌落更易分开，可以计数，但操作复杂。
结果
共同点 使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落 常用微生物分离方法比较
【考点二】微生物的选择培养和计数
1.间接计数法——活菌计数法（即稀释涂布平板法）
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
① 一般选择菌落数为30～300的平板计数。
②在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
③ 适当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
① 统计的菌落数往往比活菌的实际数目少；
② 统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
1. 原 理
2. 计数原则
3. 结果分析
二、微生物的数量测定
原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
【考点二】微生物的选择培养和计数
4. 计算公式
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；
V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；
M：代表稀释倍数。
【考点二】微生物的选择培养和计数
1.间接计数法——活菌计数法（即稀释涂布平板法）
1. 原 理
2. 优点
3. 缺点
利用特定的______________或_______________在________下观察、计数，然后再计算__________的样品中微生物的数量；
细菌计数板
血细胞计数板
显微镜
一定体积
① 统计结果一般是________________________不能区分死菌与活菌。
② 个体小的细菌在显微镜下难以观察。
活菌数和死菌数的总和
*血细胞计数板常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等；
*细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数；
快速直观
设备简单，能观察微生物的形态特征。
__________
为了避免上述缺点，可以染色后进行显微镜计数。
【考点二】微生物的选择培养和计数
1、实验原理
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成_____的微生物才能分解尿素，利用 的 培养基，可以从土壤中分离出 的细菌。
脲酶
以尿素作为唯一氮源
选择
分解尿素
呈碱性，遇酚红指示剂呈红色。
二、微生物的数量测定
【考点二】微生物的选择培养和计数
2、实验流程
细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3～8cm 的土壤层。因此，取样时一般要铲去表层土。
注意事项：
取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。
（1）土壤取样
【考点二】微生物的选择培养和计数
2、实验流程
①选择培养基：
以尿素为唯一氮源
②牛肉膏蛋白胨培养基：
作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用
组分 含量
KH2PO4 1.4g
Na2HPO4 2.1g
MgSO47H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
琼脂 15.0g
H2O 定容至1000ml
【考点二】微生物的选择培养和计数
（3）样品的稀释
不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。
① 测细菌数：一般用104、105、106稀释液
进行平板培养。
② 测放线菌数：一般用103、104、105稀释液。
③ 测真菌数：一般用102、103、104稀释液。
初次实验时，对于稀释的范围没有把握，可以选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。
【考点二】微生物的选择培养和计数
（4）微生物的培养与观察
① 培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。
细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。
② 观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
③ 一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。
【考点二】微生物的选择培养和计数
3.实验结果分析与评价
选择培养基具筛选作用
选择培养基上的菌落数目远少于完全培养基上的菌落数目
得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板
操作成功
若选取同一种土样,统计结果应接近
比较各重复组
有无杂菌污染的判断
培养基是否具筛选作用
样品稀释评价
重复组的结果
对照组的培养皿中无菌落生长
未被杂菌污染
对照组的培养皿中有菌落生长
被杂菌污染
【考点二】微生物的选择培养和计数
4. 菌种鉴定
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。
培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。
原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性
CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2
脲酶
呈碱性，遇酚红指示剂呈红色。
【考点二】微生物的选择培养和计数
拓展1.分解纤维素的微生物的分离
方法
利用富含纤维素的选择培养基进行选择培养
因为培养基中含有丰富的纤维素,所以能够分解纤维素的微生物具有更多 的生存机会而大量繁殖
原理
培养基的成分
鉴定原理
纤维素
刚果红
以为 唯一碳源;加入 染料
红色复合物
刚果红
红色消失, 出现透明圈
纤维素
纤维素
分解菌
纤维素酶
【考点二】微生物的选择培养和计数
菌落特征鉴别法 根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别
指示剂鉴别法 如以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂（酸性情况下呈黄色；碱性情况下呈红色），培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素
染色鉴别法 如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物
2. 微生物的鉴别方法
项目 选择培养基 鉴别培养基
原理
用途
举例
图示
【考点二】微生物的选择培养和计数
加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质
加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应
培养、分离出目标微生物
鉴别目标微生物
培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌
可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈黑色)
选择培养基与鉴别培养基的比较
对点练习
1．（2024·四川南充·一模）研究员从柽柳根际土壤中筛选出了某种耐盐碱促生菌，对其分别进行了耐盐碱能力测试和对植物生长发育的影响实验，发现该菌株不仅能在盐浓度为0~160g/L、pH为7.0~11.0的条件下生长，还能显著促进拟南芥、玉米在盐碱胁迫下的生长发育。下列叙述错误的是（ ）
A．筛选该促生菌株需要用高盐、碱性的选择培养基
B．该促生菌株耐盐碱能力测试的试验中自变量是盐浓度
