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土壤中分解尿素的细菌的分离与记数
实验目的：
1． 学习固体培养基的制备方法
2． 学习土壤微生物的分离的方法
3． 学习细菌平板记数的方法
实验意义：
农业中所使用的化学配料绝大多数都能够被植物直接吸收，而尿素在土壤中则需要先经微生物的分解作用才能够被植物吸收。通过对土壤中分解尿素的细菌的分离过程，可以让学生对微生物有更深课的了解和直观的认识，培养学生学习微生物学的初级实验技能，还可以引发学生学习微生物学的学习兴趣。
实验原理：
将细菌接种到以尿素为唯一氮源的选择培养基上进行培养。在这种情况下,其他微生物因缺少氮素而不能生长,只有分解尿素的微生物或者自生固氮微生物才能正常生长繁殖。经稀释的单个细菌在固体培养基会形成菌落，菌落的数量可以反映稀释液中细菌的浓度。
实验过程：
1． 土样的采集
在长期使用尿素的农田内采集3-8cm深的土样200g用信封或牛皮纸袋带回实验室。
2． 培养基的制备
培养基配方
KH2PO4
1．4g
Na2HPO4
2．1g
MgSO4· 7H2O
0．2g
葡萄糖
10．0g
尿素
1．0g
琼脂
15．0g
将上述前5种物质溶解后，用容量瓶定容至1000ml。然后倒入大搪瓷烧杯中，并向其中加入琼脂15．0g，用电炉加热至琼脂完全溶解。在培养基半冷却时分装至经高压灭菌的培养皿中。冷却备用。
3． 样品的稀释
取10g土样容于90g水中，充分摇匀，然后在此溶液中取菌液1ml加无菌水9ml中继续稀释。以此方式继续将菌液稀释成一定浓度梯度。将稀释10000倍，100000倍及1000000倍的菌液各取0.1ml分别加入到事先加入培养基的培养皿中，轻轻摇动培养皿使菌液分布均匀。每种浓度重复3次。 分别标记为104，1#;104，2#;104，3#;105,4#;105,5#;105,6#;106,7#;106,8#;106,9#;再取一个未接种的培养皿标记为:空白，10#。
4． 培养
将1#--11#培养皿标记后室温培养48～72小时。
5． 记数
记录各浓度（菌液稀释倍数）下每培养皿内菌落的数目，计算3个培养皿内的平均值，进而计算出每克土壤中所含的细菌的数目,填写下表。
稀释倍数
编号
菌落数
平均值
备注
104
1
2
3
105
4
5
6
106
7
8
9
空白
10

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