C．筛选到的促生菌株可用稀释涂布平板法进行纯培养并计数
D．该促生菌株可以作为研究盐碱地专用微生物肥料的候选菌株
B
对点练习
2．（2024·吉林长春·一模）芽孢杆菌耐高温，是常见的蛋白酶生产菌。培养基中的蛋白质被蛋白酶降解后，会在菌落周围形成透明圈。如图是筛选蛋白酶高产菌株的过程。下列叙述错误的是（ ）
A．70~80℃水浴10min的目的是杀死部分非芽孢杆菌
B．在酒精灯火焰旁将样品用无菌水稀释并涂布接种
C．以奶粉为唯一氮源的培养基能起到选择作用
D．透明圈与菌落直径比值较小的菌株为高产菌株
D
对点练习
3．（2024·浙江湖州·一模）香蕉感染土壤中的尖孢镰刀菌会引发枯萎病。为防治香蕉枯萎病，研究人员从土壤中筛选能抑制尖孢镰刀菌的拮抗菌株，流程如下图所示。下列相关操作叙述正确的是（ ）
A．土壤取样后，用蒸馏水稀释获得悬浮液
B．在固体培养基甲中挑选区域1的菌落进行扩大培养
C．在固体培养基乙上均匀涂布含有尖孢镰刀菌的菌液
D．应挑选滤纸片C中的菌株进行进一步纯化获得目的菌株
C
真题演练
1．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（ ）
A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌
B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养
C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数
D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰
C
真题演练
2．（2023·重庆·高考真题）垃圾分类有利于变废为宝，减少环境污染。如图为分类后餐厨垃圾资源化处理的流程设计。下列叙述错误的是（ ）
A．压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品
B．添加的木屑有利于堆肥体通气，还可作为某些微生物的碳源
C．X中需要添加合适的菌种，才能产生沼气
D．为保证堆肥体中微生物的活性，不宜对堆肥体进行翻动
D
真题演练
3．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ）
A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落
B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验
C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙
D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少
C
真题演练
4．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是（ ）
A．镍是组成脲酶的重要元素
B．镍能提高尿素水解反应的活化能
C．产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖
D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
B
真题演练
5．（2023·辽宁·高考真题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m ）。下列叙述错误的是（ ）
A．采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理
B．细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置
C．同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值
D．稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高
D
真题演练
6．（2024·吉林长春·一模）芽孢杆菌耐高温，是常见的蛋白酶生产菌。培养基中的蛋白质被蛋白酶降解后，会在菌落周围形成透明圈。如图是筛选蛋白酶高产菌株的过程。下列叙述错误的是（ ）
A．70~80℃水浴10min的目的是杀死部分非芽孢杆菌
B．在酒精灯火焰旁将样品用无菌水稀释并涂布接种
C．以奶粉为唯一氮源的培养基能起到选择作用
D．透明圈与菌落直径比值较小的菌株为高产菌株
D
真题演练
7．（2024·宁夏四川·高考真题）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。
(1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是 ______ 。
(2)该同学从100 mL细菌原液中取1 mL加入无菌水中得到10 mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 _____个/mL。
(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是_____，冷却的目的是_____ 。
(4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是____ ，判断依据是 ______ 。（答出两点即可）
(5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈 ______色。
真题演练
【答案】
(1)前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌
(2)5000
(3) 杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染 防止温度过高杀死菌种
(4) A A消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高
(5)黑【注意】字体安装之后
必须要重启PPT，字体
（适用于字体种类较少的情况） 才能显示出来。
找到压缩包中 鼠标左键双击 双击后，选择左上角的“安装”
的字体文件夹 字体文件
【注意】字体安装之后
也必须重启PPT。
（适用于字体种类较多的情况）
找到压缩包中 打开后有较多字体安装包，Ctrl+A全选 将字体文件包粘贴到：C盘 >
的字体文件夹 windows文件夹 > fonts文件夹
（Mac系统的安装与windows系统类似，仅提供路径）
找到压缩包中的字体文件夹 应用窗口中打开“字体册”
鼠标左键双击字体文件 界面左上方点击“+”
双击后，选择左上角的“安装” 选中要安装的字体，点击“打开”
【注意】Mac系统与Windows系统一样，都需要重启PPT，字体才能显示出来。
“明明自己电脑上安装成功了，播放也正常的，但拿去教室
电脑上播放，字体又变得乱七八糟！”
老师们自己电脑上安装成功了，代表安装在自己电脑上的C盘
（一般情况下），但如果教室电脑上没有安装过PPT内所用的
特殊字体，在打开PPT时，会出现字体不一或缺失的情况。
把字体文件复制粘贴到教室电脑上的 C盘> windows > fonts文件夹里即可。
在教室电脑上找到压 打开后框选中字体 将字体文件包粘贴到：C盘 >
缩包中的字体文件夹 包，Ctrl+C复制 windows文件夹 > fonts文件夹
【注意】转图片后，图
片会自动对齐页面正中
在自己的电脑上将有特殊字体的可编辑文字转化成图片即可。 心，需自己移动到原位
选中含有特殊字体的可编 Ctrl+V粘贴，点击右下角 点击“粘贴选项” 下右边
辑文字框，Ctrl+X剪切 图标 的图标，选择粘贴为图片
“下载了字体，安装也成功了，电脑也重启了，但PPT内却
找不到这款字体了？！”
一般这种情况出现在有多种字重的情况（例：阿里巴巴普惠
体），部分字体隐藏了。字重：可以理解为改款字体的不同粗细呈现
最直接的方法是 完毕后，
打开PPT，直接搜索字体+字重。
前提是确保完成一下操作：①字体安装后重启PPT； ②把这款字体整个系列（全部字重）都已下载

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